专利名称：一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条及试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于生物检测领域，涉及一种医用检测耗材，具体涉及一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条及试剂盒。
背景技术：
呋喃妥因，别名呋喃坦�。秽灌ぃ踹煌滓颍趸秽滓颍現uradantin,Furan, Furantoin, Macrodantin, Urantoin 英文 / 拉丁名称，Nitrofurantion,属于硝基呋喃类抗生素。硝基呋喃类药物是一种广谱性抗生素，具有很好的抗菌作用和药动力的特性，因价格较低且效果好，而被广泛应用，作为猪、禽类和水产促生长的添加剂。但长期研究证明，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，因此此类药物禁止在治疗和饲料中使用。呋喃妥因在1995年被禁用。由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物则能存留较长一段时间，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。呋喃妥因代谢物残留常用的检测方法主要有色/质联用分析法(LC-MS)、高效液相色谱(HPLC)、酶联免疫法等，LC-MS和HPLC具有高灵敏度高特异性的特点，但由于复杂的仪器设备、繁琐的过程和大量的有机溶剂以及对检验人员的高技能要求，不适合现场和家庭使用。酶联免疫分析法虽然灵敏度高，特异性强，对仪器设备要求不高，但检测前、后都需要做必要的仪器清洗及保养工作，检测时间长，并且要求本领域专业技术人员来操作。免疫胶体金技术(Immunogold labelling techique)是上世纪80年代继突光素、放射性同位素和酶三大标记技术后发展起来的固相标记免疫测定技术。该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，形成肉眼可见的红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。快速诊断试纸条是20世纪90年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新型层析材料基础上发展起来的一项新型体外诊断技术，近年来发展迅速，在生物医学领域特别是医学检验中得到了广泛应用。该技术主要是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在硝酸纤维膜上，胶体金标记试剂吸附在结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体区域时，待测物金标试剂复合物与之发生特异性结合而被截留，胶体金标记聚集在检测带上，可通过目测得到直观的显色结果。而游离的标记物则越过检测带，从而达到与检测物自动分离的目的。竞争抑制法可用于测定抗原或抗体，以测定抗原为例，其原理为标本中的受检抗原和固相的包被抗原竞争与标记抗体结合，当标本中的受检抗原的量大于等于试剂的阈值，则标记抗体则不会与固相的包被抗原结合；若标本中无受检抗原，则标记抗体直接与固相的包被抗原结合。目前，将免疫竞争抑制法与胶体金检测技术相结合来对呋喃妥因代谢物进行快速检测，且具有高效、灵敏、特异、便捷、检测范围广等特点的胶体金试纸条鲜有报道。[0009]
实用新型内容为解决上述领域的需求和空白，本实用新型旨在提供一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条及试剂盒，本实用新型试纸条采用竞争抑制法和免疫胶体金技术相结合快速检测食品中的呋喃妥因代谢物，用于动物源性食品的检测；本实用新型试纸条操作简单，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点。一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上；所述反应试剂载体吸附层从沾液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫；在所述样品纤维垫、金标纤维垫和手持端吸水材料垫上覆盖有保护膜层，所述纤·维素药膜垫上从手持端到沾液端依次设有对照线C线、检测线T线，所述对照线C线和检测线T线相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，其特征在于，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗；所述对照线C线包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线包被有呋喃妥因代谢物-牛血清蛋白BSA偶联物。所述胶体金试纸条，其特征在于，在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T线平行的可视的MAX标志线。所述手持端吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述金标纤维垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。所述保护膜层为胶带。所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。一种快速检测呋喃妥因代谢物的试剂盒，其特征在于包括上述任一胶体金试纸条和样品稀释用具。技术效果根据胶体金检测的原理，将本实用新型的胶体金试纸条的粘液端浸入待测液中，或者在粘液端的样品纤维层滴加待测液，待测液通过虹吸带动待检呋喃妥因代谢物及金标纤维垫中的胶体金标记的呋喃妥因代谢物抗体一起向硝酸纤维素膜方向扩散，并最终渗入手柄端吸水纸中，扩散过程中待检呋喃妥因代谢物可与胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗相结合，进而封闭胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗上呋喃妥因代谢物结合点，阻止胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗与纤维素药膜上偶联呋喃妥因代谢物的载体蛋白的检测线T相结合，检测线不能显色，而兔抗小鼠IgG多抗则可与胶体金标记的呋喃妥因代谢物抗体相结合，对照线C显红色，则为阳性，反之，待测液中无呋喃妥因代谢物则不能阻止胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗与纤维素药膜上偶联呋喃妥因代谢物的载体蛋白的检测线T相结合，检测线T显红色，同样，兔抗小鼠IgG多抗也与胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗相结合，对照线C显红色，形成两条红色印记为阴性，如果纤维素药膜上没有显示红色标记，则表明试纸条生效。