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专利名称：一种动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法
技术领域：
本发明涉及分析化学、食品安全领域，具体地说，是一种动物源性食品中多种碱性 药物残留量的检测方法。
背景技术：
伴随人们对动物源性食品需求量的增加，近20年来，兽药(包括饲料药物添加剂) 在畜牧业中的应用日益广泛，而动物性食品中的兽药残留问题也逐渐成为目前人们普遍关 注的社会焦点。目前非法使用违禁药物、滥用抗菌药和药物添加剂等，已经是造成我国动物 源性食品中兽药残留超标，引起畜禽产品安全问题的主要原因。药物残留可以直接引发对 人体的急慢性中毒、过敏和变态反应，并通过环境和食物链的作用间接对人体导致潜在危 害，有关兽药残留问题引发的进出口贸易纠纷的报道不断发生，对我国经济的发展产生了 很多的负面影响。食品添加剂联合委员会(JECFA)将兽药按照功能分为七类抗生素类、驱肠虫类、 生长促进剂类、抗原虫药类、灭锥虫药类、苯二氮卓类和肾上腺素受体阻断剂。其中涉 及到的兽药种类繁多，化合物结构差异较大，这对开发相关的分析检测方法带来了极大的 难度和挑战。通常通过简化样品前处理流程、采用新型快速、灵敏的仪器设备(如超高效液 相色谱_串联质谱等)来提高方法的效率，同时开发多残留同时检测方法也是一个常用的 解决手段。在现代农药检测领域，多残留同时分析已经成为开发相关检测方法的趋势，对化 合物种类的覆盖也逐渐扩展和完善。对于兽药而言，由于性质差别较大，现有的多残留分析 一般限于化学结构类似的同族药物来开发相应的方法，其所能同时分析的药物种类比较有 限，远不能满足目前兽药种类不断增加的需求。目前，国内还没有能同时分析不同类别兽药 的方法的报道。兽药相当一部分种类的化合物都具有氨基、亚氨基等类似官能基团，能与游离质 子相互作用为复合阳离子形态，我们称为碱性兽药，例如磺胺类、β “兴奋剂、硝基咪唑类、 三苯甲烷类、苯并咪唑类、苯二氮卓类药物，对它们的分析方法均为同类药物的多残留检测 方法，采用方法多为GC-MS、HPLC和HPLC-MS等。GC-MS检测时某些热不稳定化合物会分解， 进样前需要衍生化，步骤比较繁琐。HPLC方法由于检测器的限制，对待分析的各个组分和 干扰杂质的分离要求较高，而且受灵敏度限制对于某些禁用药物的不能满足检检测限量要 求。伴随LC-MS技术的快速发展，为复杂基质样品和多残留定性和定量分析提供了强有力 的手段，但目前国内在方法的开发上多限于同一族类物质，还没有采用HPLC-MS进行跨类 同时检测的报道。

发明内容
本发明的目的在于克服现有方法的不足，建立一种动物源性食品中多种碱性药物 残留量的检测方法，以方便、快捷、准确、高效地同时检测动物源性食品中76种兽药(见表 1，受体激动剂类、磺胺类、苯二氮卓类、硝基咪唑类、苯并咪唑类、三苯甲烷类)的残留量。表1 76种碱性兽药标准品信息
权利要求
一种动物源性食品中多种碱性兽药残留量的检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)样品提取准确称取2 5g均匀试样，于50mL塑料离心管中，加入15 30mL乙腈、1 2mL异丙醇和5 10mL柠檬酸缓冲溶液，在2000r/min下涡旋混合提取5min，4000r/min离心5min，上清液转移至250mL梨形瓶中；沉淀重复上述提取操作，合并提取液，加入3 6mL异丙醇后在40±2℃的温度下旋转浓缩至5mL左右，转移浓缩液至50mL塑料离心管中，并用5mL柠檬酸缓冲液润洗梨形瓶，合并洗液，在4℃下8500r/min冷冻离心10min，滤膜过滤后待用；(2)提取液净化将固相萃取柱装好，依次用3 6mL甲醇、3 6mL水和3 6mL柠檬酸缓冲液活化；转移待净化液至固相萃取柱的顶部，以0.5mL/min流速过柱；用2 3mL柠檬酸缓冲液、2 3mL水、2 3mL水 甲醇溶液淋洗柱，低真空抽干后，依次用3 4mL甲醇和4 6mL氨水甲醇溶液，洗脱柱上的待分析成分，合并收集洗脱液，在氮吹浓缩装置上于40±2℃的温度下蒸干，加入1.0mL含甲酸的水 甲醇溶液振荡溶解残渣后，滤膜过滤待用；(3)液相色谱 质谱测定高效液相色谱条件a)色谱柱C18柱，150mm×4.6mm(i.d.)，粒径3.0μm或相当者；b)流动相A含0.05～0.1％甲酸的乙腈，流动相B含0.05～0.1％甲酸2～10mmol/L乙酸铵水溶液+甲醇(95+5，V/V)；流速0.5～1.0mL/min；梯度洗脱；c)柱温35℃；d)进样量10～30μL；质谱条件a)电喷雾电压(IS)4500V；b)雾化气压力(GS1)448.175kPa(65Psi)；c)气帘气压力(CUR)206.85kPa(30Psi)；d)辅助气压力(GS2)482.65kPa(70Psi)；e)碰撞气压力(CAD)34.475kPa(5Psi)；f)离子源温度(TEM)550℃；g)碰撞室入口电压(EP)为10V、碰撞室出口电压(CXP)为13V，并分别设定母离子(Q1)、子离子(Q3)、碰撞电压(CE)和去簇电压(DP)。
