专利名称：用于诊断和监控具有急性胸痛和不具有心肌梗塞的患者中的心肌缺血的方法
用于诊断和监控具有急性胸痛和不具有心肌梗塞的患者中的心肌缺血的方法本发明涉及用于诊断受试者中缺血状态的方法和用于监控受试者中缺血状态的严重性过程的方法，所述受试者显示一般急性胸痛或急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于(非ST段抬高型)心肌梗塞的诊断标准。此外，本发明涉及用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法和决定干预的方法。还包含的是用于执行本发明的方法的试剂盒和设备。本发明的方法基于所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)和任选的肝细胞生长因子(HGF)的测定，并且比较sFLT-1和任选的HGF的量与至少一个参考量。本发明还包含的是执行本发明的方法的试剂盒或设备。现代医学的一个目的是提供个人化或个体化治疗方案。这些是考虑到患者的个体需要或危险的治疗方案。特别重要的危险是心血管并发症特别是急性心血管事件的存在。心血管并发症属于西半球中发病率和死亡率的最主要原因。对于患有心血管并发症的个人 的个体治疗，可靠诊断对所述个人的治疗成功具有重要影响。这对于显示急性冠状动脉综合征(ACS)的体征和症状的患者是特别重要的。急性冠状动脉综合征的临床症状认为通过急性心肌缺血引起。具有胸痛或不稳定心绞痛或急性冠状动脉综合征(ACS)的体征和症状的患者通常作为急诊对其医生呈现或出现于急诊室。这些患者的临床评价包括特别涉及现有心血管疾病或其危险因素的证据的医疗史，如描述的症状类型的分析以及与急性冠状动脉综合征相关的临床体征，例如肺水肿、低血压和/或心动过速或心动过缓的证据(Circulation 106 :1893, 2002 / Task force onPractice guidelines of the American Heart Association)。此外，执行 ECG 和实验室测试。急性胸痛是ACS的最主要症状。然而，胸痛对于心血管疾病或ACS不是特异性的。胸痛的症状可能源于血管病症例如肺栓塞、主动脉夹层或肺动脉高压，或源于肺部疾病例如胸膜炎、肺炎、气管支气管炎和自发性气胸。急性胸痛的症状还可以源于胃肠道疾病例如食管返流、消化性溃疡、胆囊疾病和胰腺炎、急性痛的肌肉骨骼原因包括肋软骨炎、颈间盘疾病、创伤或扭伤。带状疱疹也引起急性胸痛。此外，惊恐障碍需要考虑作为鉴别诊断。临床心脏性急性胸痛可以通过临床特征加以鉴定，例如胸骨后胸压或对于颈、颚、上腹部、肩或左臂偶然的灼烧性或重度放射。急性胸痛的严重性通常从心绞痛到不稳定心绞痛和心肌梗塞增加。直接原因包括身体和情绪应激或寒冷。严重性还与范围为心绞痛中的小于2分钟到心肌梗塞中的超过30分钟的胸痛持续时间相关。虽然这些症状在严重病例中是相当特征性的，但心脏性胸痛的轻度病例可能难以与非心脏性原因分开。(BraunwaldHeart Disease,第 49 章，第 1196 页)。具有急性冠状动脉综合征的体征的患者具有经历不可逆心脏损伤或甚至心脏死亡的显著增加的危险，并且因此需要在具有非创伤性胸部症状的患者中加以鉴定(Morrow 等人，National academy of clinical biochemistry guidelines Clinicalcharacteristics and utilization of biochemical markers in acute coronarysyndrome, 2007, Circulation ；115 ;356_375)。急性冠状动脉综合征由冠状动脉中的突然阻塞引起，显著减少或切断对于心肌(心脏肌肉)的连接区域的血液供给且导致缺血(血液供给的缺乏)。心脏组织在严重和/或持续缺血的情况下变得坏死。心肌梗塞(MI)也称为心脏病发作，其已知为心肌(心脏组织)中由于缺血的细胞坏死，如由The Joint ESC/ACCF/AHA/WHFTask Force for the Redefinition of Myocardial Infarction (The Joint EuropeanSociety of CardioIogy/American College of Cardiology Committee !Universaldefinition of myocardial infarction, European Heart Journal (2007),28,2525 -2538)描述的。血栓是阻塞冠状动脉的最常见原因，所述阻塞冠状动脉一般而言已通过粥样斑局部变窄。粥样斑可能破裂或撕裂，释放使得血小板更粘性且促进血栓形成的物质。在许多情况下，血栓一般在一天左右内自身溶解。然而，到此时，某些心脏损害可能已经发生。 医疗史(冠状动脉疾病CAD史)的评价是用于诊断显示出ACS症状(例如胸痛超过20分钟)的患者的一个标准。这些患者另外使用心电图(ECG)和肌钙蛋白测试进行诊断。在呈现时最初不能诊断的ECG和不符合非ST段抬高型心肌梗塞的诊断标准的肌钙蛋白测试结果的情况下，在4 - 8小时后重复这个程序。在ECG和肌钙蛋白测定继续不符合心肌梗塞的诊断标准的情况下，伴随排除心肌梗塞的诊断允许患者离开。心电图(ECG)提供用于诊断的重要信息。特别地，如果ECG显示抬高的ST段，那么诊断ST段抬高型心肌梗塞(STEMI)。如果ECG未显示抬高的ST段，那么当在分别患者的样品中检测到心脏肌钙蛋白时，诊断非ST段抬高型MI (NSTEMI)。不具有诊断性ECG和具有低于指示心肌梗塞的量的心脏肌钙蛋白水平的患者怀疑具有不稳定型心绞痛(UAP)。不稳定心绞痛和NSTEMI视为紧密相关的状况，共享类似的临床表现。然而，它们在其严重性中不同。NSTEMI通过引起不可逆心肌损伤的缺血区别于不稳定心绞痛，所述不可逆心肌损伤可通过心肌坏死的生物标记检测(Morrow等人，在上述引文中)。在所有描述的病例即STEMI、NSTEMI和UAP中，患者根据诊断进行治疗。在ECG (心电图)显示ST段抬高的情况下，诊断ST段抬高型心肌梗塞，并且患者考虑用于再灌注疗法的评价。如果ECG保持不能诊断的，其包括ECG中的ST或T波变化，那么对于非ST段抬高型心肌梗塞诊断性的肌钙蛋白T或I结果揭示最终诊断。根据目前建议(The Joint European Society of Cardiology/American College of CardiologyCommittee Universal definition of myocardial infarction,European Heart Journal(2007)，28，2525 - 2538)，具有胸痛或急性冠状动脉综合征的体征和症状的大多数患者呈现不能诊断的ECG和不符合非STEMI标准的肌钙蛋白结果。此类患者可以具有心肌梗塞但通常在体征/症状发作后的前4 - 6小时内呈现，即在心脏特异性坏死标记开始从心肌中释放且以增加量在血清/血浆中循环前。另一组患者可以具有与心脏病症完全无关的胸痛，并且因此将不发展如通过增加的肌钙蛋白量指示的特征性ECG变化或心脏坏死。此类患者将最终诊断有非心脏性胸痛。在就肌红蛋白(肌球蛋白)和/或心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)测试的患者亚组中，将呈现关于通过与ECG中的变化可能相关的肌钙蛋白中的增加以后诊断的心肌梗塞的证据。如所示的，具有胸痛或呈现症状的患者中的目前努力靶向心肌梗塞的鉴定或其排除。到目前为止，心电图和肌钙蛋白已成为心肌梗塞的阳性诊断或其排除的关键点。
肌钙蛋白是心肌的结构蛋白质且在心肌组织坏死或凋亡后释放。此外，肌钙蛋白视为对于心肌组织特异性的，并且因此循环中肌钙蛋白水平的增加视为心肌梗塞的指示物。不幸的是，肌钙蛋白水平仅在心肌梗塞已发生后4 - 6小时增加，并且因此导致延迟诊断。心肌梗塞的这种延迟识别可能导致例如通过PCI的延迟治疗，并且相应地，心肌可能变得坏死，这可以通过较早干预得到挽救。克服心肌梗塞识别中的这种延迟的尝试已包括肌红蛋白或心脏脂肪酸结合蛋白的使用。心脏脂肪酸结合蛋白(H-FABP)是低分子量细胞质蛋白质且在心肌中丰富存在。已认识到当心肌丧失其功能时，H-FABP已从心肌中释放，所述心肌在其变得坏死前是良好的。已清楚显示超过5700 pg/ml的H-FABP水平指示肌钙蛋白的未来增加和心肌梗塞，并且发现低于2500 pg/ml的H-FABP水平与MI无关，参见WO 2008/145689。类似地，肌红蛋白代表在心肌梗塞后早期进入循环的另一种分子。已显示高于77 ng/ml的肌红蛋白浓度指示未来肌钙蛋白增加且因此指示心肌梗塞。相比之下，低于55 ng/ml的肌红蛋白浓度使得未来肌钙蛋白增加和因此梗塞的发展不可能，参见WO 2009/033831o相应地，血清或血浆中肌红蛋白和/或H-FABP的测定用于补偿肌钙蛋白测定的某些局限性，即肌钙蛋白在循环中的晚期出现(在4 - 6小时后)，并且代表MI的早期诊断中的帮助，并且因此如果肌红蛋白或心脏脂肪酸结合蛋白预测肌钙蛋白的发展，那么允许干预。通常使呈现胸痛或急性冠状动脉综合征的症状的患者离开，如果症状消退或如果他们不符合MI的标准。然而，此类患者可能仍处于心肌梗塞的增加危险中，如目前由连续ECG记录显不的(Tvivoni 等人 J. Am Coll Cardiol 53,2009,1422 - 24, Scirica Am CollCardiol 53,2009,1411 - 1421)。在这个研究中，短至I分钟和小至1A mm的ST抑制指示暂时缺血和后果不良。然而，这种方法并不容易应用并且要求计算机辅助技术，并且仅在未来可以完成。这强调缺血识别的重要性，这是在坏死和代谢性心肌异常之前的事件。概括上文，存在鉴定呈现胸痛或急性冠状动脉综合征的体征或症状的患者中的缺血的方法的迫切需要，以测定缺血程度、其持续时间以及与缺血相关的功能异常。这些方法还应允许排除缺血和呈现胸痛或急性冠状动脉综合征的症状的患者的进一步分类，以便提供改善诊断和治疗操作。因此，存在关于允许受试者中缺血的可靠快速诊断的诊断和预后装置(means)和方法的明确需要，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，并且具有低于指示心肌梗塞的水平的心脏肌钙蛋白量。优选地，个体还将具有不能诊断的ECG，优选未显示ST段抬高的ECG。该装置和方法应不仅允许缺血的诊断，还应允许缺血程度及其变化的评估，并且帮助区分胸痛的心脏和非心脏原因。此外，该方法应帮助鉴定具有心脏性胸痛的患者亚组，其展示进一步心脏生物标记例如肌钙蛋白的水平，而且，视情况而定，低于对于缺血特征性的诊断参考量的肌红蛋白或H-FABP。此外，缺血的定量在缺血的持久或持续时期的情况下和在复发性缺血发作的事件中将是可能的。该方法和装置应另外允许鉴定对心脏干预敏感的受试者，以决定受试者的心脏干预是否适当，并且在肯定的情况下，应选择哪种疗法。该方法和装置应避免如上展开的目前技术的至少某些缺点。因此，本发明潜在的技术问题必须视为提供用于符合前述需要的装置和方法。
该技术问题通过特征在于权利要求和本文下述内容的实施方案得到解决。本发明提供了基于所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较，用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。该方法可以包括至少一个下述步骤a)测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-1( sFLT-1)或其变体的量，b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和c)基于步骤b)中获得的信息和优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断缺血状态。相应地，本发明涉及用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量，
b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和
c)基于步骤b)中犾得的彳目息和优选地基于a)和b)中犾得的彳目息，诊断缺血状态。此外，本发明涉及用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)比较所述受试者的样品中测定的可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量，和
b)基于步骤a)中犾得的彳目息，诊断缺血状态。此外，本发明涉及用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)基于所述受试者的样品中测定的可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较，诊断缺血状态。本发明还提供了基于所述受试者的样品中至少在2个不同时间点测定的可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较,用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。该方法可以包括至少一个下述步骤a)至少在2个不同时间点测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量，b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和c)基于步骤b)中获得的信息和优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断在至少2个不同时间点的缺血状态。本发明相应地还涉及用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括步骤
a)至少在2个不同时间点测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量，和
b)比较如步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和