本实用新型的胶体金试纸条不同于现有的试纸条之处在于所述纤维素药膜垫上从手持端到沾液端依次设有对照线C、检测线T，所述对照线C和检测线T相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，其特征在于，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的呋喃妥因代谢物抗体；所述对照线C包被有兔抗小鼠IgG，所述检测线T包被有呋喃妥因代谢物-牛血清蛋白BSA偶联物。本实用新型试纸条采用竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测食品中的呋喃妥因代谢物，用于动物源性食品的检测。本实用新型试纸条通过选定金标纤维垫、T线、C线和样品纤维垫上的相应的生物包被试剂来实现对呋喃妥因代谢物的快速检测，同时本实用新型试纸条兼顾检测的灵敏度和特异性。本实用新型，优选在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T平行的可视的MAX标志线。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过标志线，以免引起假阳性。本实用新型，优选所述样品纤维垫的材料是玻璃纤维棉，所述吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜的材料是硝酸纤维素膜，所述金标纤维垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本实用新型检测试纸条的检测速度和准确性。本实用新型，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。本实用新型，优选基板支撑层为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。本实用新型，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。本实用新型试纸条采用竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测食品中的呋喃妥因代谢物，用于动物源性食品的检测；本实用新型试纸条操作简单，拿来即用，方便快捷，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，并且保证检测的灵敏性、准确性和高效率。
图I本实用新型试纸条的俯视图；其中I-手持端，2-对照线C线，3-检测线T线，4-MAX标志线,5-沾液端,6_纤维素药膜，7-样品纤维垫，8-手持端吸水材料垫，9-金标纤维垫13-胶带边缘线。图2本实用新型试纸条的纵向剖面图其中6-纤维素药膜，7-样品纤维垫，8-手持端吸水材料垫，9-金标纤维垫，10-手持端胶带，11-箭头胶带，12-基板支撑层。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本实用新型，并不局限于所述最佳实施方式，不对本实用新型的内容和保护范围构成限制，任何人在本实用新型的启示下或是将本实用新型与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本实用新型相同或相近似的产品，均落在本实用新型的保护范围之内。本实用新型旨在提供一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，本实用新型试纸条采用双竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测食品中的呋喃妥因代谢物，用于动物源性食品中呋喃妥因代谢物的检测；本实用新型试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点。根据胶体金检测的原理，将本实用新型的胶体金试纸条的粘液端浸入待测液中，或者在粘液端的样品纤维层滴加待测液，待测液通过虹吸带动待检呋喃妥因代谢物及金标纤维垫中的胶体金标记的呋喃妥因代谢物抗体一起向硝酸纤维素膜方向扩散，并最终渗入手柄端吸水纸中，扩散过程中待检呋喃妥因代谢物可与胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗相结合，进而封闭胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗上呋喃妥因代谢物结合点，阻止胶 体金标记的呋喃妥因代谢物单抗与纤维素药膜上偶联呋喃妥因代谢物的载体蛋白的检测线T相结合，检测线不能显色，而兔抗小鼠IgG多抗则可与胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗相结合，对照线C显红色，则为阳性，反之，待测液中无呋喃妥因代谢物则不能阻止胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗与纤维素药膜上偶联呋喃妥因代谢物的载体蛋白的检测线T相结合，检测线T显红色，同样，兔抗小鼠IgG多抗也与胶体金标记的呋喃妥因代谢物抗体相结合，对照线C显红色，形成两条红色印记为阴性，如果纤维素药膜上没有显示红色标记，则表明试纸条生效。本实用新型试纸条，在高度方向上包括基板支撑层12、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层12上；所述反应试剂载体吸附层从沾液端5到手持端I依次设有样品纤维垫7，金标纤维垫9，纤维素药膜6，手持端吸水材料垫8 ;在所述样品纤维垫7、金标纤维垫9和手持端吸水材料垫8上覆盖有保护膜层。本实用新型的胶体金试纸条不同于现有的试纸条之处在于所述纤维素药膜6上从手持端I到沾液端5依次设有对照线C线2、检测线T线3，所述对照线C线2和检测线T线3相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，其特征在于，所述金标纤维垫9上包被有胶体金标记的呋喃妥因代谢物抗体；所述对照线C-2包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线3包被有呋喃妥因代谢物-牛血清蛋白BSA偶联物。本实用新型，优选在样品纤维垫7上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T线3平行的可视的MAX标志线4。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过标志线4，以免引起假阳性。本实用新型，优选所述样品纤维垫7的材料是玻璃纤维棉，所述手持端吸水材料垫8的材料是粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜6的材料是硝酸纤维素膜，所述金标纤维垫9的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本实用新型检测试纸条在检测速度和准确性。