专利名称：一种寄生虫虫卵检测方法
技术领域：
本发明涉及到一种寄生虫卵的快速而准确的定性、定量检测技术。
背景技术：
目前，寄生虫虫卵的检测方法主要有3种:涂片法、麦氏法和斯氏法。 涂片法就是用镊子或小棒取少许新鲜粪便，置载玻片上，滴加清洁常水或
50%甘油水数滴，混匀，除去粗渣，加盖玻片后，置显微镜下检査。制片厚度以
通过粪便液膜能模糊识别片下字迹为宜。该法简便易行，适用于检查各种球虫 卵囊等，但检出率较低并不能定量。
麦氏法就是利用了虫卵的漂浮原理，先要用两片载玻片做成虫卵计数器，
即在一较狭的载玻片上刻长宽各lcm的方格，每一方格内再刻平等线数条，两 载玻片间填上1.5mm厚的玻片条，并以粘合剂粘合。计数时取粪便2g置研钵中， 先加入10mL水，搅匀，再加饱和食盐水50mL，混匀后立即吸取粪液充满两个 计数室，静置1 2min，镜检计数两个计数室的虫卵数。计数室容积为 lxlx0.15=0.15mL， 0.15rnL内含粪2^60x0.15=0.005g，两个计数室则为O.OlOg。 故数得的虫卵数乘以100即为每克粪便中虫卵数(EPG值)。该方法只能定性、 定量检测较小虫卵的寄生虫�。苁椅�、漂浮时间等因素的影响，并且不能 用于片形吸虫、前后盘吸虫、蛭形巨吻棘头虫等虫卵的定量计数。
斯氏法用于片形吸虫虫卵的计数。在56mL和60mL处有刻度的小三角瓶或 大试管内，先加入0.4%的氢氧化钠溶液至56mL刻度处，再加入被检粪便约4g，使液面上升到60mL刻度处，再放入一些玻璃珠，塞紧容器口，用力振荡，使粪 完全散开，然后立即吸取0.15mL的粪液，滴于2 3张载玻片上，加盖玻片， 在显微镜下顺序统计各种或某种虫卵数。因0.15mL粪液中实际含原粪量为 0.15x4/60=0.01g，因此，检出的虫卵数乘以IOO，即为每克粪便的虫卵数(EPG 值)。该方法易产生重复或遗漏计数虫卵，结果误差很大，不能用于大规模的临 床检测。
以上的几种方法都不能对�：倚蠼】档囊恍┏＜纳娌�(如片形吸虫 病、棘头虫病、前后盘吸虫病等)的病情程度进行规范化诊断。
发明内容
针对传统方法对寄生虫虫卵检测中，准确性较差和不能检测片形吸虫、棘 头虫的虫卵等问题，本发明的目的是提供一种快速，准确，简便，适用范围广 的寄生虫虫卵定性、定量检测方法。
为了达到以上目的，本发明的技术方案为
1. 将被检动物粪便定量(中型动物最小称样量2克，大动物5克，检测片 形吸虫虫卵时，最小称样量中型动物粪便为4.7克、大动物粪便27.5克)，用定 量粪便的3 5倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀15-60分钟，或4000g离心5min;弃上清液，再加水沉淀， 重复3次。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液 为5 10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3 5毫升)。5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
EPC -计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
本发明操作简单，快速，结果可靠。检测猪蛔虫虫卵，本方法比麦氏法的
查出率高3045%。适用于对人畜通过粪便排出卵的绝大多数寄生虫虫卵检测， 特别是对迄今为止难于检测的片形吸虫、棘头虫、前后盘吸虫的虫卵能定性、 定量检测，适用范围更广。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明进行进一步的说明。 实施例l
片形吸虫虫卵检测
1. 定量称取被检中型动物粪便4.7克或大型动物粪便27.5克以上，用定量 粪便的3倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中型动物粪便沉淀液为 5毫升，每克被检大型动物粪便沉淀液为3毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
56. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Ep(:— 计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
实施例2
前后盘吸虫虫卵检测 ，
1. 定量称取被检家畜粪便2克以上，用定量粪便的3倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中型动物粪便沉淀液为 3毫升，每克被检大型动物粪便沉淀液为3毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Epc_ 计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
实施例3
猪蛭形巨吻棘头虫虫卵检测
1. 定量称取被检家畜粪便2克以上，用定量粪便的3倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀15分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复全次。4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量，即每克被检猪粪便沉淀液为5 毫升。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Epe — 计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
实施例4
线虫虫卵检测
1. 定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为 10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