c)基于步骤b)中获得的信息和优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断在至少2个不同时间点的缺血状态，以便监控缺血状态。此外，本发明涉及用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)比较受试者的样品中至少在2个不同时间点测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和b)基于步骤a)中获得的信息，诊断缺血状态，以便监控缺血状态。此外，本发明涉及用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)基于受试者的样品中至少在2个不同时间点测定的可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较，监控缺血状态。在本发明的前述方法的一个实施方案中，在另外步骤aa)中在所述受试者的样品中另外测定肝细胞生长因子(HGF)或其变体的量，并且在步骤bb)中与关于HGF的至少一个参考量比较。相应地，在步骤c)中，基于sFLT-1或其变体和HGF或其变体的测定量和sFLT-1的量与关于sFLT-1的至少一个参考量的比较和HGF的量与关于HGF的至少一个参考量的比较，诊断缺血状态。优选地，首先测定sFLT-1的量且随后测定HGF的量，然而，还考虑了以任何次序测定sFLT-1和HGF的量，即同时，或首先sFLT-1和随后HGF，或首先HGF和随后sFLT-1。 在本发明的一个进一步实施方案中，通过测定所述受试者的样品中肝细胞生长因子HGF或其变体的水平，诊断显示急性冠状动脉综合征的体征和症状、但未达到关于心肌梗塞的诊断标准的受试者中的缺血状态。同样地，在本发明的一个进一步实施方案中，通过在至少2个不同时间点测定所述受试者的样品中肝细胞生长因子HGF或其变体的量，监控显示急性冠状动脉综合征的体征和症状、但未达到关于心肌梗塞的诊断标准的受试者中的缺血状态。已揭示HGF是递送关于缺血的信息的独立缺血标记，这在许多情况下与由sFLT-1提供的信息一样良好。相应地，在某些情况下，sFLT-1给出更佳信息；在某些情况下，HGF给出更佳信息；并且在某些情况下，2种标记的信息可以被说成是相等的。在本发明的前述方法的一个实施方案中，在另外步骤aa)中在所述受试者的样品中另外测定fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量,并且在步骤bb)中与关于fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)的至少一个参考量比较。相应地，在步骤c)中，基于sFLT-1或其变体和HGF或其变体的测定量和sFLT-1的量与关于sFLT-1的至少一个参考量的比较和HGF的量与关于HGF的至少一个参考量的比较，诊断缺血状态。优选地，首先测定HGF的量且随后测定sFLT-1的量，然而，还考虑了以任何次序测定sFLT-1和HGF的量，即同时，或首先sFLT-1和随后HGF，或首先HGF和随后sFLT_l。相应地，本发明涉及用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)测定所述受试者的样品中肝细胞生长因子HGF或其变体的量，
b)比较步骤a)中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，和
c)基于步骤b)中犾得的彳目息和优选地基于a)和b)中犾得的彳目息，诊断缺血状态。此外，本发明涉及用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)比较所述受试者的样品中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，和
b)基于步骤a)中犾得的彳目息，诊断缺血状态。此外，本发明涉及用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)基于所述受试者的样品中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量的比较，诊断缺血状态。本发明还涉及用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括步骤
a)至少在2个不同时间点测定所述受试者的样品中肝细胞生长因子HGF或其变体的量，和
b)比较如步骤a)中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，和
c)基于步骤b)中获得的信息，优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断在至少2个不同时间点的缺血状态，以便监控缺血状态。此外，本发明涉及用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠 状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)比较受试者的样品中至少在2个不同时间点测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，和
b)基于步骤a)中获得的信息，诊断缺血状态，以便监控缺血状态。此外，本发明涉及用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)基于受试者的样品中至少在2个不同时间点测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量的比较，监控缺血状态。在一个优选实施方案中，心脏肌钙蛋白的量与sFLT-1的测定和/或HGF的测定同时进行测定；心脏肌钙蛋白的量的测定还可以在sFLT-1的测定和/或HGF的测定之前。因此，通过测定sFLT-1和/或HGF的量，或任选地，进一步标记，个体的缺血状态优选与肌钙蛋白测定同时或在肌钙蛋白测定后进行测定。相应地，如果心脏肌钙蛋白量在sFLT-1和/或HGF的测定前进行测定，那么sFLT-1和/或HGF的量的测定可以推迟直到心脏肌钙蛋白的量已知时，并且仅在肌钙蛋白量低于本领域一般公认为指示心肌梗塞MI特别是NSTEMI的量的情况下，将测定sFLT-1和/或HGF的量。心脏肌钙蛋白的量甚至可以是零，即用目前可获得的测试无法检测的。在一个进一步优选的实施方案中，各自受试者的ECG与sFLT-1的测定和/或HGF的测定同时进行测定；测量ECG还可以在sFLT-1的测定和/或HGF的测定之前。因此，通过测定sFLT-1和任选的HGF的量，个体的缺血状态优选与测量ECG同时或在测量ECG后进行测定。相应地，如果ECG测量在sFLT-1和/或HGF的测定前进行，那么sFLT_l和/或HGF的量的测定可以推迟直到记录ECG时。优选地，仅在受试者的ECG未显示ST段抬高的情况下，将测定sFLT-1和/或HGF的量。优选地，在ECG显示ST段抬高的情况下，受试者将视为已患有STEMI，意指一般而言将不执行本发明的方法，其涉及在MI之前的缺血状态的诊断。此外，在前述背景中，可以同时或连续执行心脏肌钙蛋白的量的测定和/或测量ECG，包括如上文展示的sFLT-1和/或HGF的测定。医疗史(冠状动脉疾病CAD史)的评价是用于诊断显示出ACS症状(例如胸痛超过20分钟)的患者的一个标准。这些患者另外就达到进一步标准进行诊断，即一方面使用心电图(ECG)，和另一方面肌钙蛋白测试。在呈现时ECG不符合非ST段抬高型心肌梗塞的诊断标准和肌钙蛋白测试结果不符合心肌梗塞的诊断标准的情况下，在4 - 8小时后重复这个程序。在ECG和肌钙蛋白测定继续不符合心肌梗塞的诊断标准的情况下，伴随排除心肌梗塞的诊断允许患者离开。用于诊断心肌梗塞MI的最后一个标准由The Joint ESC/ACCF/AHA/WHF Task Force for the Redefinition of Myocardial Infarction (TheJoint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee Universal definition of myocardial infarction,在上述弓I文中)描述。优选地，本发明的方法是体外方法。此外，它可以包括除上文明确提及那些外的步骤。例如，进一步步骤可以涉及样品预处理或通过该方法获得的结果的评价。本发明的方法还可以用于诊断的监控、证实和子分类。该方法可以手工执行或通过自动化辅助。优选地，步骤(a)、(b)和/或(C)可以整个或部分例如通过合适的机器人和感官设备通过自动化进行辅助，用于步骤(a)中的测定或步骤(b)中计算机实现的比较。如本文使用的，术语“急性冠状动脉综合征的体征和症状” 一方面涉及这样的体征，其可以指示ACS，但也可以在除ACS外的疾病中出现。相应地，这个术语包括这样的体征，其不能明确地与ACS的出现关联，但指示关于ACS出现的概率，从而使得关于证实(纳入/排除)的进一步检查是强制性的。此类体征的一个例子是胸痛。当然，胸痛也可以源于血管病症例如肺栓塞、主动脉夹层或肺动脉高压，或源于肺部疾病例如胸膜炎、肺炎、气管支气管炎和自发性气胸；源于胃肠道疾病例如食管返流、消化性溃疡、胆囊疾病和胰腺炎、急性痛的肌肉骨骼原因包括肋软骨炎、颈间盘疾病、创伤或来自扭伤。带状疱疹也引起急性胸痛。这些形式的胸痛通常被称为“非心脏性胸痛”。另一方面，该术语涉及引起症状的心脏性急性胸痛，所述症状如胸骨后胸压或对于颈、颚、上腹部、肩或左臂偶然的灼烧性或重度放射。急性胸痛的严重性通常从心绞痛到不稳定心绞痛和心肌梗塞增加。直接原因包括身体和情绪应激或寒冷。严重性还与范围为心绞痛中的小于2分钟到心肌梗塞中的超过30分钟的胸痛持续时间相关。虽然这些症状在严重病例中是相当特征性的，但心脏性胸痛的 轻度病例可能难以与非心脏性原因分开。ACS的进一步已知症状是上腹部、臂、腕或颚不适或疼痛，无法解释的恶心或呕吐，持续呼吸短促，虚弱，眩晕，头晕目眩或晕厥以及其任何组
入
口 o然而，上文引用的症状在许多情况下可能看起来不足够特异，以允许ACS的安全和正确的诊断(或避免误诊)。例如，胸痛可以不是明确定位的。另一组患者可以具有与心脏病症完全无关的胸痛，并且因此将不发展如通过增加的肌钙蛋白量指示的特征性ECG变化或心脏坏死。此类患者将最终诊断有非心脏性胸痛。基于对于ACS典型的症状的鉴定且忽视对于ACS非典型的那些症状，心脏病学家可能能够纳入或排除ACS的出现。然而，这种方法是易于出错的，并且现代心脏学要求心脏肌钙蛋白和ECG的测定，进一步解释关于各自个体的症状(和医疗史的评价)。因此，本发明的方法包括具有ACS的体征和症状特别是胸痛的那些个体，其中所述体征/症状特别是胸痛不允许ACS的明确诊断，由于可能与ACS有关，但可能还与除ACS外的病症有关；然而，症状特别是胸痛要求潜在疾病的进一步诊断/评价，以便纳入或排除ACS。视情况而定，还可能本发明的方法应用于其的个体显示对于ACS明确的症状，例如对于臂或肩放射的强烈胸痛。如本文使用的，术语“诊断”意指评估、鉴定、评价或分类受试者中的缺血状态，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，且具有低于指示MI的量的心脏肌钙蛋白量，特别是如果受试者患有缺血状态，其导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。术语“诊断”还指在显示急性冠状动脉综合征的体征和症状、且优选具有低于指示MI的量的心脏肌钙蛋白量的受试者中，区分生理学健康的受试者和患有缺血的受试者，这视情况而定将导致可逆的心功能障碍至不可逆的心脏损伤。诊断和应用于ACS诊断的标准是本领域一般已知的，并且尤其包括医疗史(冠状动脉疾病CAD史)的评价和超过约20分钟的胸痛。如本文使用的，术语“显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，未达到关于心肌梗塞的诊断标准的受试者”包含显示急性冠状动脉综合征的体征和症状的受试者，所述体征和症状可能与心肌梗塞的出现或诊断相关或不相关，只要展示的体征和症状不足以诊断心肌梗塞，而不留下关于诊断结果的疑问。关于心肌梗塞的诊断标准由The Joint ESC/ACCF/AHA/WHF Task Force for the Redefinition of Myocardial Infarction (TheJoint European Society of Cardiology/American College of Cardiology Committee Universal definition of myocardial infarction,在上述引文中)描述,其已经预先概括。 优选地，测定心脏肌钙蛋白量，并且受试者展示低于指示心肌梗塞的量的心脏肌钙蛋白量。可替代地，在受试者中记录心电图(ECG)，并且ECG未能符合关于心肌梗塞的标准，优选地，患者未能符合关于非ST段抬高型MI的标准。甚至更加优选地，测定心脏肌钙蛋白的水平，并且记录ECG，并且这2个参数未能符合关于心肌梗塞的标准，即肌钙蛋白的测定量低于指示心肌梗塞的量和/或ECG。在呈现时未能符合关于心肌梗塞的标准的ECG和不符合(非ST段抬高型)心肌梗塞的诊断标准的肌钙蛋白测试结果的情况下，优选在约4-约8小时后优选地重复这个程序。在ECG和肌钙蛋白测定继续不符合心肌梗塞的诊断标准的情况下，伴随排除心肌梗塞的诊断可以允许患者离开。如本文使用的，术语“缺血”或“缺血状态”涉及对于受累组织的代谢需要不足够的，特别是对于氧供给不足够的受损的血液供给状态。缺血可能与改变的心肌功能相关，导致或引起改变的心肌功能，这取决于缺血心肌的程度和缺血的持续时间。心肌功能在持续小于2分钟的单次缺血发作后快速正常化。随着缺血在持续时间和/或严重性中增加，存在出现的功能恢复中的暂时延迟，尽管存在血流已恢复的事实。血管的15分钟闭塞导致例如6小时改变的心肌功能，尽管血流恢复。这个可逆事件与心肌坏死不相关，优选地，术语“缺血”或“缺血状态”包含可逆的心功能障碍和不可逆的心脏损伤，以及导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤的过程，与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤相关的过程，或引起可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤的过程。缺血或缺血状态还包含这样的心脏损伤，其与心肌梗塞相关，导致或引起心肌梗塞。术语“可逆的心功能障碍”涉及心脏受损的泵送能力或活性，这是完全可逆的且优选不留下对于心脏的任何显著结构恶化而发生，包括显著数目的心肌细胞坏死。优选地，受损的泵送能力或活性不引起对于受试者的机体的任何显著损伤。可逆的心功能障碍可能是立即可逆的，即在数秒或数分钟内如在极短缺血期的情况下。可逆的心功能障碍的进一步例子包括心脏顿抑(cardiac stunning)。在这些情况下,可逆性可以延迟数小时或数天。如果显著比例的心肌是缺血的，那么这可以导致壁伸展和利尿钠肽的快速增加。