一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方法
【专利摘要】本发明涉及临床医学领域，特别涉及一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方法。鼻腔分泌物的处理液，包括依次使用的清洗液、消化液和保护液，先用清洗液对鼻腔分泌物进行悬浮，同时用消化液对鼻腔分泌物中的粘性成分进行裂解，并通过细胞滤网过滤和离心，去除杂质和粘性物质，然后加入保护液，使细胞在保护液中均匀分散，将均匀分散的细胞转移至细胞滤网，再将细胞滤网上的细胞转移至载玻片上，固定，得到细胞分布薄而均匀，清晰美观的细胞涂片，采用显微镜观察时细胞分布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而且去除了阻碍观察的粘液和杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。
【专利说明】一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及临床医学领域，具体而言，涉及一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方 法。
【背景技术】
[0002] 鼻腔分泌物的细胞学检查对临床的诊断和治疗具有很重要的意义。传统的鼻分泌 物细胞学检查是将分泌物或粘膜刮出物直接涂在载玻片中心，干燥固定后直接进行染色处 理，但是，鼻分泌物含有大量的杂质和粘性物质，导致分泌物中的目的细胞不能在载玻片均 匀分散，不能进行免疫组化染色；此外，分泌物中的杂质还会对涂片的染色效果和结果的正 确判断有着很大影响。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方法，以解决上述的问 题。
[0004] 在本发明的实施例中提供了一种鼻腔分泌物的处理液，包括依次使用的清洗液、 消化液和保护液；
[0005] 所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、 重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2?0. 4g/L，所述甲醇 与所述重蒸水的体积比为1:0. 5?1. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为 1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2?0. 3g/L，所述氯化钠 与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 1? 〇. 3g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7. 2?7. 4 ;
[0006] 所述消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和 盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积比为90?110g/L，所述磷酸氢二钠与所 述重蒸水的质量体积比为1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 0. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸 水的质量体积比为〇. 1?〇. 3g/L，所述盐酸将消化液pH调至7. 2?7. 4 ;
[0007] 所述保护液包括吐温、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、 氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温与所述重蒸水的体积比为0.04?0.06:1，所述乙二胺 四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为0. 2?0. 4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为 1:0. 5?1. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氢 钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为 7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 1?0. 3g/L，所述盐酸将保护液pH 调至7. 2?7. 4。
[0008] 优选地，所述吐温为吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81 和吐温85中的任一种或多种混合。
[0009] 优选地，所述鼻腔分泌物的处理液还包括固定液I，所述固定液I由多聚甲醛、磷 酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸组成，所述多聚甲醛与所述重蒸水的 质量体积比为35?45g/L,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 0?1. 5g/L, 所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的 质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 1?0. 3g/L，所述盐 酸将固定液I的pH调至7. 2?7. 4。
[0010] 优选地，所述鼻腔分泌物的处理液还包括固定液II，所述固定液II由甲醇和丙酮 以体积比为1 :〇. 5?1. 5配制而成。
[0011] 鼻腔分泌物的处理方法包括以下步骤：
[0012] (a)取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至所述清洗液20?40ml中，加入所 述消化液，加入的所述消化液与所述清洗液的体积比为1?5 :100,振荡器400?600rpm， 20?40分钟振荡混匀；
