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一种人工模拟的猪胃和小肠消化液及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种人工模拟的猪胃和小肠消化液及其制备方法与应用。该制备方法包括如下步骤：将猪配合饲料和人工胃液按1g：3～3.5mL的配比混合，调pH至1.5～2.0，39±1℃振荡1～2h，冷却至4±1℃，8000～9000g 4±1℃离心5～10min，取上清液为人工模拟猪胃消化液；向离心所得沉淀中加入所述沉淀3倍体积的人工小肠液，调pH为6.8±0.2，39±1℃振荡1～2h，冷却至4±1℃，18000～20000g 4℃离心5～10min，取上清液为人工模拟猪小肠消化液。本发明人工模拟猪胃和小肠消化液，不但pH值、温度等条件与猪消化道一致，而且通过对特定饲料的消化引入了饲料中的可溶性成分，与实际生产中猪消化液成分比较一致。本发明可对霉菌毒素吸附剂应用于猪的吸附率进行科学、客观、准确的体外评价，方法简单、快速。
【专利说明】一种人工模拟的猪胃和小肠消化液及其制备方法与应用

【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一种人工模拟的猪胃和小肠消化液及其制备方法 与应用。

【背景技术】
[0002]霉菌毒素吸附剂是一类具有吸附霉菌毒素能力的饲料添加剂，能够在动物消化道 内与饲料中的霉菌毒素相结合，从而达到减少动物胃肠道对霉菌毒素吸收，增加霉菌毒素 通过粪便排出的目的。其中，对特定霉菌毒素的吸附率是评价霉菌毒素吸附剂质量优劣的 重要指标。
[0003]目前，霉菌毒素吸附剂吸附率的评价主要有体外法和体内法两种。体外法一般以 不同pH值的磷酸缓冲液为介质，测定吸附剂对某种霉菌毒素的吸附能力。这种方法比较简 单快速，但是缓冲液体系与动物消化道环境相差甚远，没有考虑饲料中其他成分影响，导致 评价结果可靠性差，只适用于吸附剂初步评价和吸附潜力筛选。体内法通常采用动物生产 性能或生物标记物等间接指标来评价吸附剂效果，因为很多因素和试验条件都可影响最终 结果，导致即使采用相同的评价方法，也常常产生不同的结果。而且，体内法评价耗时长，费 用高，一般仅用于实用效果的验证，不能得出确切的吸附率。此外，直接采用动物消化液如 胃液和小肠液进行吸附剂评价是一个比较理想的方法。但是，由于动物消化液难以获取，而 且获得的量非常有限，因此实际应用中的可行性很差。


【发明内容】

[0004]本发明的第一个目的是提供一种人工模拟的猪胃和小肠消化液的制备方法。
[0005]本发明所提供的制备人工模拟猪胃消化液的方法，具体可包括如下步骤：将 猪配合饲料和人工胃液按照lg :3?3· 5mL(如lg :3mL)的配比混合，并调节pH值至 1_5?2.0,39±1°C振荡孵育1?2小时（如1小时），冷却至4±rC，6000?9000g(如 9000g)4土1°C (如4? )离心5?10分钟（如10分钟），移取上清液即为人工模拟猪胃消 化液；
[0006]所述人工胃液的溶剂为水，溶质及浓度为：NaCl 2g/L ;胃蛋白酶12160U/L ; HC10.084mol/L〇 ，
[0007]在所述方法中，所述调节pH值具体可为采用盐酸进行pH调节；所述震荡的速度具 体为220rpra ;在所述冷却至4±rC前还可包括静置lmin的步骤。
[0008]在所述方法中，所述猪配合饲料是根据猪的饲养标准（营养需要），将多种饲料 (包括添加剂）按一定比例和规定的加工工艺配制成的均匀一致、营养价值完全的饲料产 品。在本发明的一个实施例中，所述猪配合饲料为生猪育肥猪 （25?6〇kg)阶段配合饲 料。具体的，其原料组成为：玉米67_ 6%、豆柏lg· 6%、鱼粉1 %、小麦麸4%、棉籽柏4%、 食盐0_ 4%、磷酸氢钙L 4%、石粉〇· 75%、赖氨酸〇· 25%、复合预混料1% (各百分含量均 为质量百分含量）。其中，每千克所述复合预混料的组成为：维生素 Α3· 3χ 1〇5ιυ，维生素 D 3_3X104IU,维生素 E 2.4X103IU，维生素 K 3〇75mg，维生素 BJSOmg，维生素 B2525mg，维 生素 Bs225mg，维生素 B123mg，泛酸15〇〇mg，尼克酸2250mg，生物素8mg，叶酸45mg,锰6g，铁 15g，锌 15g，Cu 900mg,碘 21mg,硒 45mg。