在本发明的一个进一步优选的实施方案中，测定利尿钠肽即来自BNP和N端前BNP(NT-proBNP)组的BNP型肽或来自ANP和N端前ANP组的ANP型肽的量。优选地，测定ANP型肽、甚至更加优选N端前ANP，以便诊断受试者的可能循环损伤。因此，尽管与缺血并非有原因地相关的，ANP型利尿钠肽的量相对于参考量的升高指示心肌的特定区域中的缺血状态，这导致对于非缺血心肌升高的泵送需求，并且因此，循环损伤。在本发明中，ANP型利尿钠肽优选地N端前ANP的测定优选超过BNP型利尿钠肽如N端前BNP的测定。这是ANP型肽快速释放的结果。在心脏压力和容积(壁伸展)增加后，N端前ANP的量在15 - 60分钟的时间段内增加，允许循环功能障碍的快速诊断。这在本发明的背景中是强制性的，以便能够起始允许挽救受缺血影响但仍未坏死的心肌的治疗。相比之下，BNP型利尿钠肽特别是N端前BNP仅在心脏压力和容积(壁伸展)增加后4 - 6小时的时间段内增加，这在许多情况下对于本发明的目的是不足够的。假设在本发明中循环损伤与心肌中缺血区的形成或顿抑的心肌区有关，或由心肌 中缺血区的形成或顿抑的心肌区引起，所述缺血区已保留其代谢，所述顿抑的心肌区具有比完全功能心肌更低性能的降低的代谢和泵送，而不超过顿抑心肌的长期泵送性能。作为缺血和/或顿抑心肌的减少泵送能力或活性的结果，剩余未受损心肌必须确保机体对于血液供给的需要且可能必须过度执行。在本发明的一个优选实施方案中，通过测定H-FABP和/或肌红蛋白的量可以排除具有顿抑心肌和/或已患有STEMI的受试者。一般而言，这个实施方案包含H-FABP和/或肌红蛋白的测定，其在测定心脏肌钙蛋白和/或测量ECG后，和在本发明的方法的步骤a)和b)中测定sFLT-1和任选的HGF的量前，以便测定受试者是否已患有心肌梗塞，特别是NSTEMI。在顿抑心肌中，心肌功能在休息时减退，但肌细胞保持有活力的。LV功能障碍在顿抑中可以是可逆的。在暂时缺血期随后为再灌注(在休息时减退的功能但保持灌注)后最通常观察到顿抑心肌。这个缺血发作可以单次或多次，短暂或延长的，但从不足够严重以导致损伤。术语“不可逆的心脏损伤”是本领域一般已知的，并且优选涉及与细胞死亡有关的心脏损伤，优选心肌细胞的坏死，例如通过坏死过程。如本发明中定义的受试者的样品中大于用于纳入MI出现的参考量的H-FABP和/或肌红蛋白量指示所述受试者中MI的近期出现。如本发明中定义的受试者中低于用于排除MI出现的参考量的肌红蛋白和任选的H-FABP量应是MI梗塞近期未出现的指示物；在后面一种情况下，受试者可能患有UAP。应当理解在本发明的背景中，如本发明中定义的其肌红蛋白量在上文提及的参考量(用于纳入MI的近期出现的参考量和用于排除MI的近期出现的参考量)之间的受试者可能需要再次诊断。优选地，这还可以对于在其中测定肌红蛋白和H-FABP的量的受试者完成,其中2个量都不对应,例如一个量大于(或低于)各自的参考量，而另一个量不大于(或低于)各自的参考量。特别地，如本发明中定义的受试者中大于约77 ng/ml的肌红蛋白量指示MI的近期出现(纳入),而小于约55 ng/ml的量指示MI近期未出现(排除)。此外，当除肌红蛋白的量外，测定所述受试者的样品中H-FABP的量，并且与关于H-FABP的至少一个参考量比较时，基于如本发明中定义的受试者的样品中肌红蛋白的测定，诊断的灵敏度和特异性甚至增加。特别地，如本发明中定义的受试者中大于约5700pg/ml的H-FABP量指示MI的近期出现(纳入),而小于约2500 pg/ml的量指示MI近期未出现(排除)。术语“诊断循环损伤”涉及评估在如本发明中定义的受试者中，即未患有ACS且具有高于视为指示健康受试者的量的ANP型肽优选N端前ANP量的受试者,循环损伤是否已发生。术语“循环损伤”涉及心脏(心肌)或其区域泵送通过循环的血液量的能力或活性受损，这是确保具有用于代谢需要的足够血液的组织供给所需的。为了补偿受损的能力，心肌必须更努力地表现，导致增强的壁压力(和N端前ANP的释放)。例如，心肌的特定区域受缺血影响，导致受累区域的泵送能力受损。为了确保足够的血液供给，增强特别是那些心肌区域的泵送性能，所述心肌区域未受影响且已保留其完全泵送能力。然而，由于必须过度执行，刺激N端前ANP表达。为了补偿血液供给的缺乏，心脏必须比通常需要的更努力地表现，一般而言导致对心脏的壁增强的压力(因为心脏必须更努力地泵送)。此类损伤不是有害的，只要潜在原因在可逆的心脏损伤发生前消除。存在关于循环损伤的多种原因。
如本文使用的，术语“受试者”涉及动物，优选哺乳动物，且更优选人。如本文使用的，术语“同时地”涉及在相同时间点执行活性，优选在本发明的背景中使用的标记的测定。这优选包括这样的测量，其中一种标记的测定相对于另一种标记的测定略微推迟，例如数秒或数分钟，例如I分钟、2、3、4、5、6、7、8、9或10分钟。后面一种标记的测定不以其量可能改变至将产生不同诊断的程度的方式推迟是必需的。“测定标记”涉及机体液体样品的取得，其中测定标记的量，或标记量的测定和觉察，或两者。如本文使用的，术语“至少在2个不同时间点测定(标记的量)”意欲包含以间隔的标记量的测定，其中第二个和每个以后的样品将以间隔获得，所述间隔确保缺血状态的有效监控。一般而言，在每个样品之间的间隔是约15分钟，约30分钟，约45分钟，约I小时，约90分钟，约2小时，约3、4、5或6小时。例如，起始样品在急性冠状动脉综合征的症状发作后约I小时或在受试者呈现给医生后立即取得，并且每个以后的样品在起始样品后约I小时取得。取得的样品数目将取决于缺血的评价。术语“急性冠状动脉综合征”(ACS)和用于诊断ACS的标准是本领域技术人员理解且已知的。该术语涉及通过急性心肌缺血引起的临床症状群。缺血自身起因于冠状动脉中粥样硬化斑块的破裂。本领域已知ACS可以伴随症状例如上腹部、臂、腕或颚不适或疼痛，特别是胸痛，由此特别地，胸痛持续长于20分钟，并且可以放射至臂、背部或肩。急性心血管事件的进一步症状可以是无法解释的恶心或呕吐、呼吸短促、虚弱、眩晕、头晕目眩、发汗或晕厥以及其任何组合。一般地，这些临床症状特别是胸痛突然出现；它们可以在休息时或在最低限度运动后出现。此外，在本发明的背景中，术语“急性冠状动脉综合征”还可以涉及可疑、假定或可能的ACS，因为这些术语通常用于这样的患者，其显示与ACS —致的体征和症状，但对于其仍未最终确定诊断(参见Morrow，在上述引文中)。ACS患者可以显示不稳定型心绞痛(UAP)，或这些个体可以患有心肌梗塞(MI)。MI可以是ST段抬高型MI(STEMI)或非ST段抬高型MI(NSTEMI)。MI分类为属于冠心病CHD，并且之前发生也分类为属于CHD的其他事件，如不稳定型心绞痛UAP。关于UAP的症状是通过硝酸甘油的舌下施用减轻的胸痛。UAP通过冠状血管的部分闭塞引起，导致低氧血症和心肌缺血。在闭塞太严重或完全的情况下，产生可逆的心肌坏死(这是心肌梗塞潜在的病理学状态)。一般地，在心电图(ECG)显示ST段抬高的情况下，通过心电图学诊断STEMI。在ACS症状发作后至少6小时心脏肌钙蛋白量的测定允许区分UAP和NSTEMI。如果肌钙蛋白量是升高的(指示心肌损害)，那么假定NSTEMI。MI可以无需明显症状而出现，即受试者未显示任何不适，并且MI之前未发生稳定或不稳定型心绞痛。MI的出现可以随后为左心室功能障碍(LVD)。术语“心脏肌钙蛋白”指在心脏的细胞和优选地心内膜下细胞中表达的所有肌钙蛋白同种型。如例如 Anderson 1995, Circulation Research,第 76 卷，no. 4:681-686和Ferrieres 1998, Clinical Chemistry,44 :487-493中所述的,这些同种型是本领域充分表征的。优选地，心脏肌钙蛋白指肌钙蛋白T和/或肌钙蛋白I，并且最优选地指肌钙蛋白T。应当理解肌钙蛋白的同种型可以在本发明的方法中一起即同时或连续测定，或个别测定，即完全不测定其他同种型。关于人肌钙蛋白T和人肌钙蛋白I的氨基酸序列公开于Anderson,在上述引文中和 Ferrieres 1998, Clinical Chemistry,44 :487-493 中。术语“心脏肌钙蛋白”还包含前述特异性肌钙蛋白，即优选地肌钙蛋白I，和更优选地肌钙蛋白T的变体。此类变体具有与特异性心脏肌钙蛋白至少相同的基本生物学和免疫 学性质。特别地，如果它们可通过本说明书中提及的相同特异性测定检测，例如通过使用特异性识别所述心脏肌钙蛋白的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定，那么它们共享相同的基本生物学和免疫学性质。此外，应当理解如依照本发明提及的变体应具有由于至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍优选与特异性肌钙蛋白的氨基酸序列至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约85%、至少约90 %、至少约92 %、至少约95 %、至少约97 %、至少约98 %或至少约99 %等同，优选在特异性肌钙蛋白的整个长度上。变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性同系物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文提及的变体包括特异性心脏肌钙蛋白或前述类型变体的片段，只要这些片段具有如上文提及的基本免疫学和生物学性质。优选地，心脏肌钙蛋白变体具有与人肌钙蛋白T或肌钙蛋白I那些相当的免疫学性质(即表位组成)。因此，变体应可通过用于测定心脏肌钙蛋白量的前述装置或配体识别。此类片段可以是例如肌钙蛋白的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰例如磷酸化或肉豆蘧酰化而不同的变体。优选地，肌钙蛋白I及其变体的生物学性质是在体内和体外抑制肌动球蛋白ATP酶或抑制血管生成的能力，这可以例如基于由Moses等人1999 PNAS USA 96 (6) :2645-2650)描述的测定进行检测。优选地，肌钙蛋白T及其变体的生物学性质是与肌钙蛋白C和I形成复合物、结合钙离子或结合原肌球蛋白的能力，优选地如果存在为肌钙蛋白C、I和T的复合物或由肌钙蛋白C、肌钙蛋白I和肌钙蛋白T的变体形成的复合物。如本文使用的，术语“心脏肌钙蛋白量”涉及心脏肌钙蛋白优选TnT的浓度。优选地，该术语涉及受试者的血浆或血清样品中心脏肌钙蛋白的浓度。术语“低于指示心肌梗塞的量的心脏肌钙蛋白”可以涉及从零开始且包括零的任何心脏肌钙蛋白量，并且其可通过本领域已知的装置和方法检测，例如通过商购可得的心脏肌钙蛋白测定。优选地，“可检测的心脏肌钙蛋白量”涉及等于或大于用于测定肌钙蛋白量的测定的最低检测极限的浓度。优选地，可检测的肌I丐蛋白量可以涉及等于或大于0. 001 ng/ml>0. 002 ng/ml、0. 005 ng/ml、0. 0075 ng/ml或0.01 ng/ml的任何浓度。更优选地,可检测的肌I丐蛋白量涉及等于或大于0.002 ng/ml的任何浓度。术语“指示心肌梗塞的肌钙蛋白量”涉及指示心肌梗塞的通常公认的肌钙蛋白浓度。肌钙蛋白T用高敏感的肌钙蛋白T测试进行测定，使用ELECSYS 2010分析仪(Roche Diagnostics, Mannheim,德国)。该测试根据制造商的说明书执行。该测试具有3-10. 000 ng/ml或pg/ml的测量范围。发现该测试的精确度为0. 8 - 2. 6百分比，这取决于样品中的肌钙蛋白浓度。优选地，视为指示心肌梗塞的样品中测定的生物标记的量，优选心脏肌钙蛋白的量，涉及超过合适参考群体的第95百分位数浓度、优选超过第99百分位数浓度(截断得分)的浓度。这个量基于由 The Joint ESC/ACCF/AHA/WHF Task Force for the Redefinitionof Myocardial Infarction (The Joint European Society of Cardiology/AmericanCollege of Cardiology Committee Universal definition of myocardial infarction,在上述引文中)做出的推荐。本领域技术人员知道如何选择合适的参考群体，并且如何测定第95和第99百分位数浓度。应当理解基于用于测定心脏肌钙蛋白浓度的所用测定和基于所选参考群体，这个浓度可以不同。在本发明的背景中指示MI的优选心脏肌钙蛋白量可以是但不限于至少约0.05 ng/ml、至少约0. 075 ng/ml、至少约0. 099 ng/ml、至少约0.1 ng/ml、至少约0. 2 ng/ml和至少约0. 3 ng/ml的量。 在本发明的方法的一个优选实施方案中，在显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，且具有低于视为指示心肌梗塞(如本申请中定义的)的量的心脏肌钙蛋白量的受试者中，肌钙蛋白量特别是肌钙蛋白T量等于或大于约0.002且低于约0.1 ng/ml。根据JointESC/ACCF/AHA/WHF Task Force for the Redefinition of Myocardial Infarction,lc.的需求计算的第99百分位数是0.14 ng/ml，这是指示MI的最优选量。如本文使用的，术语“可溶性(s)FLT_l ”指其为可溶形式的VEGF受体FLTl的多肽。它在人脐静脉内皮细胞的条件化培养基中得到鉴定。内源可溶性FLTl(sFLTl)受体在层析法和免疫学上类似于重组人sFLTl，且以相似的高亲和力结合[1251] VEGF。人sFLTl显示在体外与KDR/Flk-1的细胞外结构域形成VEGF稳定化复合物。优选地，sFLTl指人sFLTl。更优选地，人sFLTl可以由如Genebank登记号P17948，GI :125361中所示的Flt-I氨基酸序列进彳丁推导。关于小鼠sFLTl的氣基酸序列显不于Genebank登记号BAA24499. 1，GI 2809071中。此外，应当理解如依照本发明提及的变体应具有由于至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍优选与特异性sFLTl的氨基酸序列至少 50%、60%、70%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或 99%等同。变体可以是等位基因变体、剪接变体或任何其他物种特异性同系物、旁系同源物或直系同源物。此夕卜，本文提及的变体包括特异性sFLTl或前述类型变体的片段，只要这些片段具有如上文提及的基本免疫学和生物学性质。优选地，sFLT-1变体具有与人sFLT-1那些相当的免疫学性质(即表位组成)和/或生物学性质。因此，变体应可通过用于测定sFLT-1量的前述装置或配体识别。此类片段可以是例如sFLTl的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰例如糖基化、磷酸化或肉豆蘧酰化而不同的变体。优选地，sFLT-1的生物学性质是以高亲和力结合VEGF和/或与KDR/Flk-1的细胞外结构域形成VEGF稳定化复合物的能力。在本发明的一个进一步实施方案中，基于所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较，个体中测量的sFLT-1量用于诊断心肌梗塞。该方法可以包括至少一个下述步骤a)测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量，b)比较步骤a)中测定的sFLT_l或其变体的量与至少一个参考量，和c)基于步骤b)中获得的信息，优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞。这在个体可以观察延长时间段的情况下是特别有利的，优选超过6小时、更优选超过8小时、更加优选超过12小时、特别是超过24小时。相应地，本发明还涉及诊断受试者中的心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征ACS的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括步骤