EPC —计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
炎便重量X0.2
实施例5线虫虫卵检测
1. 定量称取将被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀60分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为 IO毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
itc:一 计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
实施例6
绦虫虫卵检测
1. 定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为 10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。7.按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。 Ep(:_ 计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
实施例7
吸虫虫卵检测
1. 定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液沉淀30分钟；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为 5毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为5毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
Ep<:—计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
实施例8
蠕虫虫卵检测
1. 定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液4000g离心5分钟。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
EPC;_ 计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2
实施例9
球虫卵囊检测
1. 定量称取被检动物粪便2克以上，用定量粪便的5倍体积水调成羹。
2. 用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。
3. 将滤液4000g离心5分钟。
4. 弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检中小动物粪便沉淀液为 10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3毫升)。
5. 充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅 速将部分沉淀液移至"计数器"的两计数室内。
6. 在显微镜下观察计数器两计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。
7. 按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
EP(:— 计数器两小方格内的虫卵数x粪便沉淀液体积_
粪便重量X0.2 -
10
权利要求
1. 一种寄生虫虫卵检测方法，其特征在于检测方法按以下步骤进行，并按以下公式计算(1)将被检动物粪便定量，用定量粪便的3～5倍体积水调成羹。(2)用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤。(3)将滤液沉淀15-60分钟，或离心；弃上清液，再加水沉淀，重复三次。(4)弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量(每克被检小动物粪便沉淀液为5～10毫升，每克被检大动物粪便沉淀液为3～5毫升)。(5)充分摇匀沉淀液后(肉眼见到粪渣在粪便沉淀液中均匀即可)，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内。(6)在显微镜下观察计数器两个计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数。(7)按以下公式计算EPG值(每克粪便中的虫卵数量)。
2.根据权利要求1所述寄生虫卵为片形吸虫虫卵，或前后盘吸虫虫卵，或猪蛭形巨吻棘头虫虫卵，或线虫虫卵，或吸虫虫卵，或绦虫虫卵，或蠕虫虫卵， 或球虫卵囊。
全文摘要
一种寄生虫虫卵检测方法，按以下步骤进行，并按以下公式计算首先将被检动物粪便定量，用定量粪便的3～5倍体积水调成羹；用铜筛网过滤，并用适量水边冲洗边过滤；将滤液沉淀15-60分钟，或离心，弃上清液，再加水沉淀，重复三次；弃适量上清液，用量筒对该沉淀液定量；充分摇匀沉淀液后，用滴管迅速将部分沉淀液移至“计数器”的两计数室内；最后在显微镜下观察计数器两个计数室方框内的寄生虫虫卵，并计数按以下公式计算EPG值。EPG＝(计数器两小方格内的虫卵数×粪便沉淀液体积)/(粪便重量×0.2)。本发明操作简单，快速，结果可靠。适用于对人畜通过粪便排出卵的绝大多数寄生虫虫卵检测，特别是对迄今为止难于检测的片形吸虫、棘头虫、前后盘吸虫的虫卵能定性、定量检测，适用范围更广。
文档编号G01N1/28GK101424613SQ20081004454
公开日2009年5月6日 申请日期2008年4月8日 优先权日2008年4月8日
发明者叶健强, 廖党金, 豪 文, 冶 曹, 红 李, 李江凌, 晶 谢, 赵素君 申请人:廖党金;李江凌;曹 冶;李 红;谢 晶;叶健强;赵素君;文 豪
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