[0009]本发明所提供的制备人工模拟猪小肠消化液的方法，具体可包括如下步骤：向权 利要求1所述方法中离心所得的沉淀中加入所述沉淀3?3. 5倍（如3倍）体积的人工小肠 液，并调节pH值为6· 8 ± 0· 2, 39 ± 1 °C振荡孵育1?2小时（如1小时），冷却至4 ± 1? (如 4°C )，6000?9000g(如9000g)4±lt；(如4Γ )离心5?10分钟（如10分钟），移取上 清液即为人工模拟猪小肠消化液；
[0010]所述人工小肠液的溶剂为水，溶质及浓度为：磷酸二氢钾6. 8g/L;胰蛋白酶 6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;猪胆盐3g/L ;采用氢氧化钠调节溶液PH 至 6. 8±0. 2。
[0011]所述猪胆盐含量以胆酸计彡60%，酸值（mg ΚΟΗ/g)彡145. 0。
[0012]在所述方法中，所述震荡的速度具体为220rpm ;在所述冷却至4±1? (如4? ) 前还可包括静置lmin的步骤；用于调节所述人工小肠液ΡΗ的氢氧化钠具体为〇. m氢氧化 钠。
[0013]本发明的第二个目的是提供一种人工模拟猪胃消化液和人工模拟猪小肠消化液。
[0014] 本发明所提供的人工模拟猪胃消化液具体为采用如上所述方法制备得到的人工 模拟猪胃消化液。
[0015] 本发明所提供的人工模拟猪小肠消化液具体为采用如上所述方法制备得到的人 工模拟猪小肠消化液。
[0016]本发明的第三个目的是提供所述人工模拟猪胃消化液和/或所述人工模拟猪小 肠消化液的用途。
[0017]本发明所提供的用途具体为所述人工模拟猪胃消化液和/或所述人工模拟猪小 肠消化液在测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率中的应用。
[0018] 本发明的第四个目的是提供一种测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率的方 法。
[0019] 本发明所提供的测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率的方法，具体可包括如 下步骤：
[0020] (1)分别进行如下实验组和基质校正组：
[0021] 实验组：按照4mg :5mL的比例取待测霉菌毒素吸附剂和人工模拟猪消化液（所述 人工模拟猪胃消化液或所述人工模拟猪小肠消化液），与霉菌毒素溶液混合，于 39±rc震 荡孵育1?2小时（如1小时），孵育后冷却至4±l°c (如4°C );
[0022] 基质校正组：与所述实验组相比，缺少所述待测霉菌毒素吸附剂，其余均与所述实 验组相同；
[0023] (2)将经步骤（1)处理后的所述实验组和所述基质校正组的体系分别进行离心、 取上清液检测所述霉菌毒素的浓度；
[0024]将所述实验组的上清液中所述霉菌毒素的浓度记为Ceq ;将所述基质校正组的上 清液中所述霉菌毒素的浓度记为C。；
[0025] (3)按照如下公式计算所述霉菌毒素吸附剂在所述人工模拟猪消化液环境下对所 述霉菌毒素的吸附率：
[0026] Y =(卜Ceq/C。）X 100°%，式中Y即为所述霉菌毒素吸附剂在所述人工模拟猪消化 液环境下对所述霉菌毒素的吸附率。
[0027]在所述方法的步骤（1)中，所述待测霉菌毒素吸附剂、所述人工模拟猪消化液和 所述霉菌毒素的配比具体可为4mg :5mL :8〇Ong ;所述震荡的速度具体为220rpm。
[0028]在所述方法的步骤⑵中，所述离心具体为18000?20000g(如 18928g)4±rC (如 4。(：）离心 5 ?lOmin(如 5min)。
[0029]在所述方法的步骤（2)中，检测所述上清液中霉菌毒素的浓度是利用液相色 谱-串联质谱仪进行检测的。
[0030]其中，色谱条件为：C18色谱柱；流动相由流动相A和流动相B组成；流动相A为 0. 2mM乙酸铵水溶液，流动相b为0· 1%甲酸-甲醇（含有〇· 1%体积分数甲酸的甲醇溶 液）。洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱具体为：〇?〇· 5min，90% A ;0. 5?1. 5min，70% Α ;1· 5 ?2. 5min，40% Α ;2· 5 ?3· 5min,30% Α ;3· 5 ?4. 0min，20% Α ;4· 0 ?4· 2min，90% A ;4. 2?5· 0min，90% Α(梯度洗脱中各百分含量均为体积百分含量）。另外，柱温40°C、进 样量 5 μ L 流速 0. 40mL/min。
