专利名称：Uplc-tqd联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种属于药物领域，尤其涉及一种同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的检测方法。
背景技术：
万古霉素是由一种链霉菌产生的、结构复杂的糖肽类抗生素，其分子式为 C66H74C1N9O24。主要用于葡萄球菌(包括耐青霉素和耐新青霉素株)、难辨梭状芽胞杆菌等所致的系统感染和肠道感染，如心内膜炎、败血症、伪膜性肠炎等。万古霉素可抑制细菌细胞壁的合成，对金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、肺炎链球菌等作用强，对难辨校状芽孢杆菌、炭疽杆菌、白喉杆菌等作用也良好。与其他抗生素无交叉耐药性，极少耐药菌株。妥布霉素是一种氨基糖苷类抗生素，分子式C18H37N509。妥布霉素能够联结在30S 和50S的联结位置，阻碍70S复合物的形成，使mRNA不能翻译成蛋白质，导致细胞死亡。主要对革兰阴性菌，如绿脓杆菌、大肠杆菌、克雷白杆菌、肠杆菌属、变形杆菌、枸橼酸杆菌有效。临床主要用于敏感细菌引起的严重感染，如革兰阴性菌特别是绿脓杆菌、大肠杆菌及肺炎杆菌等引起的烧伤感染、败血症、呼吸系统感染、泌尿系统感染、胆囊胆道感染及软组织严重感染等。万古霉素可能发生以下不良反应，大多由于过量或快速滴注引起，并明显与产品纯度不够有关。1.过敏反应与“红颈综合征”本品过敏反应发生率约为5%，主要表现为皮疹、发热、寒战及过敏样反应。静脉滴注过量或速度过快时可能发生“红颈综合征”，表现为红斑，面颈部甚至胸部潮红，药物热，低血压，甚至发生休克样反应。原因可能与组织胺大量释放有关。2.肾损害过量用药或肾功能不全时可能发生严重肾损害，表现为血尿、尿量过多或减少，甚至发生尿毒症。3.耳毒性耳鸣，听力减退，甚至听力丧失引起不可逆耳聋。耳毒性可在早期产品纯度存在问题时报道较多，现已少见。耳毒性可因合用其它有耳、 肾毒性药物而加重。4.其它不良反应如静脉炎；肌内注射时局部疼痛，组织坏死；口服给药治疗伪膜性肠炎时可发生食欲减退，恶心呕吐等消化道反应。妥布霉素常见的不良反应为眼局部的毒副作用与过敏反应，如眼睑发痒与红肿、 结膜红斑，发生率低于3% ；局部应用其他氨基糖甙类抗生素也会出现这些不良反应。尚无应用妥布霉素出现其他不良反应的临床报道。但是如果将眼用妥布霉素眼膏与氨基糖甙类抗生素全身联合用药，就应注意监测血清中总的药物浓度。创伤性骨髓炎通常由开放性骨折的术后感染，其次为闭合骨折切开复位或其他骨关节术后出现感染所致。因其病情复杂、病程漫长，并发、后遗症多，临床治疗极为棘手，对病人的生活质量产生严重后果。目前显微外科皮瓣植入合并抗生素应用是骨髓炎治疗的主要手段，皮瓣植入与常规手术比具有创伤小、愈合快，并发后遗症减少等优点，载药载体一次性给药大大地降低了抗生素用量，在创伤性骨髓炎的治疗中有很好的推广应用价值。
目前万古霉素含量测定的主要方法有分光光度法，高效液相法，固相萃取高效液相法，高效液相-质谱联用法，超高液相质谱联用技术等。妥布霉素的含量测定方法主要有浊度法，光度法，酸性染料比色法，高效液相蒸发光散射法(HPLC-ELSD)，高效液相柱前衍生化法，柱后衍生化高效液相色谱法，离子交换-脉冲积分安倍法，电喷雾离子阱质谱法，高效液相质谱联用法等。因此，对联合应用万古霉素及妥布霉素的骨髓炎患者联合应用万古霉素及妥布霉素的�。⑼辈舛ㄒ髯橹貉局械耐蚬琶顾丶巴撞济顾睾康姆椒ǎ芄晃┪锱ǘ燃觳馓峁┓椒ǎ锏教岣咭┪锸褂眯剩档投靖狈从Φ哪康�。同时测定组织引流液中万古霉素和妥布霉素含量的方法未见文献报道及专利公开。
发明内容
本发明的目的是建立一种同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的检测方法，为临床药物浓度监测提供方案。为了实现上述目的，本发明建立了一种应用超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术(UPLC-TQD)，同时测定引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，该方法包括以下的步骤
1)对照品的配制
精密称取万古霉素、妥布霉素对照品，分别置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的对照品溶液，备用；
2)内标溶液的配制
精密称取阿替洛尔对照品，置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的内标溶液，备用；
3)样品溶液制备
精密量取骨髓炎患者术后引流组织液，置于具塞离心试管中，定量加入步骤2)的阿替洛尔内标溶液，涡旋混勻，精密加入乙腈沉淀蛋白，充分涡旋，高速离心后，分离上清液；上清液中加入适量二氯甲烷，充分涡旋，进行液液萃�。咚倮胄模课∩锨逡海拥攘看克∈停吹醚啡芤海赣茫�
4)流动相溶液的配制
精密量取色谱纯乙腈，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0. 1%的甲酸乙腈溶液，作为流动相A相，备用；精密量取纯水，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0. 1%的甲酸水溶液，作为流动相B相，备用；
