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一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备方法，包括：滤纸在第一相浸液中浸润后，在30-50℃热风干燥，得到酶试剂层；滤纸在第二相浸液中浸润后，在30-50℃热风干燥，得到显色剂层；将海绵棒在抗抗坏血酸浸润液中浸润，40-60℃热风烘干，得到抗抗坏血酸海绵棒；依次将显色剂层、酶试剂层切割成的试纸块，压在上盖显色孔下，抗抗坏血酸海绵棒一端上，即得。本发明解决了现有试纸只能冷藏保存，常温状态不稳定；GHB脱氢酶和抗坏血酸有交叉反应，使存在抗坏血酸的样品产生假阳性反应，得出错误结果；很多饮料本身有颜色，会干扰检测结果等问题。
【专利说明】-种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制 备方法

【技术领域】
[0001] 本发明属于检测4-羟基丁酸试纸的制备领域，特别涉及一种抗抗坏血酸和色素 干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备方法。

【背景技术】
[0002] GHB全名Gamma-Hydroxybutyrate (伽马-轻基丁酸及其钠盐）是一种麻醉药品。 60年代初医学上利用GHB作为麻醉剂，后来发现GHB的不良副作用，便停止使用，只利用作 为安眠药之用。90年代不法分子开始使用GHB作为娱乐，犯罪之用。GHB是白色粉状，溶于 水后无色，液体状称为G水。GHB无气味，味微咸。GHB的服后反应跟酒精相似。小剂量会令 人放松、个人防线放开、精神赳振及有类似轻微喝醉的兴奋感觉。中份量会令人头昏眼花、 眼睛不能对准焦点、心情愉悦、能投入音乐、跳舞及谈话。没有时间观念，及不停点头。服用 过量（0D)会令人无意识地不停点头或陷入无意识状态，极度眩晕，没有方向感及呕吐。严 重过量会中毒，中毒者会全无意识、身体抽搐，呕吐及吸呼严重下降。于服用后10-20分钟 会开始有反应，主要药效反应可维持1-3小时，剩余反应约会维持2-4小时甚至更久。如果 GHB混合其他药物或酒精，很容易会导致服用者" 0D "，更甚者更会昏迷及死亡。
[0003] 由于GHB为无色无味的药物，而且会混合水来服用，因此服用者根本没有可能知 道自己所服用的份量为多少，亦因为这个原因所以很容易会发生服用过量的意外。就算是 轻度的服用过量亦会令服用者失去意识甚至进入昏迷，或死亡。GHB确是一种非常危险的毒 品。就2000年1月美国所发表的报告，单在1月份美国已有60个服用GHB后死亡的个案， 由此可以知道它的危险性。不论在生理或心理上GHB都会令使用者上瘾的。
[0004] 由于其上述特性，不法分子用它来作为迷幻药，迷奸青年女性，抢劫财物，被害人 清醒后难以回忆起之前发生的一切。社会危害很大。《Reliable, Sensitive, Rapid and Quantitative Enzyme-Based Assay for Gamma-Hydroxybutyric Acid (GHB)》（Dawn T. Bravo等著）中介绍了 GHB脱氢酶的制备及检测ghb的试纸的制备，但是，该方法存在一 些严重的问题：试纸只能冷藏保存，常温状态不稳定；GHB脱氢酶和抗坏血酸有交叉反应， 使存在抗坏血酸的样品产生假阳性反应，得出错误结果；很多饮料本身有颜色，会干扰检测 结果。而本发明涉及一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸的检测装置制备方法，解决 了这些问题。本发明的出现解决了上述问题，使检测结果更准确可靠。