[0013] (b) 1500?2500rpm离心5?15分钟，弃去上清，轻轻震散开底部的沉淀，加入 20?40ml所述保护液并混匀，用孔径为30?200 μ m细胞滤网过滤，收集过滤液；
[0014] (C)将所述过滤液用孔径为3?8μπι的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上的细胞转移 至载玻片上，得到细胞涂片；
[0015] (d)对所述细胞涂片进行细胞固定，染色处理，然后通过显微镜观察细胞涂片。
[0016] 优选地，在所述步骤（c)中，所述过滤液通过细胞涂片机制作细胞涂片。
[0017] 优选地，所述细胞涂片机制作细胞涂片具体为：
[0018] 将所述细胞滤膜进行负压处理，当细胞滤膜上覆盖了 8?15%面积的细胞，负压 吸引停止，所述过滤液中的细胞吸附在所述细胞滤膜表面；
[0019] 将所述细胞滤膜吸附有细胞的一侧贴附在载玻片上，通过正压鼓气和静电吸附作 用，使吸附在细胞滤膜表面的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片。
[0020] 优选地，在所述（d)中，所述细胞固定采用本发明提供的固定液I或固定液II进 行固定。
[0021] 优选地，在所述（b)中，所述细胞滤网的孔径为80?100 μ m。
[0022] 优选地，在所述（a)中，采用取样器对鼻腔分泌物进行取样。
[0023] 本发明实施例提供的鼻腔分泌物的处理液及其处理方法，采用清洗液对鼻腔分泌 物进行悬�。庇孟憾员乔环置谖镏械恼承猿煞纸辛呀猓⑼ü赴送撕� 离心，去除杂质和粘性物质，然后加入保护液，使细胞在保护液中均匀分散，将均匀分散的 细胞转移至细胞滤网，再将细胞滤网上的细胞转移至载玻片上，固定，得到细胞分布薄而均 匀，清晰美观的细胞涂片，采用显微镜观察时细胞分布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠， 而且去除了阻碍观察的粘液和杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。
【专利附图】
【附图说明】
[0024] 图1示出了本发明实施例1细胞HE染色的显微镜100倍镜下观察图；
[0025] 图2示出了本发明实施例1对照组细胞HE染色的显微镜100倍镜下观察图；
[0026] 图3示出了本发明实施例2细胞HE染色的显微镜100倍镜下观察图；
[0027] 图4示出了本发明实施例2对照组细胞HE染色的显微镜100倍镜下观察图；
[0028] 图5示出了本发明实施例3中MUC5AC染色通过显微镜400倍镜观察图；
[0029] 图6示出了本发明实施例3中MUC5AC染色通过显微镜1000倍镜观察图；
[0030] 图7示出了本发明实施例3中MUC2染色通过显微镜400倍镜观察图；
[0031] 图8示出了本发明实施例3中MUC2染色通过显微镜1000倍镜观察图；
[0032] 图9示出了本发明实施例4中tubulin染色通过显微镜100倍镜观察图；
[0033] 图10示出了本发明实施例4中tubulin染色通过显微镜1000倍镜观察图。
【具体实施方式】
[0034] 下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。
[0035] 本发明实施例中提供了 一种鼻腔分泌物的处理液及其处理方法。
[0036] -种鼻腔分泌物的处理液，包括依次使用的清洗液、消化液和保护液；
[0037] 所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、 重蒸水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2?0. 4g/L，所述甲醇 与所述重蒸水的体积比为1:0. 5?1. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为 1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2?0. 3g/L，所述氯化钠 与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 1? 〇. 3g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7. 2?7. 4 ;
[0038] 所述消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和 盐酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积比为90?110g/L，所述磷酸氢二钠与所 述重蒸水的质量体积比为1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 0. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸 水的质量体积比为〇. 1?〇. 3g/L，所述盐酸将消化液pH调至7. 2?7. 4 ;
[0039] 所述保护液包括吐温、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、 氯化钾、重蒸水和盐酸，所述吐温与所述重蒸水的体积比为0.04?0.06:1，所述乙二胺 四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为0. 2?0. 4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为 1:0. 5?1. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 0?1. 5g/L，所述磷酸二氢 钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为 7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 1?0. 3g/L，所述盐酸将保护液pH 调至7. 2?7. 4。