5)色谱条件的设置
选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为2. 1 X IOOmm，填料内径为1. 7 μ m的色谱柱；柱温为45°C，流动相流速为0. 3ml/min ；取步骤1)的对照品溶液与步骤2)的内标溶液，定量进样，进行梯度洗脱；采用二极管整列检测器进行色谱峰检测；
6)质谱条件的优化
选择三重四级杆质谱仪，正离子模式下，采用MRM扫描模式，万古霉素m/z :725-144 ；妥布霉素 m/z =468-324 ；阿替洛尔 m/z :267-74 ；
取步骤1)对照品溶液、步骤2)的内标溶液，定量进样，进行质谱分析，并由此得到对照品及内标物的标准质谱7)样品测定
取步骤3)的样品溶液，分别定量进样，在步骤5)与步骤6)的条件下，测定，分别得到万古霉素、妥布霉素对照品、阿替洛尔内标物以及样品的总离子流图，样品图谱中，与万古霉素、妥布霉素对照品以及阿替洛尔内标物相同保留时间处，为引流液样品中的待测万古霉素与妥布霉素，以及定量加入的阿替洛尔内标物；
8)梯度浓度对照品溶液的配制
精密吸取步骤1)的对照品溶液，置于容量瓶中，加纯水，稀释成梯度浓度的万古霉素对照品溶液以及妥布霉素对照品溶液，备用；
9)标准曲线制备
取骨髓炎患者空白组织液多份，分别定量加入步骤8)的梯度浓度对照品溶液，按照步骤3)方法操作，得到梯度加标样品溶液，在步骤7)的条件下进行测定；以万古霉素峰面积与内标物峰面积的比值对万古霉素浓度进行线性回归，得到回归方程，为万古霉素的标准曲线y=35. 522x+0. 1351，r=0. 9981 ；以妥布霉素峰面积与内标物峰面积的比值对妥布霉素浓度进行线性回归，得到回归方程，为妥布霉素的标准曲线y=16. 593x-0. 0327， r=0. 9959 ；其中y为被测物峰面积与内标物峰面积的比值，χ为被测物质量浓度； 10)数据分析计算
记录万古霉素，妥布霉素和阿替洛尔的峰面积，计算万古霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值和妥布霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值，分别代入各自的标准曲线，计算出万古霉素和妥布霉素的质量浓度；即为组织引流液中两种药物的局部浓度。作为进一步改进，上述的步骤5)中流动相梯度洗脱程序如下0-1. OOmin， 5%A 相和 95%B 相；1. 00min-4. OOmin, 40%A 相和 60%B 相；4. 00min-4. 50min,99%A 相和 1%B 相；4. 50min-6. 50min,99%A 相和 1%B 相；6. 50min-7. OOmin, 5%A 相和 95%B 相； 7. OOmin-lO. OOmin, 5%A相和95%B相，进行梯度洗脱。作为进一步改进，上述的步骤6)的质谱参数条件如下毛细管电压3KV，提取电压 30V,锥孔电压3V，源温度150°C，去溶剂温度400°C，去溶剂气750L/hr，锥孔气50L/hr，碰撞气流速0. 15mL/min ；妥布霉素二级质谱碰撞能20V，MRM扫描时间0. 4 Imin ；阿替洛尔二级质谱碰撞能22V，MRM扫描时间2. 5 3. 5min ；万古霉素二级质谱碰撞能15V，MRM扫描时间 3. 3 4min。作为进一步改进，上述的步骤8)定量稀释成浓度梯度为10mg/mL、5mg/mL、2. 5mg/ mL、lmg/mL、0. 5mg/mL、0. lmg/mL 的万古霉素对照品溶液和 lmg/mL、0. 5mg/mL、0. 25mg/mL、 0. lmg/mL,0. 05mg/mL、0. 025mg/mL的妥布霉素对照品溶液。作为进一步改进，上述的步骤9)中取0. 4mL骨髓炎患者空白组织液6份，编号 1 6号，1号加入0. lmg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 025mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;2号加入0. 5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 05mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;3号加入lmg/mL的万古霉素对照品溶液和0. Olmg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;4号加入2. 5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 25mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;5号加入5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 5mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50μ L ;6号加入lOmg/mL的万古霉素对照品溶液和lmg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L0本发明由于采用了上述的技术方案及步骤，具有以下的特点