a)测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量，
b)比较如步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和
c)基于步骤b)中获得的信息，优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞。 此外，本发明涉及用于诊断受试者中的心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)比较所述受试者的样品中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和
b)基于步骤a)中获得的信息，诊断心肌梗塞。此外，本发明涉及用于诊断受试者中的心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)基于所述受试者的样品中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量的比较，诊断心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞。肝细胞生长因子(HGF)在1984和1985年首次得到鉴定，并且作为原代培养肝细胞的有效促分裂原纯化。HGF是单链前体形式，并且通过丝氨酸蛋白酶进一步加工成双链形式与其活化偶联。负责HGF活化的丝氨酸蛋白酶包括HGF激活物或HGF转换酶和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)。关于HGF的受体鉴定为c-met原癌基因产物。c-Met受体由50_kDaa-链和145-kDa h_链组成。HGF与C-Met受体的结合诱导酪氨酸激酶的活化，导致C末端簇生的酪氨酸残基的后续磷酸化。HGF在多种器官的再生和保护中具有器官营养作用，所述器官包括肝、肺、胃、胰腺、心脏、脑和肾。通过在结合原癌基因c-Met受体后激活酪氨酸激酶信号级联，肝细胞生长因子调节细胞生长、细胞运动性和形态发生。肝细胞生长因子由间充质细胞分泌，且充当对主要上皮起源的细胞的多功能细胞因子。它刺激促有丝分裂、细胞运动性和基质侵入的能力给予其在血管生成、肿瘤生成和组织再生中的关键作用。它作为单一失活多肽分泌，并且由丝氨酸蛋白酶切割成69-kDa a -链和34_kDa P -链。在a和@链之间的二硫键产生活性异二聚分子。该蛋白质属于SI肽酶的纤溶酶原亚家族，但不具有可检测的蛋白酶活性。这种基因的可变剪接产生编码不同同种型的多种转录变体。关于小鼠HGF的氨基酸序列显示于Genebank登记号NP034557. 2，GI =46048249中。关于人HGF的氨基酸序列显示于Genebank登记号NP000592. 3 GI: 33859835中。优选地，HGF指人HGF。此外，应当理解如依照本发明提及的变体应具有由于至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍优选与特异性HGF的氨基酸序列至少 50%、60%、70%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或 99%等同。变体可以是等位基因变体、剪接变体或任何其他物种特异性同系物、旁系同源物或直系同源物。此外，本文提及的变体包括 特异性HGF或前述类型变体的片段，只要这些片段具有如上文提及的基本免疫学和生物学性质。优选地，HGF变体具有与人HGF那些相当的免疫学性质(即表位组成)和/或生物学性质。因此，变体应可通过用于测定心脏肌钙蛋白量的前述装置或配体识别。此类片段可以是例如HGF的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰例如糖基化、磷酸化或肉豆蘧酰化而不同的变体。优选地，HGF的生物学性质是结合原癌基因c-Met受体的能力。在本发明的一个进一步实施方案中，基于所述受试者的样品中肝细胞生长因子(HGF)或其变体的量与至少一个参考量的比较，个体中测量的HGF量用于诊断心肌梗塞。该方法可以包括至少一个下述步骤a)测定所述受试者的样品中肝细胞生长因子(HGF)或其变体的量，b)比较步骤a)中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，和c)基于步骤
b)中获得的信息，优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞。这在个体可以观察延长时间段的情况下是特别有利的，优选超过6小时、更优选超过8小时、更加优选超过12小时、特别是超过24小时。相应地，本发明还涉及诊断受试者中的心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征ACS的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括步骤
a)测定所述受试者的样品中可溶性HGF或其变体的量，和
b)比较如步骤a)中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，
c)基于步骤b)中获得的信息，优选地基于a)和b)中获得的信息，诊断心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞。此外，本发明涉及用于诊断受试者中的心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)比较所述受试者的样品中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，和
b)基于步骤a)中获得的信息，诊断心肌梗塞。此外，本发明涉及用于诊断受试者中的心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)基于所述受试者的样品中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量的比较，诊断心肌梗塞，特别是非ST段抬高型心肌梗塞。术语“ANP型肽”包含前原ANP、前ANP、N端前ANP、其ANP变体(参见例如，Bonow，1996，Circulation 93:1946-1950)。前原肽包含短信号肽，其酶促切掉以释放前肽。前肽进一步切割成N末端前肽(N端前ANP)和具有28个氨基酸的活性激素ANP。ANP具有舒张血管效应，且引起经由泌尿道的水和钠排泄。ANP具有比其失活配对物N端前ANP更短的半衰期。ANP由心房专一地产生且释放。ANP的量因此可以占优势地反映心房功能。在这个背景中的术语“变体”涉及基本上类似于ANP和N端前ANP的肽。术语“基本上类似的”由本领域技术人员充分理解。特别地，变体可以是与人群体中最流行的肽同种型的氨基酸序列比较，显示氨基酸更换的同种型或等位基因。此外，应当理解如依照本发明提及的变体应具有由于至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍优选与ANP或N端前ANP的氨基酸序列至少 50%、60%、70%、80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%或 99%等同。变体可以是等位基因变体、剪接变体或任何其他物种特异性同系物、旁系同源物或直系同源物。基本上类似的还是蛋白酶解降解产物，其仍由针对各自的全长肽的诊断装置或配体识别，只要这些片段具有如上文提及的基本免疫学和生物学性质。优选地，ANP型肽变体具有与各自的人ANP型肽那些相当的免疫学性质(即表位组成)和生物学性质。因此，变体应可通过用于测定ANP型肽量的前述装置或配体识别。此类片段可以是例如N端前ANP的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰例如糖基化、磷酸化或肉豆蘧酰化而不同的变体。优选地，ANP的生物学性质是舒张血管能力和/或钠和水排泄的能力。术语“变体”还涉及翻译后修饰的肽例如糖基化肽。“变体”还是已在样品收集后例如通过标记特别是放射性或荧光标记与肽的共价或非共价附着进行修饰的肽。测量在样品收集后修饰的肽量应理解为测量最初未修饰的肽量。在本发明的背景中，ANP型肽优选是N端前ANP。 术语“样品”指体液的样品，分离细胞的样品或来自组织或器官的样品。体液的样品可以通过众所周知的技术获得，并且优选包括血液、血浆、血清或尿样品，更优选地，血液、血浆或血清样品。组织或器官样品可以通过例如活组织检查得自任何组织或器官。分离的细胞可以通过分离技术例如离心或细胞分选得自体液或组织或器官。优选地，细胞、组织或器官样品得自表达或产生本文提及的肽的那些细胞、组织或器官。优选地，术语“样品”指血浆或血清样品，更优选血清样品。在本发明中，样品在技术人员已知的合适时间点时获得。已考虑到在检查下的受试者患有急性病理生理学状态(ACS)，需要快速诊断和对合适治疗的快速决定。优选地，样品在急性冠状动脉综合征症状发作后不久得自根据本发明的受试者，例如在约I小时、不超过约2小时、不超过约3小时、不超过约4小时、不超过约5小时或不超过约6小时后。优选地，样品将在受试者呈现给医生后立即(即在数分钟内，即在约5、约10、约15、约30、约45分钟或约I小时内)取得。在优选至少2次重复测定sFLT-1和/或任选地HGF和/或任选地ANP型肽的量以监控缺血严重性的情况下，第二个和每个以后的样品将以间隔获得，所述间隔确保缺血状态的有效监控。一般而言，在每个样品之间的间隔是约15分钟，约30分钟，约45分钟，约I小时，约90分钟，约2小时，约3、4、5或6小时。例如，起始样品在急性冠状动脉综合征的体征和/或症状发作后约I小时或在受试者呈现给医生后立即取得，并且每个以后的样品在起始样品后约I小时取得。取得的样品数目将取决于缺血的评价。测定心脏肌钙蛋白优选肌钙蛋白T的量、或sFLT-1的量、或HGF的量、或在本说明书中提及的任何其他肽或多肽或蛋白质，涉及优选半定量或定量测量量或浓度。术语多肽和蛋白质在本申请自始至终可互换使用。测量可以直接或间接完成。基于得自肽或多肽自身和其强度与样品中存在的肽分子数目直接关联的信号，直接测量涉及测量肽或多肽的量或浓度。此类信号-在本文中有时被称为强度信号-可以例如通过测量肽或多肽的特异性物理或化学性质的强度值获得。间接测量包括测量得自次级组分(即不是肽或多肽自身的组分)或生物学读出系统的信号，例如可测量的细胞应答、配体、标记或酶促反应产物。依照本发明，测定肽或多肽的量可以通过用于测定样品中的肽量的所有已知装置达到。所述装置包含免疫测定设备和方法，其可以在多种夹心、竞争或其他测定形式中利用标记的分子。所述测定将发展指示肽或多肽的存在或不存在的信号。此外，信号强度可以优选与样品中存在的多肽量直接或间接(例如反比例)关联。进一步合适的方法包括测量对于肽或多肽特异性的物理或化学性质，例如其精确分子量或NMR谱。所述方法优选包括生物传感器、与免疫测定偶联的光学设备、生物芯片、分析设备例如质谱仪、NMR分析仪或层析设备。进一步地，方法包括基于微板ELISA的方法、完全自动化或机器人免疫测定(例如可在Elecsys 分析仪上获得)、CBA (酶促钴结合测定，例如可在Roche-Hitachi 分析仪上获得)、和乳胶凝集测定(例如可在Roche-Hitachi 分析仪上获得)。优选地，测定肽或多肽的量包括步骤(a)使能够引发细胞应答的细胞与所述肽或多肽接触足够时间段，所述细胞应答的强度指示肽或多肽的量，(b)测量细胞应答。对于测量细胞应答，样品或加工的样品优选加入细胞培养物中，并且测量内部或外部细胞应答。细胞应答可以包括报道基因的可测量表达或物质例如肽、多肽或小分子的分泌。表达或物质 应生成与肽或多肽的量关联的强度信号。还优选地，测定肽或多肽的量包括测量可得自样品中的肽或多肽的特异性强度信号的步骤。如上所述，此类信号可以是在对于肽或多肽特异性的质谱或NMR谱中观察到的对于肽或多肽特异性的m/z变量处观察到的信号强度。测定肽或多肽的量可以优选包括步骤(a)使肽与特异性配体接触，(b)(任选地)去除未结合的配体，(C)测量结合的配体的量。结合的配体将生成强度信号。根据本发明的结合包括共价和非共价结合。根据本发明的配体可以是任何化合物，例如肽、多肽、核酸或与本文描述的肽或多肽结合的小分子。优选配体包括抗体、核酸、肽或多肽例如对于肽或多肽及其包含关于肽的结合结构域的片段的受体或结合配偶体、和适配体例如核酸或肽适配体。制备此类配体的方法是本领域众所周知的。例如，合适抗体或适配体的鉴定和产生也由商业供应商提供。本领域技术人员熟悉开发具有更高亲和力或特异性的此类配体衍生物的方法。例如，随机突变可以引入核酸、肽或多肽内。根据本领域已知的筛选程序例如噬菌体展示，这些衍生物随后可以就结合进行测试。如本文提及的抗体包括多克隆和单克隆抗体，以及其片段，例如能够结合抗原或半抗原的Fv、Fab和F (ab)2片段。本发明还包括单链抗体和人源化杂交抗体，其中显示出所需抗原特异性的非人供体抗体的氨基酸序列与人受体抗体的序列组合。供体序列通常将包括供体的至少抗原结合氨基酸残基，但还可以包含供体抗体的其他结构上和/或功能上相关的氨基酸残基。此类杂交物可以通过本领域众所周知的几种方法进行制备。优选地，配体或试剂特异性结合肽或多肽。