[0040] 本发明实施例提供的鼻腔分泌物的处理液及其处理方法，采用清洗液对鼻腔分泌 物进行悬�。莘置谖镏姓骋旱亩嗌偌尤胂海憾员乔环置谖镏械恼承猿煞纸� 行裂解，并通过细胞滤网过滤和离心，去除杂质和粘性物质，然后加入保护液，使细胞在保 护液中均匀分散，将均匀分散的细胞转移至细胞滤网，再将细胞滤网上的细胞转移至载玻 片上，固定，得到细胞分布薄而均匀，清晰美观的细胞涂片，采用显微镜观察时细胞分布均 匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而且去除了阻碍观察的粘液和杂质的影响，并可以直接 进行免疫组化染色。
[0041] 吐温（或聚山梨酯）为非离子型表面活性剂，具有很好的保护细胞的作用。优选 地，所述吐温为吐温20、吐温21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81和吐温85中的 任一种或多种混合。
[0042] 为了得到更好的固定效果，优选地，所述鼻腔分泌物的处理液还包括固定液I，所 述固定液I由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸组成，所 述多聚甲醛与所述重蒸水的质量体积比为35?45g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质 量体积比为1. 0?1. 5g/L,所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2?0. 3g/L, 所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积 比为0. 1?0. 3g/L，所述盐酸将固定液I的pH调至7. 2?7. 4。固定液I用于常规细胞形 态学观察的细胞的固定，固定效果好。
[0043] 优选地，所述鼻腔分泌物的处理液还包括固定液II，所述固定液II由甲醇和丙酮 以体积比为1 :〇. 5?1. 5配制而成。固定液II用于对细胞核观察的细胞的固定，固定效果 好。
[0044] 鼻腔分泌物的处理方法包括以下步骤：
[0045] (a)取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至所述清洗液20?40ml中，加入所 述消化液，加入的所述消化液与所述清洗液的体积比为1?5 :100,振荡器400?600rpm， 20?40分钟振荡混匀；
[0046] (b) 1500?2500rpm离心5?15分钟，弃去上清，轻轻震散开底部的沉淀，加入 20?40ml所述保护液并混匀，用孔径为30?200 μ m细胞滤网过滤，收集过滤液；
[0047] (c)将所述过滤液用孔径为3?8 μ m的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上的细胞转移 至载玻片上，得到细胞涂片；
[0048] (d)对所述细胞涂片进行细胞固定，染色处理，然后通过显微镜观察细胞涂片。
[0049] 本鼻腔分泌物的处理方法步骤简单易行，且得到的细胞涂片细胞分布薄而均匀， 清晰美观的细胞涂片，采用显微镜观察时细胞分布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而 且去除了阻碍观察的粘液和杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。
[0050] 其中，细胞固定中细胞涂片浸入固定液20?30分钟，以达到更好的固定效果。在 所述步骤（b)中，离心采用1500?2500rpm离心5?15分钟，足以分散细胞，又不破坏细 胞形态。
[0051] 优选地，在所述步骤（c)中，所述过滤液通过细胞涂片机制作细胞涂片。使用细胞 涂片机制作细胞涂片，效率高，节约人力，且得到的细胞涂片细胞分布均匀。
[0052] 优选地，所述细胞涂片机制作细胞涂片具体为：
[0053] 将所述细胞滤膜进行负压处理，当细胞滤膜上覆盖了 8?15%面积的细胞，负压 吸引停止，所述过滤液中的细胞吸附在所述细胞滤膜表面；
[0054] 将所述细胞滤膜吸附有细胞的一侧贴附在载玻片上，通过正压鼓气和静电吸附作 用，使吸附在细胞滤膜表面的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片。
[0055] 采用这种方式制作细胞涂片，细胞的杂质含量少，通过控制细胞滤膜上的覆盖细 胞的数量，可以避免细胞的重叠，且细胞在载玻片上分布薄且均匀，制得的细胞涂片进行观 察，清晰美观，细胞分布均匀，具有代表性，不仅细胞无重叠，而且去除了阻碍观察的粘液和 杂质的影响，并可以直接进行免疫组化染色。
[0056] 固定液I用于常规细胞形态学观察的细胞的固定；固定液II用于对细胞核观察的 细胞的固定；两者根据不同的细胞固定的观察目的而使用，且两者固定效果好。优选地，在 所述（d)中，所述细胞固定采用本发明提供的固定液I或固定液II进行固定。
[0057] 细胞直径为10?20 μ m，细胞滤网是将液体成份中大于细胞体积的杂质成份过滤 掉。优选地，在所述（b)中，所述细胞滤网的孔径为80?100 μ m。
[0058] 优选地，在所述（a)中，采用取样器对鼻腔分泌物进行取样。
[0059] 鼻腔分泌物取样器，包括：刷头、刷体和刷柄，所述刷头和刷柄分别位于所述刷体 的两端；
[0060] 所述刷头的长度为3?30mm，宽度为1?5mm，厚度为2?10mm ;所述刷体的长度 为50?80mm,所述刷柄的长度为50?80mm ;
[0061] 所述刷头为柱体，所述刷头的前端端面和其侧面分别设置有刷毛。
[0062] 优选地，所述刷体和所述刷柄之间还设置有衔接部；
[0063] 所述衔接部的一端与所述刷体连接，另一端与所述刷柄连接，所述刷体与所述刷 柄分别位于所述衔接部的两侧，所述刷柄和所述刷体的延长线之间的夹角为0?30度。 [0064] 优选地，所述刷毛的横截面为圆形或椭圆形或十字形或多边形。
[0065] 优选地，所述刷毛的材质为聚酰胺6,所述刷毛的横截面直径为0. 05?0. 5mm。
[0066] 优选地，所述刷毛的长度为2?5mm。