【发明内容】

[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检 测试纸的制备方法，该方法可以抗检测液中的色素，维生素 C等的影响，能够常温保存，专 一性和灵敏度好。可以用于预防约会强奸，迷奸，及警方侦破案件时现场筛查鉴定。
[0006] 本发明的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备方法，包括：
[0007] (1)滤纸在第一相浸液中浸润后，在30-50°C热风干燥，得到酶试剂层；
[0008] (2)滤纸在第二相浸液中浸润后，在30-50°C热风干燥，得到显色剂层；
[0009] (3)将海绵棒在抗抗坏血酸浸润液中浸润，40_60°C热风烘干，得到抗抗坏血酸海 绵棒；
[0010] (4)依次将显色剂层、酶试剂层切割成的试纸块，压在上盖显色孔下，抗抗坏血酸 海绵棒一端上，得到抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸，其中显色剂层在上， 酶试剂层在下。
[0011] 所述步骤（1)中滤纸为滤纸whatman23sl。
[0012] 所述步骤⑴中第一相浸液配制过程具体为：每配制总体积为l〇〇ml的浸液，在 pH = 8. 8-10. 8,浓度为40mm〇l/L-80mm〇l/L Tris-盐酸缓冲液中，分别溶入稳定剂和保护 剂 0. l-10g，NAD+ 辅酶 10. 1-2. 0g，黄递酶 200-20000iu，4-羟基丁酸脱氢酶 2000-100000iu。
[0013] 所述稳定剂和保护剂为天然或人工聚合高分子胶体。
[0014] 所述聚合高分子胶体为肝素、右旋糖酐，海藻糖、PEG10000、牛血清蛋白中的一种 或几种。所述步骤（2)中滤纸为whatman593。
[0015] 所述步骤（2)中第二相浸液为：每100ml溶剂中溶入0. 1-0. 5g氯化硝基四氮唑 蓝。
[0016] 所述溶剂为甲醇或乙醇。
[0017] 所述步骤（3)中抗抗坏血酸浸润液为：每配制100ml的浸润液，在pH = 8. 8-10. 8， 浓度为40mmol/L-80mmol/L Tris-盐酸缓冲液中溶入抗坏血酸氧化酶20-50mg，2, 6-二氯 酚靛酚钠50-200mg。
[0018] 所述步骤⑷中试纸块为0. 3X0. 3-0. 8X0. 8cm。
[0019] 本发明中将待测样品加在海绵棒另一端的加样孔处，使样品在向显色孔扩散过程 中去除夹杂其中的色素和抗坏血酸，消除二者的干扰，使结果更可靠。
[0020] 本发明的原理：
[0021] 反应原理：
[0022]

【权利要求】
1. 一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备方法，包括： (1) 滤纸在第一相浸液中浸润后，在30-50°C热风干燥，得到酶试剂层； (2) 滤纸在第二相浸液中浸润后，在30-50°C热风干燥，得到显色剂层； (3) 将海绵棒在抗抗坏血酸浸润液中浸润，40-60°C热风烘干，得到抗抗坏血酸海绵 棒； (4) 依次将显色剂层、酶试剂层切割成的试纸块，压在上盖显色孔下，抗抗坏血酸海绵 棒一端上，得到抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸。
2. 根据权利要求1所述的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制 备方法，其特征在于：所述步骤（1)中第一相浸液配制过程具体为：每配制总体积为l〇〇ml 的浸液，在pH = 8. 8-10. 8,浓度为40mmol/L-80mmol/L的Tris-盐酸缓冲液中，分别溶入 稳定剂和保护剂〇. l-l〇g，NAD+辅酶10. 1-2. 0g，黄递酶200-20000iu，4-羟基丁酸脱氢酶 2000-100000iu〇
3. 根据权利要求2所述的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备 方法，其特征在于：所述稳定剂和保护剂为聚合高分子胶体。
4. 根据权利要求3所述的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备 方法，其特征在于：所述聚合高分子胶体为肝素、右旋糖酐，海藻糖、PEG10000、牛血清蛋白 中的一种或几种。
5. 根据权利要求1所述的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备 方法，其特征在于：所述步骤（2)中第二相浸液为：每100ml溶剂中溶入0. 1-0. 5g氯化硝基 四氮唑蓝。
6. 根据权利要求5所述的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备 方法，其特征在于：所述溶剂为甲醇或乙醇。
7. 根据权利要求1所述的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备 方法，其特征在于：所述步骤（3)中抗抗坏血酸浸润液为：每配制100ml的浸润液，在pH = 8. 8-10. 8,浓度为40mmol/L-80mmol/L Tris-盐酸缓冲液中溶入抗坏血酸氧化酶20_50mg， 2, 6-二氯酚靛酚钠50-200mg。
8. 根据权利要求1所述的一种抗抗坏血酸和色素干扰的4-羟基丁酸检测试纸的制备 方法，其特征在于：所述步骤（4)中试纸块为0. 3X0. 3-0. 8X0. 8cm。
【文档编号】G01N21/78GK104111253SQ201410279116
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2014年6月20日 优先权日:2014年6月20日
【发明者】王福进, 管利丰, 张懿 申请人:武汉高丰生物科技有限公司, 上海高丰医疗电器有限公司