1、方法先进性
超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术是目前国内较先进的分析检测手段，与传统的液相色谱、气相色谱、光谱分析方法比，联用三重四级杆质谱仪，采用MRM扫描模式，大大提高方法灵敏度及准确度。本发明首次采用该技术同时测定骨髓炎患者组织液中万古霉素和妥布霉素的含量，方法先进可行，能够为该联用技术开展多组分化合物的同时定量测定应用提供实验依据；
2、方法快捷高效，低损耗
采用超高效液相色谱技术，所有化合物在^iin内完成分析检测，快捷方便；流动相流速0. 3ml/min，进样量2μ L，大大减少流动相消耗，所需的样品量极少；能够满足大批量样品检测的需要，最终实现临床应用；
3、临床应用前景及作用良好
药物浓度检测作为临床安全、合理用药的重要手段，能够提供体内药物浓度数据。本方法建立的方法能够为万古霉素及妥布霉素的药物浓度监测提供切实可行的方法，临床应用前景良好，能够为临床合理用药，提高药物疗效、减低毒副作用及药物费用，发挥积极的作用。
图1为对照品紫外色谱图与质量色谱图。图2为样品紫外色谱图与质量色谱图。图3为妥布霉素质谱图。图4为万古霉素质谱图。图5为内标物阿替洛尔质谱图。图6为妥布霉素标准曲线图。图7为万古霉素标准曲线图。
具体实施例方式下面对本发明的具体实施方式
做一个详细的说明。超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，该方法包括以下的步骤。
1)对照品的配制
精密称取万古霉素对照品lOOmg、妥布霉素对照品10mg，分别置于IOmL容量瓶中，加入纯水溶解，分别定量配成质量浓度为lOmg/mL的万古霉素对照品溶液和lmg/mL的妥布霉素对照品溶液，备用。2)内标溶液的配制
精密称取阿替洛尔对照品5. Omg，置于IOmL容量瓶中，加入纯水溶解，精密吸取上述溶液0. anl，置于IOmL容量瓶中，加入纯水溶解，配成质量浓度为0. Olmg/mL的阿替洛尔内标溶液，备用。
3)样品溶液制备
精密量取骨髓炎患者术后引流组织液0. 5mL，置于具塞离心试管中，定量加入步骤2) 的阿替洛尔内标溶液25 μ L，涡旋混勻，精密加入乙腈0. 5mL沉淀蛋白，充分涡旋，14000r/ min高速离心Smin后，分离上清液；上清液中加入0. 5mL 二氯甲烷，充分涡旋，进行液液萃�。�14000r/min高速离心8min，吸取上清液200 μ L，加等量纯水稀释，即得样品溶液，备用。4)流动相溶液的配制
精密量取色谱纯乙腈，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0. 1%的甲酸乙腈溶液，作为流动相A相，备用；精密量取纯水，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0. 1%的甲酸水溶液，作为流动相B相，备用。5)色谱条件的设置
选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为2. IXlOOmm，填料内径为 1. 7 μ m的色谱柱；柱温为4 5 °C，流动相流速为0. 3mL/m i η ；取步骤1)的对照品溶液与步骤2)的内标溶液，进样2 μ L，优化的流动相梯度洗脱程序0-1.00min，5%A相和 95%B 相；1.00min-4.00min，40%A 相和 60%B 相；4. OOmin-4. 50min，99%A 相和 1%B 相；4. 50min-6. 50min,99%A 相和 1%B 相；6. 50min-7. 00min,5%A 相和 95%B 相； 7. OOmin-lO. OOmin, 5%A相和95%B相，进行梯度洗脱；采用二极管整列检测器进行色谱峰检测。6)质谱条件的优化
选择三重四级杆质谱仪(Waters TQD)，正离子模式下，采用MRM扫描模式，万古霉素m/ ζ 725 144 ；妥布霉素m/z :468 324 ；阿替洛尔m/z :267 74。取步骤1)对照品溶液、步骤2)的内标溶液，分别进样2 μ L，在优化的质谱参数条件下(毛细管电压3KV，提取电压30V，锥孔电压3V，源温度150°C，去溶剂温度400°C，去溶剂气750L/hr，锥孔气50L/hr，碰撞气流速0. 15mL/min。妥布霉素二级质谱碰撞能20V，MRM 扫描时间0. 4 Imin ；阿替洛尔二级质谱碰撞能22V，MRM扫描时间2. 5 3. 5min ；万古霉素二级质谱碰撞能15V，MRM扫描时间3. 3 ％iin。)进行质谱分析，由此得到对照品及内标物的标准质量色谱图。7)样品测定
取步骤3)的样品溶液，分别进样2 μ L，在步骤5)与步骤6)的条件下，测定，分别得到万古霉素、妥布霉素对照品、阿替洛尔内标物以及样品的质量色谱图(mass chromatogram), 样品色谱中，与万古霉素、妥布霉素对照品以及阿替洛尔内标物相同保留时间处，为引流液样品中的待测万古霉素与妥布霉素，以及定量加入的阿替洛尔内标物；且各物质质谱图与标准品质谱图一致。8)梯度浓度对照品溶液的配制