[0067] 优选地，所述刷毛在距所述端面或所述侧面的边缘0. 1?5mm处设置。
[0068] 优选地，所述刷柄呈长条状，所述刷柄的横截面为扁平状或圆柱状，其宽度或直径 为2?10mm η
[0069] 优选地，所述刷体的宽度沿所述刷头的方向逐渐减�。鏊⑻逵胨鱿谓硬苛� 接的部位其宽度为4?6mm，所述刷体与所述刷头连接的部位其宽度为2?3mm。
[0070] 优选地，所述刷柄的表面设置有防滑槽。
[0071] 刷头的长度为3?30mm，刷头的宽度为1?5mm，刷头的厚度为2?10mm，刷体的 长度为50?80mm，刷柄的长度为50?80mm，鼻腔分泌物取样器的大小与鼻孔相适；刷头为 柱体，刷头的端面和侧面设置有刷毛。通过在刷头侧面设置的刷毛在鼻腔刷�。词占乔� 侧壁上的分泌物；通过在刷头前端设置的刷毛，可以精准定位刷取指定范围的分泌物，收集 的样本定位点准确且更为全面，此外，采用刷毛收集分泌物后，刷毛直接在溶液中涮洗，刷 毛本身没有残留物，并且不会对标本产生额外的干扰物。
[0072] 实施例1
[0073] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸 水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为0. 3g/L，所述甲醇与所述重蒸 水的体积比为1:1，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 44g/L，所述磷酸二氢 钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 24g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为8g/ L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7. 3 ;
[0074] 消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐 酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积比为l〇〇g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水 的质量体积比为1. 44g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 24g/L，所述氯 化钠与所述重蒸水的质量体积比为8g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2g/ L，所述盐酸将消化液pH调至7. 3 ;
[0075] 保护液包括吐温-20、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化 钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-20与所述重蒸水的体积比为0.05:1，所述乙二胺四乙酸与所 述重蒸水的质量体积比为〇.3g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:1，所述磷酸氢二 钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 44g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 0. 24g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为8g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量 体积比为0. 2g/L，所述盐酸将保护液pH调至7. 3。
[0076] 固定液I，由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸组 成，所述多聚甲醛与所述重蒸水的质量体积比为40g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质 量体积比为1. 44g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 24g/L，所述氯化钠 与所述重蒸水的质量体积比为8g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2g/L，所 述盐酸将固定液I的pH调至7. 3。
[0077] 鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：
[0078] (a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清洗液20ml中，加入 0. 2ml消化液，用振荡器500rpm，20min，振荡混勻；
[0079] (b)用离心机离心，2000rpm，lOmin，弃去上清，轻轻震散开底部的沉淀，加入30ml 保护液并混匀，用孔径为1〇〇 μ m细胞滤网过滤，收集过滤液；
[0080] (c)将过滤液用孔径为3μπι的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上的细胞转移至载玻片 上，得到细胞涂片；
[0081] (d)采用固定液I对细胞涂片进行细胞固定，固定液对细胞涂片上的细胞固定是 将细胞涂片直接浸没在固定液20min，用于常规细胞形态学观察，然后进行HE染色处理，HE 染色按常规方法进行，然后通过显微镜100倍观察细胞涂片，结果如图1所示；对照组采用 常规的方式处理鼻腔分泌物然后进行HE染色处理，然后通过显微镜100倍观察细胞涂片， 结果如图2所示。从图1可以看出，细胞分散效果好，且基本没有重叠现象，而图2中细胞 重叠严重，分散性差。
[0082] 实施例2