根据本发明的特异性结合意指配体或试剂不应基本上结合(与之“交叉反应)待分析的样品中存在的另一种肽、多肽或物质。优选地，特异性结合的肽或多肽应以比任何其他相关肽或多肽高至少3倍、更优选高至少10倍且更加优选高至少50倍的亲和力结合。非特异性结合可以是可耐受的，如果它仍可以明确区分且测量，例如根据其在蛋白质印迹上的大�。蛲ü湓谘分邢喽愿叩姆岫�。配体的结合可以通过本领域已知的任何方法进行测量。优选地，所述方法是半定量或定量的。合适方法在下述中描述。首先，配体的结合可以例如通过NMR或表面等离振子共振直接测量。其次，如果配体还充当目的肽或多肽的酶促活性的底物，那么可以测量酶促反应产物(例如蛋白酶的量可以通过例如在蛋白质印迹上测量切割底物的量进行测量)。可替代地，配体可以自身展示出酶促性质，并且各自由肽或多肽结合的“配体/肽或多肽”复合物或配体可以与合适底物接触，允许通过强度信号的生成检测。对于酶促反应产物的测量，优选地底物的量是饱和的。底物还可以在反应前用可检测标记进行标记。优选地，样品与底物接触足够时间段。足够时间段指对于产物的可检测优选可测量量产生所需的时间。代替测量产物的量，可以测量对于给定(例如可检测)产物量的出现所需的时间。第三，配体可以与标记共价或非共价偶联，允许配体的检测和测量。标记可以通过直接或间接方法完成。直接标记涉及标记与配体直接(共价或非共价)偶联。间接标记涉及次级配体与第一种配体的结合(共价或非共价)。次级配体应特异性结合第一种配体。所述次级配体可以与合适标记偶联和/或是结合次级配体的三级配体的靶(受体)。次级、三级或甚至更高级别配体的使用通常用于增加信号。合适的次级和更高级别配体可以包括抗体、二次抗体和众所周知的链霉抗生物素蛋白-生物素系统(Vector Laboratories, Inc.)。配体或底物还可以是用如本领域已知的一种或多种标签“加上标签的”。此类标签随后可以是 更高级别配体的靶。合适标签包括生物素、地高辛配基(digoxygenin)、His-标签、谷胱甘肽-S-转移酶、FLAG、GFP、myc-标签、A型流感病毒血凝素(HA)、麦芽糖结合蛋白等。在肽或多肽的情况下，标签优选在N末端和/或C末端。合适标记是可通过合适检测方法检测的任何标记。一般标记包括金颗粒、乳胶珠、吖啶(acr i dan )酯、鲁米诺、钌、酶促活性标记、放射性标记、磁性标记(“例如磁珠”包括顺磁和超顺磁标记)、和荧光标记。酶促活性标记包括例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、3 -半乳糖苷酶、萤光素酶及其衍生物。用于检测的合适底物包括二氨基联苯胺(DAB)、3，3’ -5，5’ -四甲基联苯胺、NBT-BCIP (4-氯化硝基四氮唑兰和5-溴-4-氯-3-卩引哚基-磷酸盐，可作为现成母液从Roche Diagnostics获得)、CDP-Star (Amersham Biosciences)>ECF (Amersham Biosciences)。合适的酶-底物组合可以导致有色反应产物、荧光或化学发光，其可以根据本领域已知的方法(例如使用感光胶片或合适的照相机系统)进行测量。关于测量酶促反应，类似地应用上文给出的标准。一般的荧光标记包括荧光蛋白质(例如GFP及其衍生物)、Cy3、Cy5、TeXaS Red、荧光素和Alexa染料(例如Alexa 568)。进一步的突光标记例如可从Molecular Probes (Oregon)获得。还考虑了作为荧光标记的量子点的使用。一般放射性标记包括35s、125i、32p、33p等。放射性标记可以通过已知和合适的任何方法进行检测，例如感光胶片或磷光体显像仪。根据本发明的合适测量方法还包括沉淀(特别是免疫沉淀)、电化学发光(电生成的化学发光)、RIA(放射性免疫测定)、ELISA (酶联免疫吸附测定)、夹心酶免疫测试、电化学发光夹心免疫测定(ECLIA)、解离增强的镧系元素荧光免疫测定(DELFIA)、邻近闪烁测定(SPA)、比浊法、浊度法、乳胶增强的比浊法或浊度法、或固相免疫测试。本领域已知的进一步方法(例如凝胶电泳、2D凝胶电泳、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质印�：椭势追�)，可以单独或与如上所述的标记或其他检测方法组合使用。肽或多肽的量还可以优选如下测定Ca)使包含关于如上指定的肽或多肽的配体的固体载体与包含肽和多肽的样品接触，和(b)测量结合载体的肽或多肽量。优选选自核酸、肽、多肽、抗体和适配体的配体优选以固定化形式存在于固体载体上。用于制造固体载体的材料是本领域众所周知的，并且尤其包括商购可得的柱材料、聚苯乙烯珠、乳胶珠、磁珠、胶体金属颗粒、玻璃和/或硅片和表面、硝酸纤维素条、膜、片、duracytes、反应托盘的孔和壁、塑料管等。配体或试剂可以结合许多不同载体。众所周知的载体的例子包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龙、直链淀粉、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁石。载体的性质对于本发明的目的可以是可溶或不可溶的。用于固定/固定化所述配体的合适方法是众所周知的，并且包括但不限于离子、疏水、共价相互作用等。还考虑使用“悬浮阵列”作为根据本发明的阵列(Nolan 2002，TrendsBiotechnol. 20 (1):9_12)。在此类悬浮阵列中，载体例如微珠或微球体存在于悬液中。阵列由可能标记的、携带不同配体的不同微珠或微球体组成。产生例如基于固相化学和光不稳定保护基团的此类阵列的方法是一般已知的(US 5，744，305)。优选地，在得自如本发明中定义的受试者的血液样品例如血清或血浆样品中测定sFLT-1的量和HGF的量(如果测量HGF)和ANP型肽的量，和视情况而定，在本发明的背景中测量的其他肽的量。优选地，此类测定通过ELISA完成。通过ELISA的此类测定可以例如通过使用下述完成Quantikine Human HGF Immunoassay, R&D Systems, Inc. ,Minneapolis,MN, USA,和 / 或 Quantikine Human Soluble VEGF Rl/Flt-1 Immunoassay (用于 sFLT-1),R&D Systems, Inc. , Minneapolis, MN, USA,和通过 Biomedica Medizinprodukte, Vienna,奥地利的N端前ANP免疫测定。视情况而定，如本申请中其他地方指定的sFLT-1和/或HGF的各自量可以分别通过使用下述进行测定，用于测定H-FABP量的用于人心脏类型脂肪 酸结合蛋白的JffiT ELISA Test Kit (HyCult Biotechnology,Uden,荷兰)和用于测定肌红蛋白量的 Tina-Quant Myoglobin Test System (Roche Diagnostics)。如本文使用的，术语“量”包含绝对量(例如sFLT-1或HGF的)、相对量或浓度(例如sFLT-1或HGF的)以及与之关联的任何值或参数。此类值或参数包含来自通过直接测量得自所述肽的所有特异性物理或化学性质的强度信号值，例如质谱或NMR谱中的强度值。此夕卜，包含的是通过本说明书中其他地方指定的间接测量获得的所有值或参数，例如响应肽由生物学读出系统测定的表达量或得自特异性结合配体的强度信号。应当理解与上述量或参数关联的值还可以通过所有标准数学操作获得。如本文使用的，术语“比较”包含比较由待分析的样品包含的肽、多肽、蛋白质的量与本说明书中其他地方指定的合适参考来源的量。应当理解如本文使用的比较指相应参数或值的比较，例如绝对量与绝对参考量比较，而浓度与参考浓度比较，或得自测试样品的强度信号与参考样品的相同类型的强度信号比较。本发明的方法的步骤(b)中提及的比较可以手动或计算机辅助执行。对于计算机辅助比较，测定量的值可以与对应于合适参考的值比较，所述合适参考的值通过计算机程序贮存于数据库中。计算机程序可以进一步评价比较的结果，即以合适输出格式自动化提供所需评估。基于步骤a)中测定的一个或多个量与一个或多个合适参考量的比较，可以诊断所述受试者中的MI。应当理解如本发明的方法的步骤(a)中测定的sFLT-1的量在步骤(b)中与如本申请其他地方指定的关于sFLT-1的参考量比较，并且HGF的量与关于HGF的参考量比较。相应地，如本文使用的，术语“参考量”指允许测定受试者中的缺血状态(其在本发明的背景中也可以称为“缺血程度”)的量，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，且具有低于视为指示心肌梗塞的量的心脏肌钙蛋白量(因此在如本发明中定义的受试者中)。与参考量的比较允许诊断缺血是否将导致心功能障碍/心脏损伤。ACS症状的发作近期已出现。在这个背景中的近期出现意指发作已优选在从所述受试者中获得样品前6小时时间段内、更优选在4小时时间段内、且最优选在2小时时间段内出现。优选地，关于缺血程度严重性的参考量可以衍生自诊断为具有ACS症状的如本发明中定义的受试者，所述ACS症状优选在获得样品前6小时时间段内、更优选在4小时时间段内、且最优选在2小时时间段内显露，并且在其中测定受试者的后果，即MI特别是NSTEMI、UAP、心肌顿抑、循环功能障碍、或不含ACS体征的CAD的出现。如本文使用的，术语“参考量”在本发明的这个实施方案中指多肽的量，其允许诊断个体中的缺血状态为生理学健康受试者、或具有导致可逆心功能障碍或不可逆心脏损伤的缺血状态的受试者的那种。因此，参考量一般而言将衍生自这样的受试者，其已知是生理学健康受试者、或具有导致可逆心功能障碍或不可逆心脏损伤的缺血状态的受试者。在本发明的所有实施方案中，通过本领域技术人员已知的方法测定指示个体中的缺血状态的其中使用的各自标记的一个或多个量(心脏肌钙蛋白，特别是肌钙蛋白T ;sFLT-1 ；HGF ;和在某些实施方案中，N端前ANP)。
一般而言，为了测定允许依照本发明的各自实施方案确定所需诊断的一个或多个各自量或量比(“阈值”、“参考量”)，在合适患者组中测定一种或多种各自肽的一个或多个量或量比。根据待确定的诊断，患者组可以例如仅包含健康个体，或可以包含健康个体和患有待测定的病理生理学状态的个体，或可以仅包含患有待测定的病理生理学状态的个体，或可以包含患有待区分的多种病理生理学状态的个体，通过一种或多种各自标记使用验证的分析方法。通过本领域技术人员已知的统计方法收集且分析获得的结果。随后依照患有疾病的所需概率确定获得的阈值且与特定阈值联系。例如，选择健康和/或非健康患者集合的中值、第60、第70、第80、第90、第95或甚至第99百分位数，可以是有用的，以便确定一个或多个阈值、一个或多个参考值或量比。可以确定诊断标记的参考值，并且患者样品中的标记量可以简单地与参考值比较。诊断和/或预后测试的灵敏度和特异性取决于仅超过测试的分析“质量它们还取决于何者构成异常结果的定义。实际上，一般通过标绘与其在“正常”和“疾病”群体中的相对频率比较的变量值，计算接受者工作特征曲线或“R0C”曲线。对于本发明的任何特定标记，关于具有和不具有疾病的受试者的标记量的分布将可能重叠。在此类条件下，测试不以100%准确度绝对区分正常与疾�。⑶抑氐婊甘静馐圆荒芮终Ｓ爰膊〉那榭�。选择阈值，超过其(或低于其，取决于标记如何随着疾病改变)，测试视为是异常的，并且低于其测试视为是正常的。ROC曲线下面积是察觉测量允许正确鉴定状况的概率测量。即使当测试结果不一定给出准确数目时，也可以使用ROC曲线。只要可以排序结果，就可以产生ROC曲线。例如，对“疾病”样品的测试结果可以根据程度进行排序(比方说1=低，2=正常，和3=高)。这个排序可以与“正常”群体中的结果关联，并且产生ROC曲线。这些方法是本领域众所周知的。参见例如，Hanley等人，Radiology 143:29-36 (1982)。在特定实施方案中，标记和/或标记组选择为显示出至少约70%灵敏度、更优选至少约80%灵敏度、更加优选至少约85%灵敏度、更加优选至少约90%灵敏度、且最优选至少约95%灵敏度，与至少约70%特异性、更优选至少约80%特异性、更加优选至少约85%特异性、更加优选至少约90%特异性、且最优选至少约95%特异性组合。在特别优选的实施方案中，灵敏度和特异性是至少约75%、更优选至少约80%、更加优选至少约85%、更加优选至少约90%、且最优选至少约95%。在这个背景中的术语“约”指给定测量的+/_5%。在其他实施方案中，阳性似然比、阴性似然比、优势比或�：Ρ扔米鞑馐栽げ馕Ｏ栈蛘锒霞膊〉哪芰Φ牟饬�。在阳性似然比的情况下，值I指示阳性结果在“患病”和“对照”组中的受试者中同样可能；大于I的值指示阳性结果在患病组中更可能；并且小于I的值指示阳性结果在对照组中更可能。在阴性似然比的情况下，值I指示阴性结果在“患病”和“对照”组中的受试者中同样可能；大于I的值指示阴性结果在测试组中更可能；并且小于I的值指示阴性结果在对照组中更可能。在特定优选实施方案中，标记和/或标记组优选选择为显示出至少约I. 5或更多或约0. 67或更少、更优选至少约2或更多或约0. 5或更少、更加优选至少约5或更多或约0. 2或更少、更加优选至少约10或更多或约0. I或更少、且最优选至少约20或更多或约0. 05或更少的阳性或阴性似然比。术语“约”在这个背景中指给定测量的+/_ 5%。在优势比的情况下，值I指示阳性结果在“患病”和“对照”组中的受试者中同样 可能；大于I的值指示阳性结果在患病组中更可能；并且小于I的值指示阳性结果在对照组中更可能。在特定优选实施方案中，标记和/或标记组优选选择为显示出至少约2或更多或约0. 5或更少、更优选至少约3或更多或约0. 33或更少、更加优选至少约4或更多或约0. 25或更少、更加优选至少约5或更多或约0. 2或更少、且最优选至少约10或更多或约0.1或更少的优势比。术语“约”在这个背景中指给定测量的+/_ 5%。在危害比的情况下，值I指示终点(例如死亡)的相对危险在“患病”和“对照”组中的受试者中相等；大于I的值指示危险在患病组中更大；并且小于I的值指示危险在对照组中更大。在特定优选实施方案中，标记和/或标记组优选选择为显示出至少约I. I或更多或约0. 91或更少、更优选至少约I. 25或更多或约0. 8或更少、更加优选至少约I. 5或更多或约0. 67或更少、更加优选至少约2或更多或约0. 5或更少、且最优选至少约2. 5或更多或约0.4或更少的�：Ρ�。术语“约”在这个背景中指给定测量的+/_ 5%。虽然本文描述了示例性组，但一种或多种标记可以从这些示例性组中替换、添加或扣除，同时仍提供临床上有用的结果。组可以包含疾病的特异性标记(例如在细菌感染中增加或减少，但在其他疾病状态中不如此的标记)和/或非特异性标记(例如由于炎症增加或减少的标记，与原因无关；由于止血的变化增加或减少的标记，与原因无关等)。虽然特定标记在本文描述的方法中可能不是个别决定性的，但变化的特定“指纹”模式实际上可以充当疾病状态的特异性指示物。如上所述，该变化模式可以得自单个样品，或可以任选地视为组的一个或多个成员中的暂时变化(或组应答值中的暂时变化)。为了测试所选参考值是否产生患有目的疾病的患者的足够安全诊断，可以例如使用下式测定本发明的方法对于给定参考值的有效性(E)