本实用新型，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。本实用新型，优选基板支撑层12为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。[0042]本实用新型，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。实验例I.本实用新型试纸条的制备方法试纸条的制备程序如下步骤I.纤维素药膜的包被I、将兔抗小鼠IgG多抗作为对照线C，呋喃妥因代谢物-牛血清蛋白BSA偶联物作为检测线T，两个试剂分别按照所需的浓度(范围1.5-2mg/ml)，用20mM的PBS进行稀释。2、将配制好的上述试剂，按照C、T线位置分别包被到硝酸纤维素膜上，然后干燥6 小时，温度为30°C，湿度< 35%，从而制得纤维素药膜。步骤2.金标纤维层的标记I、取40nm的胶体金溶液，按终浓度8-12 μ I/ml加入O. 2M K2CO3,加入一定浓度的呋喃妥因代谢物单抗，放置室温反应15-30分钟，然后按照浓度20 μ I/ml加入20%BSA的溶液，用于饱和游离的胶体金。最后lOOOOrpm，离心30分钟，去除上清液中未结合的蛋白质。用等体积的O. 5m硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、O. 1%PVA)复溶沉淀的胶体金标记原液。2、将上述胶体金标记原液按照10-20%浓度，用O. 5m硼酸溶液进行稀释，从而配制成标记后的胶体金工作液。然后再将该工作液铺于30*30cm玻璃纤维垫上,干燥6小时,温度为30°C，湿度彡35%，从而制得金标垫。步骤3.试纸条的组装I、将塑料板平放在操作台上，贴上双面胶带。2、撕掉双面胶带衬纸，在距塑料板上端30mm处贴上已包被有呋喃妥因代谢物-牛血清蛋白BSA偶联物和兔抗小鼠IgG多克隆抗体的硝酸纤维素膜。3、将粗纤维吸水纸压硝酸纤维素膜上端2mm贴上，上端与塑料板上端取齐。4、将小无纺布压硝酸纤维素膜下端O. 5mm处贴上。5、将金标垫取齐压于小无纺布上面。6、将玻璃纤维垫压于金标垫上约一半，下端距塑料板下端2mm处贴上。7、将大无纺布与金标垫上端取齐，下端与塑料板下端取齐贴上。8、将箭头胶带压硝酸纤维素膜I. 5-2mm贴上。9、将手持端胶带压粗纤维吸水纸贴上。本实用新型一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条采用竞争抑制法原理和免疫胶体金技术相结合快速检测食品中的呋喃妥因代谢物。本实用新型试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及，本实用新型以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，用于动物源性食品的检测，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点。
权利要求1.一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，其特征在于，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上； 所述反应试剂载体吸附层从沾液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫； 在所述样品纤维垫、金标纤维垫和手持端吸水材料垫上覆盖有保护膜层，所述纤维素药膜垫上从手持端到沾液端依次设有对照线C线、检测线T线，所述对照线C线和检测线T线相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗；所述对照线C线包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线包被有呋喃妥因代谢物-牛血清蛋白BSA偶联物。
2.根据权利要求I所述快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，其特征在于，在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T线平行的可视的MAX标志线。
3.根据权利要求I所述快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品纤维垫的材料是玻璃纤维棉，所述手持端吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述金标纤维垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。
4.根据权利要求I所述快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，其特征在于，所述保护膜层为胶带。
5.根据权利要求I所述快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，其特征在于，所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。
6.根据权利要求1-5任一所述快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条，其特征在于，还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。
7.一种快速检测呋喃妥因代谢物的试剂盒，其特征在于包括权利要求1-5任一所述胶体金试纸条和样品稀释用具。
8.一种快速检测呋喃妥因代谢物的试剂盒，其特征在于包括权利要求6所述胶体金试纸条和样品稀释用具。
专利摘要本实用新型一种快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金试纸条及试剂盒，属医用检测耗材，其特征在于，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的呋喃妥因代谢物单抗；所述对照线C线包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线包被有呋喃妥因代谢物-牛血清蛋白BSA偶联物，本实用新型试纸条采用竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测食品中的呋喃妥因代谢物，本实用新型试纸条简捷灵敏准确，用于动物源性食品的检测。
文档编号G01N33/558GK202710554SQ201220288728
公开日2013年1月30日 申请日期2012年6月15日 优先权日2012年6月15日
发明者张春山, 张永胜 申请人:北京博欧实德生物技术有限公司
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