[0083] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸 水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为0. 2g/L，所述甲醇与所述重蒸 水的体积比为1:0. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. Og/L，所述磷酸二 氢钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7g/ L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. lg/L，所述盐酸将清洗液pH调至7. 2 ;
[0084] 消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐 酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积比为90g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的 质量体积比为1. 〇g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2g/L，所述氯化钠 与所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. lg/L，所 述盐酸将消化液pH调至7. 2;
[0085] 保护液包括吐温-80、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化 钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-80与所述重蒸水的体积比为0.04:1，所述乙二胺四乙酸与所 述重蒸水的质量体积比为〇. 2g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0. 5,所述磷酸氢 二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 〇g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 0. 2g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量 体积比为0. lg/L，所述盐酸将保护液pH调至7. 2。
[0086] 固定液I，由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐酸组 成，所述多聚甲醛与所述重蒸水的质量体积比为35g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质 量体积比为1. 〇g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2g/L，所述氯化钠与 所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. lg/L，所述 盐酸将固定液I的pH调至7. 2。
[0087] 鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：
[0088] (a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清洗液20ml中，加入 0. 2ml消化液，用振荡器500rpm，20min，振荡混勻；
[0089] (b)用离心机离心，2000rpm，lOmin，弃去上清，轻轻震散开底部的沉淀，加入30ml 保护液并混匀，用孔径为80 μ m细胞滤网过滤，收集过滤液；
[0090] (c)将过滤液用孔径为3μπι的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上的细胞转移至载玻片 上，得到细胞涂片；
[0091] (d)采用固定液I对细胞涂片进行细胞固定，固定液对细胞涂片上的细胞固定是 将细胞涂片直接浸没在固定液20min，用于常规细胞形态学观察，然后进行HE染色处理，HE 染色按常规方法进行，通过显微镜100倍观察细胞涂片，结果如图3所示；对照组采用常规 的方式处理鼻腔分泌物然后进行HE染色处理，然后通过显微镜100倍观察细胞涂片，结果 如图4所示。从图3可以看出，细胞分散效果好，且基本没有重叠现象，而图4中细胞重叠 严重，分散性差。
[0092] 实施例3
[0093] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸 水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为〇.4g/L，所述甲醇与所述重蒸 水的体积比为1:1. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 5g/L，所述磷酸二 氢钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为9g/ L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 3g/L，所述盐酸将清洗液pH调至7. 4 ;
[0094] 消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐 酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积比为ll〇g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水 的质量体积比为1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 3g/L，所述氯化 钠与所述重蒸水的质量体积比为9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 3g/L， 所述盐酸将消化液pH调至7. 4 ;