[0031]质谱条件为：电喷雾离子源（ESI),离子源温度为15(TC,脱溶剂温度为45(TC,脱 溶剂气和锥孔气均为N2，脱溶剂气流速为9〇OL/h，锥孔气流速为20L/h。AFBi和DON采用正 离子监测，ZEA采用负离子监测方式，毛细管电压为〇.75kV。采用MRM多反应监测方式检 测，定量监测离子317. 22 > 175· 06 (锥孔电压38V，碰撞能量26eV)，定量监测离子317. 22 > 187· 12 (锥孔电压38V，碰撞能量22eV)。
[0032] 本发明的第五个目的是提供一种用于测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率 的广品。
[0033]本发明所提供的用于测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率的产品，包含所述 人工模拟猪胃消化液和/或所述人工模拟猪小肠消化液。
[0034] 在如上所述的应用、方法或产品中，所述霉菌毒素均具体可为玉米赤霉烯酮；所述 霉菌毒素吸附剂均可为蒙脱石类霉菌毒素吸附剂或酵母细胞壁类霉菌毒素吸附剂。
[0035]本发明的第六个目的是提供人工胃液和人工小肠液。
[0036]本发明所提供的人工胃液，溶剂为水，溶质及浓度为：NaCl 2g/L;胃蛋白酶 12160U/L ；HC1 0.084mol/L〇
[0037]本发明所提供的人工小肠液，溶剂为水，溶质及浓度为：磷酸二氢钾6. 8g/L ;胰蛋 白酶6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;猪胆盐3g/L ;采用氢氧化钠（如 0. 1M氢氧化钠）调节溶液pH至6. 8 ±0. 2。
[0038]所述人工胃液在制备所述人工模拟猪胃消化液中的应用也属于本发明的保护范 围。
[0039] 所述人工小肠液在制备所述人工模拟猪小肠消化液中的应用也属于本发明的保 护范围。
[0040]实验证明，本发明所提供的人工模拟猪胃消化液和人工模拟猪小肠消化液用于评 价霉菌毒素吸附的吸附率，不但pH值、温度等条件与猪消化道一致，而且通过对特定饲料 的消化引入了饲料中的可溶性成分，与实际生产中猪消化液成分比较一致，远远超过磷酸 盐缓冲体系对猪消化道的模拟水平。在霉菌毒素吸附剂评价时，只需向人工模拟猪胃消化 液和小肠液中按相应比例分别添加霉菌毒素吸附剂和目标霉菌毒素，经振荡、孵育、离心 后，测定上清液中霉菌毒素浓度与初始浓度，g卩可计算出霉菌毒素吸附剂对特定霉菌毒素 的吸附率，从而对霉菌毒素吸附剂的效果做出评价。本发明可以对霉菌毒素吸附剂应用于 猪的吸附率进行科学、客观、准确的体外评价，方法简单、快速。 '、

【具体实施方式】
[0041] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0042] 下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0043]胃蛋白酶：国药集团化学试剂有限公司产品，Cas号：9001-75-6。其酶活为3800U/ g°
[0044]胰酶：国药集团化学试剂有限公司公司产品，Cas号：8049-47-6。其酶活为胰蛋白 酶600U/g ;胰淀粉酶7000U/g ;胰脂肪酶4000U/g。
[0045]猪胆盐：国药集团化学试剂有限公司公司产品，Cas号：8008-63-7。含量彡60.0% (以胆酸计）；酸值彡145· 0(K0Hmg/g);灼烧残渣彡20. 0%。
[0046]猪配合饲料：根据国家标准《仔猪、生长肥育猪配合词料》（GB/T 5915-2008)自行 配制，配方为：玉米67. 6%、豆粕19. 6%、鱼粉1 %、小麦麸4%、棉籽柏4%、食盐0· 4%、磷 酸氢钙1· 4%、石粉0. 75%、赖氨酸0· 25%、复合预混料1% (各百分含量均为质量百分含 量）。其中，每千克所述复合预混料的组成为：维生素 A 3. 3X105IU，维生素 D 3.3X104IU， 维生素 Ε 2·4Χ103?υ，维生素 K 3075mg，维生素 BJSOmg，维生素 B2525mg，维生素 B6225mg， 维生素 B123mg,泛酸1500mg，尼克酸2250mg，生物素8mg，叶酸45mg，锰6g，铁15g，锌15g，Cu 900mg，碘 21mg，硒 45mg。
[0047] 实施例1、人工模拟猪胃消化液和人工模拟猪小肠消化液的制备
[0048] 一、人工胃液和人工小肠液的配制