E = (TP / TO) X 100 ；
其中TP =真阳性，并且TO =测试总数=TP + FP + FN + TN，其中FP =假阳性；FN=假阴性，并且TN =真阴性。E具有下述值范围0〈 E〈 100)。优选地，测试参考值产生足够安全的诊断，条件是E的值是至少约50、更优选至少约60、更优选至少约70、更优选至少约80、更优选至少约90、更优选至少约95、更优选至少约98。通过本领域技术人员已知的确定方法做出个体是健康还是患有特定病理生理学状态的诊断。该方法就个别病理生理学状态而言不同。
确定所需诊断的算法在本申请中展示，在提及对于其做出参考的各自实施方案的段落中。相应地，本发明还包含测定指示生理学和/或病理学状态和/或特定病理学状态的阈值量的方法，其包括步骤在合适患者组中测定一种或多种合适标记的量，收集数据且通过统计方法分析数据且确定阈值。如本文使用的，术语“约”指给定测量或值的+/_ 20%、优选+/_ 10%、优选+/_5%。如本发明中定义的关于指示缺血状态的sFLT-1的参考量(阈值量)如下约92pg/ml、更优选约109 pg/mlo低于上文引用值的sFLT-1量指示非缺血状态,其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤不相关，或不导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。等于或大于上文引用参考量的sFLT-1量指示缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆 的心脏损伤相关，或导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。如本发明中定义的关于缺血状态的HGF的参考量(阈值量)如下约0.62 pg/ml,更优选约0.73 pg/ml。低于上文引用值的HGF量指示非缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤不相关，或不导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。等于或大于上文引用参考量的HGF量指示缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤相关，或导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。优选地，在测定的sFLT-1和任选的HGF值不指示缺血状态的情况下，个体不需要就心脏病而言的任何进一步检查。一般而言，此类个体可以准予回家。在诊断缺血状态的情况下，各自个体可能需要就心脏或心血管疾病而言的进一步检查。在一个优选实施方案中，相应地，本发明包含进一步诊断其中已测定sFLT-1和/或HGF的量的个体的步骤。在本发明的背景中合适的进一步诊断方法包括多个种类的应激测试，例如运动应激ECG、运动应激超声心电图、运动应激计算机断层扫描、运动应激铊扫描；和血管造影术(侵入或虚拟的，例如通过螺旋计算机断层扫描)。优选地，如本发明中定义的关于N端前ANP对于循环损伤的参考量(阈值量)如下约1320 pg/ml、更优选约1674 pg/ml。等于或大于上文引用值的N端前ANP量指示循环损伤。应当指出关于HGF和N端前ANP的值可以由于个体中慢性疾病的出现而改变，所述慢性疾病例如心力衰竭、肾损伤或衰竭和-在HGF的情况下-急性或慢性肝病。在慢性疾病的情况下，上文引用的值可以显著高于(例如高2 5、7、8或10倍)预先引用的值，其可应用于不具有慢性疾病、特别地不是慢性心脏病、进一步急性冠状动脉综合征的个体。术语“至少一个参考量”意指一个或超过一个参考量，例如2个参考量。在本发明的一个优选实施方案中，上文引用的标记的测定以间隔执行，以便测定标记量的评价。这在急性事件是否出现/已出现的评估中可以是有帮助的。如果标记sFLT-1、HGF和/或N端前ANP中至少一个的测定量大于预先引用的参考量，那么假定急性事件。优选地，偏差是至少约20%、或至少约30%、或至少约50%、或至少约100%、更优选至少约200%、更加优选至少约500%、特别是至少约1000%。在给定标记(或多种标记)的2次测定之间的时间间隔是至少约15分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约I小时、至少约90分钟、至少约2小时、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时或至少约6小时。本领域技术人员知道依照个体的状态、各自标记改变的量的趋势(即缺血和/或循环损伤的发展)等，时间间隔和偏差可以改变。本发明的另一个实施方案包含H-FABP和/或肌红蛋白的测定，其在测定心脏肌钙蛋白和/或测量ECG后，和在本发明的方法的步骤a)和b)中测定sFLT-1和任选的HGF的量前，以便测定受试者是否已患有心肌梗塞，特别是NSTEMI。如本发明中定义的受试者中大于用于纳入MI出现的参考量的肌红蛋白和任选的H-FABP量应指示所述受试者中MI的近期出现。如本发明中定义的受试者中低于用于排除MI出现的参考量的肌红蛋白和任选的H-FABP量应是MI梗塞近期未出现的指示物；因此，所述受试者可能患有UAP。应当理解在本发明的背景中，如本发明中定义的其肌红蛋白量在上文提及的参考量(用于纳入MI的近期出现的参考量和用于排除MI的近期出现的参考量)之间的受试者可能需要再次诊断。优选地，这还可以对于在其中测定肌红蛋白和H-FABP的量的受试者完成，其中2个量都不对应，例如一个量大于(或低于)各自的参考量，而另一个量不大于(或低于)各自的参考量。特别地，如本发明中定义的受试者中大于77 ng/ml的肌红蛋白量指示MI的近期出现(纳入),而小于55 ng/ml的量指示MI近期未出现(排除)。此 夕卜，当除肌红蛋白的量外，测定所述受试者的样品中H-FABP的量，并且与关于H-FABP的至少一个参考量比较时，基于如本发明中定义的受试者的样品中肌红蛋白的测定，诊断的灵敏度和特异性甚至增加。特别地，如本发明中定义的受试者中大于5700 pg/ml的H-FABP量指示MI的近期出现(纳入),而小于2500 pg/ml的量指示MI近期未出现(排除)。肌红蛋白是由154个氨基酸的单条多肽链组成的细胞质血红素蛋白，并且几乎专一地仅在心肌细胞和氧化性骨骼肌纤维中表达。如同血红蛋白，肌红蛋白可逆地结合氧，并且因此可以促进在增加代谢活性的时期过程中从红细胞到线粒体的氧转运，或在低氧或缺氧条件过程中充当氧储库Ordway G.和Garry D. J. , Myoglobin an essentialhemoprotein in striated muscle. 2004. Journal of Experimental Biology 207，3441-3446 (2004)。心脏型脂肪酸结合蛋白，在本文中也称为H-FABP或脂肪酸结合蛋白，是小胞质蛋白质，其充当心肌细胞中长链脂肪酸从细胞膜到其在线粒体中的细胞内代谢部位的主要转运蛋白，在其中它们进入柠檬酸循环。H-FABP存在于心肌中，并且一般认为响应心肌损伤快速释放到循环内。几个研究显示H-FABP是心肌梗塞的早期生物化学标记，例如Okamoto 等人，Clin Chem Lab Med 38 (3):231-8 (2000)Human heart-type cytoplasmicfatty acid-binding protein (H-FABP) for the diagnosis of acute myocardialinfarction. Clinical evaluation of H-FABP in comparison with myoglobin andcreatine kinase isoenzyme MB ;0’Donoghue 等人，Circulation，114 ;550_557 (2006)Prognostic Utility of Heart-Type Fatty Acid Binding Protein in patients withacute coronary syndrome 或 Ruzgar 等人，Heart Vessels, 21 ；209~314 (2006) The useof human heart-type fatty acid-binding protein as an early diagnostic marker ofmyocardial necrosis in patients with acute coronary syndrome,and its comparisonwith troponinT and its creatine kinase-myocardial band)。如本文使用的，肌红蛋白和H-FABP还分别包含肌红蛋白和H-FABP多肽的变体。此类变体具有与特异性肌红蛋白和H-FABP多肽至少相同的基本生物学和免疫学性质。特别地，如果它们可通过本说明书中提及的相同特异性测定检测，例如通过分别使用特异性识别所述肌红蛋白和H-FABP多肽的多克隆或单克隆抗体的ELISA测定，那么它们共享相同的基本生物学和免疫学性质。此外，应当理解如依照本发明提及的变体应具有由于至少一个氨基酸置换、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中变体的氨基酸序列仍优选与特异性H-FABP和肌红蛋白多肽的氨基酸序列至少50%、60%、70%、80%、85%、90%、92%、95 %、97 %、98 %或99 %等同。在2个氨基酸序列之间的同一性程度可以通过本领域众所周知的算法进行测定。优选地，通过在比较窗上比较2个最佳比对的序列测定同一性程度，其中与用于最佳比对的参考序列(其不包含添加或缺失)比较，在比较窗中氨基酸序列的片段可以包含添加或缺失(例如缺口或突出端)。通过下述计算百分比，测定在其上相同氨基酸残基在2个序列中出现的位置数目，以获得匹配位置数目，将匹配位置数目除以比较窗中的位置总数目，并且将结果乘以100，以获得序列同一性百分比。用于比较的序列的最佳比对可以通过下述进行Smith和Waterman Add. APL. Math. 2:482 (1981)的局部同源性 算法，Needleman 和 Wunsch J. Mol. Biol. 48:443 (1970)的同源性比对算法,Pearson 和Lipman Proc. Natl. Acad Sci. (USA)85 2444 (1988)的相似性搜索方法,这些算法的计算机化实现(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG),575 Science Dr. , Madison, WI 中的 GAP、BESTFIT、BLAST、PASTA 和 TFASTA)，或目视检查。考虑到2个序列已鉴定用于比较，优选采用GAP和BESTFIT以测定其最佳比对，和因此同一性程度。优选地，使用用于缺口权数5. 00和用于缺口权数长度0.30的缺省值。上文提及的变体可以是等位基因变体或任何其他物种特异性同系物、旁系同源物或直系同源物。此夕卜，本文提及的变体包括特异性肌红蛋白和H-FABP多肽或前述类型变体的片段，只要这些片段具有如上文提及的基本免疫学和生物学性质。此类片段可以是例如肌红蛋白和H-FABP多肽的降解产物。进一步包括的是由于翻译后修饰例如磷酸化或肉豆蘧酰化而不同的变体。优选地，肌红蛋白的生物学性质是可逆地结合氧的能力。优选地，H-FABP的生物学性质是长链脂肪酸从细胞膜到其在线粒体中的细胞内代谢部位的转运，在其中它们进入柠檬酸循环。应当理解根据在本文上文和下文描述的本发明的方法，关于sFLT-1和优选地加上HGF的抗体或用于其测定的装置可以用于制造诊断组合物用于诊断受试者中的缺血和缺血严重性过程，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，且具有低于视为指示心肌梗塞的量的心脏肌钙蛋白量。本发明还涉及基于所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较，用于分层或评估受试者患有心肌梗塞的危险的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征ACS的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。该方法可以包括至少一个下述步骤a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，c)基于步骤b中、优选步骤a)和b)中获得的信息，诊断缺血状态，d)基于c)中获得的信息，评估患有心肌梗塞的危险。相应地，本发明还涉及用于分层或评估受试者患有心肌梗塞的危险的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征ACS的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，和
b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，
c)基于步骤b中、优选步骤a)和b)中获得的信息，诊断缺血状态，和
d)基于c)中获得的信息，评估患有心肌梗塞的危险。本发明还涉及基于所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I (sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较，用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征ACS的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。该方法可以包括至少一个下述步骤a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，b)t匕较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，c)基于步骤b中、优选步骤a)和b)中获得的信息，诊断缺血状态，d)基于c)中获得的信息，评估患有心肌梗塞的危险。