[0095] 保护液包括吐温-20、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化 钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-20与所述重蒸水的体积比为0.06:1，所述乙二胺四乙酸与所 述重蒸水的质量体积比为〇.4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:1. 5,所述磷酸氢 二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 〇. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量 体积比为0. 3g/L，所述盐酸将保护液pH调至7. 4。
[0096] 固定液II由甲醇和丙酮以体积比为1 :0. 5配制而成。
[0097] 鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：
[0098] (a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清洗液40ml中，加入 lml消化液，用振荡器600rpm，30min，振荡混勻；
[0099] (b)用离心机离心，1500rpm，15min，弃去上清，轻轻震散开底部的沉淀，加入40ml 保护液并混匀，用孔径为200 μ m细胞滤网过滤，收集过滤液；
[0100] (c)将过滤液用孔径为8μπι的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上的细胞转移至载玻片 上，得到细胞涂片；
[0101] (d)采用固定液II进行固定，用于对细胞核的观察，固定液对细胞涂片上的细胞 固定是将细胞涂片直接浸没在固定液l〇min，取出，然后进行免疫组化染色，MUC5AC染色和 MUC2染色，分别通过显微镜400倍和1000倍观察细胞涂片，MUC5AC染色通过显微镜400倍 如图5所示；MUC5AC染色通过显微镜1000倍如图6所示；MUC2染色通过显微镜400倍如图 7所示；MUC2染色通过显微镜1000倍如图8所示。从图5?8中可以看出，细胞染色效果 非�：茫夜鄄毂尘按烤唬奁渌又矢扇�。
[0102] 实施例4
[0103] 清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸 水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2g/L，所述甲醇与所述重蒸 水的体积比为1:0. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. Og/L，所述磷酸二 氢钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 2g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7g/ L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. lg/L，所述盐酸将清洗液pH调至7. 2 ;
[0104] 消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐 酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积比为l〇〇g/L，所述磷酸氢二钠与所述重蒸水 的质量体积比为1. 〇g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2g/L，所述氯化 钠与所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. lg/L， 所述盐酸将消化液pH调至7. 2 ;
[0105] 保护液包括吐温-60、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化 钾、重蒸水和盐酸，所述吐温-60与所述重蒸水的体积比为0.04:1，所述乙二胺四乙酸与所 述重蒸水的质量体积比为〇. 2g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0. 5,所述磷酸氢 二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 〇g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为 0. 2g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量 体积比为0. lg/L，所述盐酸将保护液pH调至7. 2。
[0106] 固定液II由甲醇和丙酮以体积比为1 :1. 5配制而成。
[0107] 鼻腔分泌物的处理方法，包括以下步骤：
[0108] (a)采用取样器取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至清洗液30ml中，加入 0. 3ml消化液，用振荡器400rpm，40min，振荡混勻；
[0109] (b)用离心机离心，2500rpm，5min，弃去上清，轻轻震散开底部的沉淀，加入20ml 保护液并混匀，用孔径为30 μ m细胞滤网过滤，收集过滤液；
[0110] (C)将过滤液用孔径为5μπι的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上的细胞转移至载玻片 上，得到细胞涂片；
[0111] (d)采用固定液II进行固定，用于对细胞核的观察，固定液对细胞涂片上的细 胞固定是将细胞涂片直接浸没在固定液15min，取出，然后进行免疫组化染色，然后进行 tubulin染色，分别通过显微镜100倍（图9)和1000倍（图10)观察细胞涂片。从图9和 图10中可以看出，细胞染色效果非�：茫夜鄄毂尘按烤唬奁渌又矢扇�。
[0112] 本发明提供的鼻腔分泌物的处理液及其处理方法，不仅继承了传统检查方法的所 有优点，更解决传统分泌物涂片技术存在细胞丢失、不能全部被染色、分泌物中粘性液体、 杂质存在和细胞不能均匀分散、重叠等对结果正确判断的影响问题。采用本发明提供的鼻 腔分泌物的处理液及其处理方法，使鼻分泌物中的有效目的细胞呈单层、均匀地平铺到载 玻片上，制成细胞成份丰富、背景清晰、形态完整、分布均匀的超薄细胞涂片，并可以直接进 行免疫组化染色，对结果判断的准确性大大提高。