各精密吸取步骤1)的对照品溶液，置于容量瓶中，加纯水，定量稀释成浓度梯度为 10mg/mL、5mg/mL、2. 5mg/mL、lmg/mL、0. 5mg/mL、0. lmg/mL 的万古霉素对照品溶液以及 lmg/ mL、0. 5mg/mL、0. 25mg/mL、0. lmg/mL、0. 05mg/mL、0. 025mg/mL 的妥布霉素对照品溶液，配对备用。9)标准曲线制备
取0. 4mL骨髓炎患者空白组织液6份，编号1 6号，1号加入0. lmg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 025mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;2号加入0. 5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 05mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;3号加入lmg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 01mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;4号加入2. 5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 25mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;5号加入5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 5mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;6号加入10mg/mL的万古霉素对照品溶液和lmg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L。按照步骤3)方法操作，得到梯度加标样品溶液；在步骤7)的条件下进行测定。以万古霉素峰面积与内标物峰面积的比值对万古霉素浓度进行线性回归，得到回归方程，为万古霉素的标准曲线y=35. 522χ+0. 1351 (r=0. 9981)； 以妥布霉素峰面积与内标物峰面积的比值对妥布霉素浓度进行线性回归，得到回归方程， 为妥布霉素的标准曲线y=16. 593x-0. 0327 (r=0. 9959)。其中y为被测物峰面积与内标物峰面积的比值，χ为被测物质量浓度。
10)数据分析计算
记录万古霉素，妥布霉素和阿替洛尔的峰面积，计算万古霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值和妥布霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值，分别代入各自的标准曲线，计算出万古霉素和妥布霉素的质量浓度。即为组织引流液中两种药物的局部浓度。
权利要求
1.超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤1)对照品的配制精密称取万古霉素、妥布霉素对照品，分别置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的对照品溶液，备用；2)内标溶液的配制精密称取阿替洛尔对照品，置于容量瓶中，加入纯水溶解，配成所需质量浓度的内标溶液，备用；3)样品溶液制备精密量取骨髓炎患者术后引流组织液，置于具塞离心试管中，定量加入步骤2)的阿替洛尔内标溶液，涡旋混勻，精密加入乙腈沉淀蛋白，充分涡旋，高速离心后，分离上清液；上清液中加入适量二氯甲烷，充分涡旋，进行液液萃�。咚倮胄模课∩锨逡海拥攘看克∈停吹醚啡芤海赣茫�4)流动相溶液的配制精密量取色谱纯乙腈，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0. 1%的甲酸乙腈溶液，作为流动相A相，备用；精密量取纯水，定量加入色谱纯甲酸，配制成体积浓度为0. 1%的甲酸水溶液，作为流动相B相，备用；5)色谱条件的设置选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，规格为2. 1 X IOOmm，填料内径为1. 7 μ m的色谱柱；柱温为45°C，流动相流速为0. 3ml/min ；取步骤1)的对照品溶液与步骤2)的内标溶液，定量进样，进行梯度洗脱；采用二极管整列检测器进行色谱峰检测；6)质谱条件的优化选择三重四级杆质谱仪，正离子模式下，采用MRM扫描模式，万古霉素m/z :725-144 ；妥布霉素 m/z =468-324 ；阿替洛尔 m/z :267-74 ；取步骤1)对照品溶液、步骤2)的内标溶液，定量进样，进行质谱分析，并由此得到对照品及内标物的标准质谱图；7)样品测定取步骤3)的样品溶液，分别定量进样，在步骤5)与步骤6)的条件下，测定，分别得到万古霉素、妥布霉素对照品、阿替洛尔内标物以及样品的总离子流图，样品图谱中，与万古霉素、妥布霉素对照品以及阿替洛尔内标物相同保留时间处，为引流液样品中的待测万古霉素与妥布霉素，以及定量加入的阿替洛尔内标物；8)梯度浓度对照品溶液的配制精密吸取步骤1)的对照品溶液，置于容量瓶中，加纯水，稀释成梯度浓度的万古霉素对照品溶液以及妥布霉素对照品溶液，备用；9)标准曲线制备取骨髓炎患者空白组织液多份，分别定量加入步骤8)的梯度浓度对照品溶液，按照步骤3)方法操作，得到梯度加标样品溶液，在步骤7)的条件下进行测定；以万古霉素峰面积与内标物峰面积的比值对万古霉素浓度进行线性回归，得到回归方程，为万古霉素的标准曲线y=35. 