相应地，本发明进一步涉及用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法，由此所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，和
b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，
c)基于步骤b)中、优选步骤a)和b)中获得的信息，诊断缺血状态，和
d)基于c)中获得的信息，鉴定受试者。此外，本发明还涉及基于所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量与至少一个参考量的比较，在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征ACS的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。该方法可以包括至少一个下述步骤a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，c)基于步骤c)中获得的信息，推荐或决定心脏干预的起始，起始心脏干预或制止心脏干预。相应地，本发明涉及在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括
a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，和
b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，
c)基于步骤b)中、优选步骤a)和b)中获得的信息，诊断缺血状态，和
d)基于步骤c)中获得的信息,推荐或决定心脏干预的起始,起始心脏干预或制止心脏干预。在预先引用的所有实施方案中，即用于分层或评估受试者患有心肌梗塞的危险的方法，用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法，和在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，每种方法还可以使用下述步骤执行
a)基于测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，且比较sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，诊断缺血状态；和
b)基于步骤a)中获得的信息，bi)评估受试者患有心肌梗塞的危险；和/或 bii)鉴定对心脏干预敏感的受试者；和/或
biii)在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预。此外，本发明在预先引用的所有实施方案中，即用于分层或评估受试者患有心肌梗塞的危险的方法，用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法，和在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，其包含关于每种方法使用下述步骤的实施方案
ai)评估受试者患有心肌梗塞的危险；和/或 aii)鉴定对心脏干预敏感的受试者；和/或
aiii)在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预；
其中，所有步骤ai)、aii)和/或aiii)基于通过测定所述受试者的样品中sFLT_l或其变体的量、且比较sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量而诊断受试者中的缺血状态。在本发明的前述方法的一个实施方案中，在另外步骤aa)中在所述受试者的样品中另外测定肝细胞生长因子(HGF)或其变体的量，并且在步骤bb)中与关于HGF的至少一个参考量比较。相应地，在步骤c)中，基于sFLT-1或其变体和HGF或其变体的测定量和sFLT-1的量与关于sFLT-1的至少一个参考量的比较和HGF的量与关于HGF的至少一个参考量的比较，诊断缺血状态。优选地，首先测定sFLT-1的量且随后测定HGF的量，然而，还考虑了以任何次序测定sFLT-1和HGF的量，即同时，或首先sFLT-1和随后HGF，或首先HGF和随后sFLT-1。在本发明的一个进一步实施方案中，在预先引用的所有实施方案中代替sFLT-1测定肝细胞生长因子(HGF)或其变体的量，即用于分层或评估受试者患有心肌梗塞的危险的方法，用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法，和在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。在本发明的这种方法的一个实施方案中，在另外步骤中另外测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，且与关于sFLT-1的至少一个参考量比较，以便诊断缺血状态。在一个优选实施方案中，心脏肌钙蛋白的量与sFLT-1的测定和/或HGF的测定同时进行测定；心脏肌钙蛋白的量的测定还可以在sFLT-1的测定和/或HGF的测定之前。因此，通过测定sFLT-1和/或HGF的量，或任选地，进一步标记，个体的缺血状态优选与肌钙蛋白测定同时或在肌钙蛋白测定后进行测定。相应地，如果心脏肌钙蛋白量在sFLT-1和/或HGF的测定前进行测定，那么sFLT-1和/或HGF的量的测定可以推迟直到心脏肌钙蛋白的量已知时，并且仅在肌钙蛋白量低于本领域一般公认为指示心肌梗塞MI特别是NSTEMI的量的情况下，将测定sFLT-1和/或HGF的量。心脏肌钙蛋白的量甚至可以是零，即用目前可获得的测试无法检测的。在一个进一步优选的实施方案中，各自受试者的ECG与sFLT-1的测定和/或HGF的测定同时进行测定；测量ECG还可以在sFLT-1的测定和/或HGF的测定之前。因此，通过测定sFLT-1和任选的HGF的量，个体的缺血状态优选与测量ECG同时或在测量ECG后进行测定。相应地，如果ECG测量在sFLT-1和/或HGF的测定前进行，那么sFLT_l和/或HGF的量的测定可以推迟直到记录ECG时。优选地，仅在受试者的ECG未显示ST段抬高的情况下，将测定sFLT-1和/或HGF的量。优选地，在ECG显示ST段抬高的情况下，受试者将视为已患有STEMI，意指一般而言将不执行本发明的方法-涉及在MI之前的缺血状态的诊断。本发明的方法的上文提及的优选实施方案可以这样执行，从而使得仅测定心脏肌钙蛋白的水平或测量ECG ;或本发明的方法包括心脏肌钙蛋白水平的测定和测量ECG。sFLT-1和HGF的参考量是预先引用以指示个体中的缺血状态的那些。如本发明中定义的关于指示缺血状态的sFLT-1的参考量(阈值量)如下约92pg/ml、更优选约109 pg/mlo低于上文引用值的sFLT-1量指示非缺血状态,其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤不相关，或不导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。等于或大于上文引用参考量的sFLT-1量指示缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤相关，或导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。 如本发明中定义的关于缺血状态的HGF的参考量(阈值量)如下约0.62 pg/ml,更优选约0.73 pg/ml。低于上文引用值的HGF量指示非缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤不相关，或不导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。等于或大于上文引用参考量的HGF量指示缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤相关，或导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。在sFLT-1和任选的HGF值不指示缺血状态的情况下，个体不需要就心脏病而言的任何进一步检查。一般而言，个体可以准予回家。在通过sFLT-1和任选的HGF的量诊断缺血疾病的情况下，在本发明的一个优选实施方案中，各自个体接受如下文指定的治疗方案，也称为“心脏干预”。在通过sFLT-1和任选的HGF的量诊断缺血疾病的情况下，各自个体可能需要就心脏或心血管疾病而言的进一步检查。在一个优选实施方案中，在本发明的背景中的这些进一步诊断方法包括多个种类的应激测试，例如运动应激、例如运动应激超声心电图、运动应激计算机断层扫描、运动应激铊扫描；和血管造影术(侵入或虚拟的，例如通过螺旋计算机断层扫描)。取决于进一步检查的结果，各自个体接受如下文指定的治疗方案，也称为“心脏干预”。在本发明的一个进一步优选的实施方案中，测定N端前ANP的量，以便诊断受试者的可能循环损伤。关于ANP型肽特别是N端前ANP的参考量是与循环损伤结合预先引用的那些。如本发明中定义的关于N端前ANP对于循环损伤的参考量(阈值量)如下约1320 pg/ml、更优选约1674 pg/ml。等于或大于上文引用值的N端前ANP量指示循环损伤。本发明的另一个实施方案包含H-FABP和/或肌红蛋白的测定，其在测定心脏肌钙蛋白和/或测量ECG后，和在本发明的方法的步骤a)和b)中测定sFLT-1和任选的HGF的水平前，以便测定受试者是否已患有心肌梗塞，特别是NSTEMI。如本发明中定义的受试者中大于用于纳入MI出现的参考量的肌红蛋白和任选的H-FABP量应指示所述受试者中MI的近期出现。如本发明中定义的受试者中低于用于排除MI出现的参考量的肌红蛋白和任选的H-FABP量应是MI梗塞近期未出现的指示物；因此，所述受试者可能患有UAP。应当理解在本发明的背景中，如本发明中定义的其肌红蛋白量在上文提及的参考量(用于纳入MI的近期出现的参考量和用于排除MI的近期出现的参考量)之间的受试者可能需要再次诊断。优选地，这还可以对于在其中测定肌红蛋白和H-FABP的量的受试者完成，其中2个量都不对应，例如一个量大于(或低于)各自的参考量，而另一个量不大于(或低于)各自的参考量。由于前述方法，在对患者实施心脏干预前可以容易地执行危险/成功分层。在患者证明对心脏干预不敏感的情况下，可以避免所述危险、时间和/或成本密集的治疗。因此，除使受试者免于伴随心脏干预的不利和严重副作用外，本发明的方法对于健康系统将是有利的，因为将节省资源。在本发明的前述方法的背景中应当理解，诊断为未患有MI但具有缺血状态或其缺血状态发展的受试者对心脏干预敏感，所述缺血状态假定导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。如本文使用的，术语“鉴定”意指评估受试者是否对于心脏干预敏感。如本领域技术人员应当理解的，此类评估通常不预期对于待鉴定的所有(即100%)受试者是正确的。 然而，该术语要求可以鉴定统计上显著比例的受试者(例如队列研究中的队列)。本领域技术人员使用多种众所周知的统计评价工具可以无需进一步费力地测定比例是否是统计上显著的，例如置信区间的测定、P值测定、斯氏t检验、曼-怀二氏检验等。细节在Dowdy和ffearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983 中发现。优选置信区间是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至少99%。p值优选是0. 1,0. 05、0. 01,0. 005或0. 0001。更优选地，群体的至少60%、至少70%、至少80%或至少90%受试者可以通过本发明的方法适当地鉴定。术语“心脏干预”包含由本领域技术人员视为合适的那些治疗方案。该术语包含通过手术、显微手术、影响心血管系统和优选心脏的其他侵入性疗法，以及保守(非手术)治疗方法的干预。保守方法是本领域已知的，并且包括非药理学方法和药理学方法。药理学方法涉及药剂的施用。合适的药剂包括ACE抑制剂，特别是依那普利、卡托普利、雷米普利、群多普利；血管紧张素受体拮抗剂和醛固酮拮抗剂，特别是氯沙坦、缬沙坦、厄贝沙坦、坎地沙坦、替米沙坦、依普罗沙坦、螺内酯；他汀类药物(statins)，特别是阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀、辛伐他�。籔阻滞剂如普萘洛尔(proprenolol)、美托洛尔、比索洛尔、卡维地洛、布新洛尔、奈必洛尔；硝酸盐；肾上腺素能激动剂，如多巴酚丁胺、多巴胺、肾上腺素、异丙肾上腺素(isoprotenerol)、去甲肾上腺素、苯肾上腺素；抗血小板齐IJ，特别是阿司匹林和氯吡格雷(clopidrogel);抗凝血药，特别是华法林、肝素、凝血酶抑制剂、溶栓药物。优选地，如本文使用的心脏干预是旨在恢复心脏的适当氧供给的治疗方案。这优选通过恢复遍及支持心脏的血管即冠状血管的血流来达到。那些血管可以由于例如血栓或粥样硬化斑块而受损。相应地，心脏干预应优选包含此类斑块的破坏和/或去除和需要时脉管的恢复。依照本发明的优选心脏干预选自经皮冠状动脉血管成形术、经皮经腔冠状动脉球囊血管成形术、激光血管成形术、冠状动脉支架植入、旁路植入或管腔内技术，其旨在恢复血流、脉管开放、稳定斑块、和/或减少冠状动脉内血栓负荷。在个体患有循环损伤(如通过ANP型利尿钠肽的升高水平指示的)的情况下，当缺血潜在的原因被补救时，循环损伤一般而言消退。一个进一步实施方案涉及受试者中的心肌梗塞的诊断。用于诊断受试者中的心肌梗塞的这种方法包括至少一个下述步骤
a)测定受试者的样品中利尿钠肽和/或肌钙蛋白T的量；
b)比较步骤a)中测定的量与参考量；和
c)优选基于步骤d)中获得的结果，优选地基于步骤a)和b)中获得的结果，诊断心肌梗塞。本领域技术人员知道在本申请中引用的关于心脏肌钙蛋白(肌钙蛋白T或其变体和肌钙蛋白I或其变体)、N端前ANP或其变体-至更少的程度-关于sFLT-1或其变体、HGF或其变体、H-FABP或其变体和肌红蛋白或其变体的浓度可能不应用于患有肾功能受损的患者，优选患有肾衰竭的患者，特别是患有慢性和终末期肾衰竭的患者。在本发明的一个优选实施方案中，患有肾功能受损的患者，优选患有肾衰竭的患者，特别是患有慢性和终末期肾衰竭的患者不包括在(从中排除)本发明的方法中。在另一个优选实施方案中，具有肾 性高血压的患者不包括在(从中排除)本发明的方法中。优选地，如本文使用的，“受试者”排除患有肾功能受损的患者，优选患有肾衰竭的患者，特别是患有慢性和终末期肾衰竭的患者，更优选患有肾性高血压的患者，最优选患有这个句子中提及的疾病和状况之一的所有患者。在这个背景中，“肾衰竭”视为低于60 - 120 ml/分钟的通常范围的受损肾小球滤过率(GFR)，优选低于60 ml/分钟。慢性肾衰竭是肾功能的长时间的进行性恶化，其通常导致终末期肾衰竭。当GFR达到直到约30 ml/分钟的比率时，诊断终末期肾衰竭。通过肌酸酐清除率测定GFR，这是本领域技术人员已知的。具有肾功能受损的受试者显示比上文引用那些更高水平的肌钙蛋白I和肌钙蛋白T，这由于肽的受损清除率。该水平随着肾损伤的严重性而改变。肾损伤的严重性分成多个级别，如下所示。0: 2 90 ml/分钟