2.根据权利要求1所述的动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法，其特征在 于所述柠檬酸缓冲溶液500mL中含有10. 5g 一水合柠檬酸和10. 2g六水合氯化镁，并用氨 水调节PH为2. 5。
3.根据权利要求1所述的动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法，其特征在 于在步骤(1)中所述滤膜为0. 45 μ m孔径的滤膜。
4.根据权利要求1所述的动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法，其特征在 于在步骤(2)中所述固相萃取柱为亲水性聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱和阳离子交 换固相萃取柱，安装顺序为亲水性聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱在上，阳离子交换固 相萃取柱在下，所述水-甲醇溶液中水甲醇=95 5 (V/V)，所述氨水甲醇溶液的浓度为 5%，所述含甲酸的水-甲醇溶液中水甲醇=95 5 (V/V)，甲酸浓度为0.1%，所述滤膜 为0. 22 μ m孔径的滤膜。
5.根据权利要求1所述的动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法，其特征在 于在步骤(3)中所述梯度洗脱的梯度变化为0 3分钟，流动相A :0 25%，流动相B 100 75% ； 3 4分钟，流动相A 25 40 %，流动相B 75 60 % ； 4 7分钟，流动相A :40 50%，流动相B :60 50% ； 7 9分钟，流动相A 50%,流动相B 50% ； 9 13分钟，流动相A :50 100%，流动相B :50% 0 ； 13 18分钟，流动相A 100%，18 18. 5分钟，流动相A 100 0%，流动相B 0 ~ 100% ； 18. 5分钟后，流动相B 100%。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方 法，其特征在于所述动物源性食品为选自猪肉、猪肝、鸡蛋、虾、牛奶的至少一种。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方 法，其特征在于所述碱性兽药包括β -受体激动剂类、磺胺类、苯二氮卓类、硝基咪唑类、苯 并咪唑类、三苯甲烷类。
8.根据权利要求7所述的动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法，其特征 在于所述β-受体激动剂类包括选自莱克多巴胺(Ractopamine)、沙米特罗(Salmeterol xinafoate)、夕少 T 月安 If (Salbutamol)、特布 # (Terbinafine hydrochloride)、西 马特罗(Cimaterol)、克伦特罗(Clenbuterol)、妥布特罗(Tulobuterol)、喷布特 罗(Penbutolol sulfate)、甲氧醋胺(3-Methoxytyramine hydrochloride)、 得安 (Propanolol)、氯丙那林(Clorprenaline hydrochloride)的至少一种；磺胺类包括选 自磺胺嘧啶(Sulfadiazine)、磺胺噻唑(Sulfathiazole)、磺胺吡啶(Sulfapyridine)、 磺胺甲基嘧啶(Sulfamerazine)、磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine)、磺胺-6-(间) 甲氧嘧啶(Sulfamonomethoxine)、磺胺甲噻二 唑(Sulfamethizole)、磺胺 _5_(对) 甲氧嘧啶(Sulfameter)、磺胺氯哒嗪(Sulfachloropyridazine)、磺胺甲氧哒嗪 (Sulfamethoxypyridazine)、磺胺邻 二甲氧嘧啶(Sulfadoxine)、磺胺间 二甲氧嘧 啶(Sulfadimethoxine)、磺胺甲基异恶唑(Sulfamethoxazole)、磺胺二甲异恶唑 (Sulfafurazole)、苯酰磺胺(Sulfabenzamide)、磺胺喹恶啉(Sulfaquinoxaline)、磺胺 醋酰(Sulphacetamide)、三甲氧苄胺嘧啶(Trimethoprim)、磺胺胍(Sulfaguanidine) 的至少一种；苯二氮卓类包括选自氟西泮(Fluraz印am hydrochloride)、咪哒唑仑 (Dormicummaleate)、阿普唑仓(Alprazolam)、利眠宁(Chlordiaz印oxide)、溴西泮 (Bromazepam)、氯硝西泮(Clonazepam)、地西泮(Diazepam)、劳拉西泮(Lorazepam)、 硝西泮(Nitraz印am)、去烷基氟拉西泮(Desalkylfluraz印am)、2-羟乙基氟拉西 泮(2-Hydroxylethylfluraz印am)、氟拉西泮(Flurazepam)、α _ 羟基阿普唑仑 (α -hydroxyalprazolam)、去甲基氣西洋(N-Desmethylflunitrazepam)、α _ |圣基味 _ 唑仓(a -hydroxymidazo 1 am)、7_ 氨基氟西泮(7-Aminof lunitrazepam)、三唑仓 (Triazolam)、替马西泮(Temazepam)、奥沙西泮(Oxazepam)的至少一种；硝基咪唑类 包括选自轻基甲硝唑(1- (2-hydroxyethyl) -2-hydroxy-methyl-5-nitroimidazol) > 2-甲硝咪唑(2-Methyl-5-nitroimidazole)、羟基二甲硝咪唑(2-Hydroxymethyl-l_methyl-5-nitroimidazole)、甲硝唑(Metronidazole)、二甲硝咪唑(Dimetridazole)、 洛硝哒唑(Ronidazole)、氯甲硝咪唑(5-Chloro-l-methyl-4-nitroimidazole)、 苯硝咪唑(5-nitrobenzimidazole)、羟基异丙硝唑(2-(2-Hydroxyisopropyl)-1 -methyl-5-nitroimidazol)> 异 丙 石肖 P坐(2_isopropyl_l_methyl_5_nitroimidazo 1 Ipronidazole)的至少一种；苯并咪唑类包括选自阿苯达唑(Albendazole)、阿苯达 唑亚砜(Albendazole sulfoxide)、阿苯达唑砜(Albendazole sulfone)、2_ 氨基-阿 苯达唑砜(Albendazole-2-aminosulfone)、氟苯达唑(Flubendazole)、芬苯达唑砜 (Fenbendazole sulfone)、苯硫胍(Febantel pestanal)、奥芬达唑(Oxfendazole) 达唑(Oxibendazole)、甲苯咪唑(Mebendazole)、氨基甲苯咪唑(Amino mebendazole)、 5-羟基-甲苯咪唑(5-hydroxyl-mebendazole)、噻苯哒唑(Thibenzole)、5-羟基-噻 苯哒唑(5-hydroxyl-thibenzole)的至少一种；三苯甲烷类包括选自隐色孔雀石绿 (Leucomalachite Green)、隐色结晶紫(Leucocrystal Violet)的至少一种。
全文摘要
本发明涉及分析化学、食品安全领域，具体为一种动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法。该方法通过乙腈、异丙醇和柠檬酸缓冲溶液涡旋混合提取、亲水性聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱和阳离子交换固相萃取柱净化及液相色谱-质谱测定来检测猪肉、猪肝、鸡蛋、虾、牛奶中多种碱性药物如β-受体激动剂类、磺胺类、苯二氮卓类、硝基咪唑类、苯并咪唑类、三苯甲烷类的残留量。该方法具有简单、快速、准确、高效的优点。
文档编号G01N30/02GK101949898SQ20101024950
公开日2011年1月19日 申请日期2010年8月10日 优先权日2010年8月10日
发明者夏敏勇, 张晓梅, 邓晓军, 郭德华 申请人:上海安谱科学仪器有限公司;上海出入境检验检疫局动植物与食品检验检疫技术中心