[0113] 以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技 术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修 改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1. 一种鼻腔分泌物的处理液，其特征在于，包括依次使用的清洗液、消化液和保护液； 所述清洗液包括乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸 水和盐酸，所述乙二胺四乙酸与所述重蒸水的质量体积比为0. 2?0. 4g/L，所述甲醇与所 述重蒸水的体积比为1:0. 5?1. 5,所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 0? 1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述 重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 1?0. 3g/ L，所述盐酸将清洗液pH调至7. 2?7. 4 ; 所述消化液包括二硫苏糖醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重蒸水和盐 酸，所述二硫苏糖醇与所述重蒸水的质量体积比为90?110g/L，所述磷酸氢二钠与所述重 蒸水的质量体积比为1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积比为0. 2? 〇. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所述重蒸水的 质量体积比为〇. 1?〇. 3g/L，所述盐酸将消化液pH调至7. 2?7. 4 ; 所述保护液包括吐温、乙二胺四乙酸、甲醇、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、 重蒸水和盐酸，所述吐温与所述重蒸水的体积比为〇. 04?0. 06:1，所述乙二胺四乙酸与所 述重蒸水的质量体积比为〇. 2?0. 4g/L，所述甲醇与所述重蒸水的体积比为1:0. 5?1. 5， 所述磷酸氢二钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸 水的质量体积比为〇. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所 述氯化钾与所述重蒸水的质量体积比为〇. 1?〇. 3g/L，所述盐酸将保护液pH调至7. 2? 7. 4。
2. 根据权利要求1所述的鼻腔分泌物的处理液，其特征在于，所述吐温为吐温20、吐温 21、吐温40、吐温60、吐温61、吐温80、吐温81和吐温85中的任一种或多种混合。
3. 根据权利要求1所述的鼻腔分泌物的处理液，其特征在于，所述鼻腔分泌物的处理 液还包括固定液I，所述固定液I由多聚甲醛、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、重 蒸水和盐酸组成，所述多聚甲醛与所述重蒸水的质量体积比为35?45g/L，所述磷酸氢二 钠与所述重蒸水的质量体积比为1. 〇?1. 5g/L，所述磷酸二氢钾与所述重蒸水的质量体积 比为0. 2?0. 3g/L，所述氯化钠与所述重蒸水的质量体积比为7?9g/L，所述氯化钾与所 述重蒸水的质量体积比为〇. 1?〇. 3g/L，所述盐酸将固定液I的pH调至7. 2?7. 4。
4. 根据权利要求1所述的鼻腔分泌物的处理液，其特征在于，所述鼻腔分泌物的处理 液还包括固定液II，所述固定液II由甲醇和丙酮以体积比为1 :0.5?1.5配制而成。
5. 采用权利要求1或2所述的处理液进行鼻腔分泌物的处理方法，其特征在于，包括以 下步骤： (a) 取鼻腔分泌物，将得到的鼻腔分泌物转移至所述清洗液20?40ml中，加入所述消 化液，加入的所述消化液与所述清洗液的体积比为1?5 :100,振荡器400?600rpm，20? 40分钟振荡混匀； (b) 1500?2500rpm离心5?15分钟，弃去上清，轻轻震散开底部的沉淀，加入20? 40ml所述保护液并混匀，用孔径为30?200 μ m细胞滤网过滤，收集过滤液； (c) 将所述过滤液用孔径为3?8 μ m的细胞滤膜过滤，将细胞滤膜上的细胞转移至载 玻片上，得到细胞涂片； (d) 对所述细胞涂片进行细胞固定，染色处理，然后通过显微镜观察细胞涂片。
6. 根据权利要求5所述的鼻腔分泌物的处理方法，其特征在于，在所述步骤（c)中，所 述过滤液通过细胞涂片机制作细胞涂片。
7. 根据权利要求6所述的鼻腔分泌物的处理方法，其特征在于，所述细胞涂片机制作 细胞涂片具体为： 将所述细胞滤膜进行负压处理，当细胞滤膜上覆盖了 8?15%面积的细胞，负压吸引 停止，所述过滤液中的细胞吸附在所述细胞滤膜表面； 将所述细胞滤膜吸附有细胞的一侧贴附在载玻片上，通过正压鼓气和静电吸附作用， 使吸附在细胞滤膜表面的细胞转移至载玻片上，得到细胞涂片。
8. 根据权利要求5所述的鼻腔分泌物的处理方法，其特征在于，在所述（d)中，所述细 胞固定采用权利要求3中的固定液I或权利要求4中的固定液II进行固定。
9. 根据权利要求5所述的鼻腔分泌物的处理方法，其特征在于，在所述（b)中，所述细 胞滤网的孔径为80?100 μ m。
10. 根据权利要求5所述的鼻腔分泌物的处理方法，其特征在于，在所述（a)中，采用取 样器对鼻腔分泌物进行取样。
【文档编号】G01N1/28GK104215490SQ201410497784
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月25日 优先权日:2014年9月25日
【发明者】张罗, 佘文煜, 杨军 申请人:张罗, 佘文煜
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