I > 90 ml/分钟伴随微量白蛋白尿 2: > 60 - < 90 ml/ 分钟 3: > 30 - < 60 ml/分钟 4: > 15 - < 30 ml/分钟 5: 〈15 ml/ 分钟
(来源National Kidney Foundation,如Am J. Kidney Dis 39 suppl 1,2002;Clinical Practice Guidelines for chronic kidney disease 中出版的X此外，由本发明包含的是用于执行本发明的方法的试剂盒或设备，其包含用于测定受试者的样品中sFLT-1和任选的HGF的量的装置和用于比较所述量与至少一个参考量的装置。如本文使用的，术语“试剂盒”指优选分开提供或在单一容器内的前述装置集合。试剂盒可以另外包含用于测定心脏肌钙蛋白的量的装置。任选地，试剂盒可以另外包含用于就诊断如本发明中定义的受试者中的缺血状态而言解释任何一个或多个测量的结果的用户手册。特别地，此类手册可以包括关于何种测定量对应于何种诊断的信息。这在本说明书中的其他地方详细概述。另外，此类用户手册可以提供关于正确使用试剂盒的组分用于测定各自生物标记的量的说明书。如本文使用的，术语“设备”涉及包含彼此可操作地连接的至少前述装置的装置系统，以便允许缺血状态的诊断或对心脏干预敏感的受试者的鉴定。本发明设备可以另外包含用于测定心脏肌钙蛋白的量的装置。用于测定sFLT-1和HGF的量的优选装置和用于执行比较的装置在上文与本发明的方法结合公开。如何以操作方式连接装置将取决于包括到设备内的装置类型。例如，当应用用于自动化测定肽的量的装置时，通过所述自动化操作装置获得的数据可以通过例如计算机程序进行加工，以便获得所需结果。优选地，装置在此类情况下由单一设备包含。所述设备可以相应地包括分析单位用于应用样品中肽或多肽量的测量和计算机单位用于加工所得到的数据用于评价。可替代地，当装置例如测试条用于测定肽或多肽的量时，用于比较的 装置可以包含分配测定量与参考量的对照条或表。测试条优选与配体偶联，所述配体特异性结合本文提及的肽或多肽。条或设备优选包含用于检测所述肽或多肽与所述配体的结合的装置。用于检测的优选装置与上文涉及本发明的方法的实施方案结合公开。在此类情况下，装置是可操作地连接的，因为系统的用户集合量的测定及其诊断或预后值的结果，其由于手册中给出的说明书和解释。装置可以在此类实施方案中作为分开设备出现，并且优选作为试剂盒一起包装。本领域技术人员将认识到如何无需费力地连接装置。优选设备是无需专科临床医生的特定知识可以应用的那些，例如仅需要装载样品的测试条或电子设备。结果可以作为原始数据的输出给出，其需要由临床医生进行解释。然而，优选地，设备的输出是加工的、即评估的原始数据，其解释不需要临床医生。进一步优选设备包含依照本发明的方法在上文提及的分析单位/设备(例如生物传感器、阵列、与特异性识别sFLT-1或HGF的配体偶联的固体载体、等离振子表面共振设备、NMR光谱仪、质谱仪等)或评价单位/设备。本发明还涉及用于测定受试者的样品中sFLT-1和任选的HGF的量的试剂盒或设备和/或用于测定sFLT-1和任选的HGF的量的装置和/或用于比较sFLT-1和任选的HGF的量与至少一个参考量的装置用于下述的用途诊断受试者中的缺血状态，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准；和/或监控所述受试者中的缺血状态严重性；和/或分层/评估所述受试者患有心肌梗塞的危险；和/或鉴定对心脏干预敏感的所述受试者；和/或决定所述受试者的可能心脏干预。本发明还涉及针对sFLT-1和任选的HGF的至少一种抗体和/或用于测定sFLT_l和任选的HGF的量的装置和/或用于比较sFLT-1和任选的HGF的量与至少一个参考量的装置用于制造用于下述的诊断组合物的用途诊断受试者中的缺血状态，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准；和/或监控所述受试者中的缺血状态严重性；和/或分层/评估所述受试者患有心肌梗塞的危险；和/或鉴定对心脏干预敏感的所述受试者；和/或决定所述受试者的可能心脏干预。本说明书中引用的所有参考文献就其完整公开内容和在本说明书中具体提及的公开内容而言在此引入作为参考。下述实施例应仅举例说明本发明。它们无论如何不应解释为限制本发明的范围。实施例在下述实施例中，下述测试用于测定各自肽的量
肌隹丐蛋白T用Roche Diagnostics的高敏感的hs肌I丐蛋白T免疫测定测试进行测定，其使用ELECSYS 2010分析仪。第一次温育50 U L样品、生物素化的单克隆抗心脏肌钙蛋白T特异性抗体、和用钌络合物(Ru (bpy)2+3)标记的单克隆抗心脏肌钙蛋白T特异性抗体反应，以形成夹心复合物。第二次温育在加入链霉抗生物素蛋白包被的微�：螅春衔锞缮锼睾土疵箍股锼氐鞍椎南嗷プ饔帽涞糜牍滔嘟岷稀＝从旌衔锍槲讲饬靠啄冢谄渲形⒘４帕Σ痘竦降缂谋砻嫔�。随后去除未结合的物质。通过对电极应用电压诱导化学发光发射且通过光电倍增管测量。经由校正曲线测定结果。HGF (肝细胞生长因子)通过酶联免疫吸附测定(RD Systems, Minneapolis,Catalogue Nr. DHGOO)进行测试，其使用对于HGF特异性的单克隆抗体和预包被的微板。将标准和样品吸取到孔内，并且存在的任何HGF由固·定化抗体结合。在洗掉未结合的物质后，将对于HGF特异性的酶联多克隆抗体加入孔中。在洗涤以去除任何未结合的抗体-酶试剂后，将底物溶液加入孔中，并且颜色与起始步骤中结合的HGF量成比例显出。停止显色并且测量颜色的强度。N 端前 ANP 用得自 Biomedica，Vienna，奥地利的前 ANP ELISA 测定(B1-20892)进行测定。这个夹心测定包含与微量滴定条(microtiterstrip)结合的多克隆绵羊N端前ANP特异性抗体。将样品加入微量滴定条中，从而使得前ANP可以结合抗体。在前ANP与第一种抗体结合后，将第二种前ANP特异性抗体加入器皿中。这个第二种抗体与辣根过氧化物酶(HRP)缀合。在温育后，通过洗涤微量滴定条去除未结合的酶缀合的抗体。最后，加入四甲基联苯胺(TMB)作为用于HRP的底物。样品包含的前ANP越多，结合的缀合抗体越多。因此，器皿中存在的HRP总活性取决于样品中前ANP的量，并且TMB转换的起始速率是样品中N端前ANP的量的度量。sFlt-1 用与来自 Roche Diagnostics, Mannheim,德国的 Elecsys 和 COBAS 分析仪一起使用的sFlt-1免疫测定进行测定。该测定基于夹心原则，并且包含2种单克隆sFlt-1特异性抗体。它们中的第一种是生物素化的，并且第二种抗体是用三(2，2’ -联吡唳(hipyridyl))钌(TT)-络合物标记的。在第一个温育步骤中，2种抗体与样品一起温育。形成包含sFlt-1和2种不同抗体的夹心复合物。在接下来的温育步骤中，将链霉抗生物素蛋白包被的珠加入这种复合物中。珠与夹心复合物结合。随后将反应混合物抽吸到测量孔内，在其中珠磁力捕获到电极的表面上。电压的应用随后诱导来自钌络合物的化学发光发射，其通过光电倍增管测量。光的量取决于电极上的夹心复合物的量。指定的测试还优选在本发明的一般背景中用于测定各自的肽。实施例I.参考值的测定
平均年龄42. 8岁的149个人就sFlTl、前ANP和HGF的存在进行测试，在测试时和在他们无症状前2周内，特别地他们不具有胸痛，也不存在如通过N端前ANP测试指示的心功能障碍的证据。结果(参见表I):
表I :
权利要求
1.一种用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括 a)测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量， b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和 c)基于步骤b)中获得的信息，诊断所述缺血状态。
2.根据权利要求I的方法，其中另外测定肝细胞生长因子(HGF)或其变体的量，并且与关于HGF的参考值比较。
3.根据权利要求I或2的方法，其中关于指示缺血状态的sFLT-1或其变体的参考量是约92 pg/ml、更优选约109 pg/ml，其中低于或等于所述参考量的sFLT-1或其变体的量指示非缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤不相关，或不导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤，并且大于所述参考量的sFLT-1或其变体的量指示缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤相关，或导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。
4.根据权利要求I- 3中任一项的方法，其中关于HGF或其变体的参考量是约0. 62pg/ml、更优选约0. 73 pg/ml,其中低于或等于所述参考量的HGF或其变体的量指示非缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤不相关，或不导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤，并且大于所述参考量的HGF或其变体的量指示缺血状态，其与可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤相关，或导致可逆的心功能障碍或不可逆的心脏损伤。
5.根据权利要求I- 4中任一项的方法，其中所述方法另外包括测定所述样品中ANP型肽、优选N端前ANP或其变体的量，用于测定所述受试者中的循环损伤。
6.根据权利要求7的方法,其中等于或大于约1320pg/ml、更优选约1674 pg/ml的N端前ANP或其变体的量指示循环损伤。
7.根据权利要求I- 6中任一项的方法，其中所述方法另外包括所述各自受试者的心脏肌钙蛋白的测定和/或测量ECG。
8.根据权利要求I- 7中任一项的方法，其中所述sFLT-1或其变体用于诊断心肌梗塞。
9.根据权利要求I- 8中任一项的方法，其中所述方法另外包括测定所述样品中的肌红蛋白或其变体和/或心脏脂肪酸结合蛋白(HFABP)或其变体。
10.一种用于监控受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括下列步骤 a)至少在2个不同时间点测定所述受试者的样品中可溶性fms样酪氨酸激酶-I(sFLT-1)或其变体的量，和 b)比较如步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，和 c)基于步骤b)中获得的信息，诊断在至少2个不同时间点的所述缺血状态，以便监控所述缺血状态。
11.一种用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法，由此所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括 a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，和 b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量，c)基于步骤b)中获得的信息，诊断所述缺血状态，和 d)基于步骤b)中获得的信息，鉴定所述受试者。
12.—种在受试者中推荐或决定可能的心脏干预或起始可能的心脏干预的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括 a)测定所述受试者的样品中sFLT-1或其变体的量，和 b)比较步骤a)中测定的sFLT-1或其变体的量与至少一个参考量， c)基于步骤b)中获得的信息，诊断所述缺血状态，和 d)基于步骤b)中获得的信息,推荐或决定心脏干预的起始,起始心脏干预或制止心脏干预。
13.根据权利要求12的方法，其中所述心脏干预选自药剂的施用；经皮冠状动脉血管成形术；经皮经腔冠状动脉球囊血管成形术；激光血管成形术；冠状动脉支架植入；旁路植入或管腔内技术，其旨在恢复血流、脉管开放、稳定斑块、和/或冠状动脉内血栓负荷的减少。
14.一种用于执行如权利要求I - 13中任一项中所示的方法的试剂盒或设备，其包含用于测定受试者的样品中sFLT-1或其变体的量的装置，和任选地用于测定受试者的样品中HGF或其变体的量的装置，和用于比较sFLT-1的量和任选地HGF的量与至少一个参考量的装置。
15.一种用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者显示急性冠状动脉综合征的体征和症状，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准，所述方法包括 a)测定所述受试者的样品中可溶性HGF或其变体的量， b)比较步骤a)中测定的HGF或其变体的量与至少一个参考量，和 c)基于步骤b)中获得的信息，诊断所述缺血状态。
全文摘要
本发明涉及用于诊断受试者中的缺血状态的方法，所述受试者患有急性冠状动脉综合征，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。此外，本发明涉及用于鉴定对心脏干预敏感的受试者的方法，其中所述受试者患有急性冠状动脉综合征，但未达到关于心肌梗塞的诊断标准。本发明的方法基于所述受试者的样品中fms样酪氨酸激酶-1(sFLT-1)和任选的肝细胞生长因子(HGF)的测定，并且比较sFLT-1和任选的HGF的量与参考量。本发明还包含的是执行本发明的方法的试剂盒或设备。
文档编号G01N33/74GK102713634SQ201080062297
公开日2012年10月3日 申请日期2010年11月29日 优先权日2009年11月27日
发明者A.霍施, D.兹杜内克, G.黑斯 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
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