522x+0. 1351，r=0. 9981 ；以妥布霉素峰面积与内标物峰面积的比值对妥布霉素浓度进行线性回归，得到回归方程，为妥布霉素的标准曲线y=16. 593x-0. 0327， r=0. 9959 ；其中y为被测物峰面积与内标物峰面积的比值，χ为被测物质量浓度； 10)数据分析计算记录万古霉素，妥布霉素和阿替洛尔的峰面积，计算万古霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值和妥布霉素与内标阿替洛尔峰面积的比值，分别代入各自的标准曲线，计算出万古霉素和妥布霉素的质量浓度；即为组织引流液中两种药物的局部浓度。
2.根据权利要求1所述的超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，其特征在于步骤5)中流动相梯度洗脱程序如下 0-1. 00min，5%A 相和 95%Β 相；1. 00min-4. OOmin，40%A 相和 60%B 相；4. 00min-4. 50min,99%A 相和 1%B 相；4. 50min-6. 50min,99%A 相和 1%B 相；6. 50min-7. OOmin, 5%A 相和 95%B 相； 7. OOmin-lO. OOmin, 5%A相和95%B相，进行梯度洗脱。
3.根据权利要求1所述的超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，其特征在于步骤6)的质谱参数条件如下毛细管电压3KV，提取电压30V，锥孔电压3V，源温度150°C，去溶剂温度400°C，去溶剂气750L/hr，锥孔气50L/hr，碰撞气流速0. 15mL/min ；妥布霉素二级质谱碰撞能20V，MRM扫描时间0. 4 Imin ；阿替洛尔二级质谱碰撞能22V，MRM扫描时间2. 5 3. 5min ；万古霉素二级质谱碰撞能15V, MRM扫描时间3. 3 4min。
4.根据权利要求1所述的超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，其特征在于步骤8)定量稀释成浓度梯度为IOmg/ mL、5mg/mL、2. 5mg/mL、lmg/mL、0. 5mg/mL、0. lmg/mL 的万古霉素对照品溶液和 lmg/mL、 0. 5mg/mL、0. 25mg/mL、0. lmg/mL、0. 05mg/mL、0. 025mg/mL 的妥布霉素对照品溶液。
5.根据权利要求1所述的超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，其特征在于步骤9)中取0. 4mL骨髓炎患者空白组织液6份，编号1 6号，1号加入0. lmg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 025mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;2号加入0. 5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 05mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;3号加入lmg/mL的万古霉素对照品溶液和0. Olmg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;4号加入2. 5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 25mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L ;5号加入5mg/mL的万古霉素对照品溶液和0. 5mg/mL的妥布霉素对照品溶液各50μ L ;6号加入lOmg/mL的万古霉素对照品溶液和lmg/mL的妥布霉素对照品溶液各50 μ L0
全文摘要
本发明涉及一种属于药物领域，尤其涉及一种同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的检测方法。超高液相色谱-三重四级杆质谱联用技术同时测定组织引流液中万古霉素与妥布霉素含量的方法，该方法包括以下的步骤1)对照品的配制；2)内标溶液的配制；3)样品溶液制备；4)流动相溶液的配制；5)色谱条件的设置；6)质谱条件的优化；7)样品测定；8)梯度浓度对照品溶液的配制；9)标准曲线制备；10)数据分析计算。本发明具有以下的特点1、方法先进性；2、方法快捷高效，低损耗；3、临床应用前景及作用良好。
文档编号G01N30/02GK102539573SQ20121000385
公开日2012年7月4日 申请日期2012年1月9日 优先权日2012年1月9日
发明者吴人杰, 寿旦, 张春, 沈立锋, 董宇 申请人:浙江省中医药研究院
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