[0049] 1、人工胃液的配制
[0050] 称取氯化钠2§，胃蛋白酶3_28(相当于121601])，量取质量分数为36.5%浓盐酸 (摩尔浓度相当于12mol/L)7mL，加蒸馏水至lOOOmL,混匀，制得所需溶液，4°C保存。
[0051] 2、人工小肠液的配制
[0052] 称取磷酸二氢钾6. 8g，加蒸馏水500mL使溶解，用0· lmol/L氢氧化钠溶液调节pH 至6. 8,称取胰酶10g (相当于胰蛋白酶6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L)， 加蒸馏水使溶解，将两液混合后，另加3g猪胆盐，加蒸馏水稀释至lOOOmL，制得所需溶液， 4°C保存。
[0053] 二、人工模拟猪胃消化液和人工模拟猪小肠消化液的配制
[0054] 1、人工模拟猪胃消化液的配制
[0055] l〇g猪配合饲料中添加30ml步骤一配制的人工胃液，用稀盐酸调节pH值至1.5? 2. 0,置于39 土 1°C恒温振荡器中220rpm孵育lh，静置lmin并迅速冷却至4土 1?，转移上清 液并10000rpm(相当于9000g)4°C离心lOmin，收集上清液（即为人工模拟猪胃消化液）于 1000mL试剂瓶，4 °C保存待用。
[0056] 2、人工模拟猪小肠消化液的配制
[0057]向以上步骤1制备人工模拟猪胃消化液所得的沉淀中加入3〇ml步骤一配制的人 工小肠液，置于39土 1°C恒温振荡器中22〇rpm孵育lh，静置lmin并迅速冷却至4±1?，转 移上清液并10000rpm(相当于9000g)4t：离心lOmin，收集上清液（即为人工模拟猪小肠消 化液）于lOOOmL试剂瓶，4°C保存待用。
[0058]实施例2、人工模拟猪胃和小肠消化液评价霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的体外吸 附率
[0059] 供试霉菌毒素：玉米赤霉烯酮，CAS号：17924-92_4,纯度彡99 %，以色列 FERMENTEK 公司。
[0060]供试霉菌毒素吸附剂：市售8种蒙脱石类霉菌毒素吸附剂（表1和表2中的蒙脱 石1#至蒙脱石8#)和5种酵母细胞壁类霉菌毒素吸附剂（表！和表2中的酵母细胞壁1# 至酵母细胞壁5#)，其中8种蒙脱石类霉菌毒素吸附剂购自浙江三鼎科技有限公司、攀枝花 兴加环保技术有限公司、赤峰和正美化工有限公司、赤峰市物华天宝矿物材料有限公司、浙 江丰虹新材料股份有限公司、寿光中联精细蒙脱石有限公司、内蒙古天源蒙脱石开发有限 公司、内蒙古润隆化工有限责任公司； 5种酵母细胞壁类霉菌毒素吸附剂购自广东江门生 物技术开发中心有限公司、北京优利保生物科技与技术有限责任公司、巴西ICC公司、上海 沪鼎生物科技有限公司、安琪酵母股份有限公司。
[0061] -、人工模拟猪胃消化液评价霉菌毒素吸附剂对玉米赤霉烯酮的体外吸附率
[0062]移取玉米赤霉烯酮的乙腈溶液（2〇yg/mL)40yL于旋盖塑料离心管中，4(TC 氮气吹干，加入5mL实施例1配制的人工模拟猪胃消化液复溶，再向其中准确加入供试 霉菌毒素吸附剂4mg，涡旋混匀lmin，迅速水浴加热至39±rC，然后置于恒温振荡器中 39±l°C，220rpm震荡孵育lh，立即取出冷却静置至4°C。取lmL上清液至1. 5mL离心管中， 13000rpm (相当于18928g) 4°C离心5min，取50 μ L上清液与450 μ L进样液（水-乙腈-甲 酸，95:4. 9:0. 1，V/V/V)涡旋混匀，应用液相色谱-串联质谱仪测定平衡后体系中游离玉米 赤霉烯酮的浓度。
[^63]其中，应用液相色谱-串联质谱仪测定平衡后体系中游离玉米赤霉烯酮的浓度时 采用的是外标法。具体的色谱和质谱条件如下：色谱条件为Acquity UPLC BEH C18色谱 柱（2. lmmX 100mm，1. 7 μ m，美国 Waters 公司）；柱温 40°C，流速 0. 40mL/min，进样量 5 μ L。 流动相Α为0· 2mM乙酸铵水溶液，流动相Β为〇. 1 %甲酸-甲醇（即甲酸和甲醇的体积比 为 0· 1:99. 9)。梯度洗脱：〇 ?〇. 5min，90% A ;0. 5 ?1. 5min，70% Α ;1· 5 ?2. 5min，40% Α ;2· 5 ?3. 5min，30% A ;3. 5 ?4. Omin，20% A ;4. 0 ?4. 2min,90% Α ;4· 2 ?5. Omin,90% A(梯度洗脱中各百分含量均为体积百分含量）。质谱条件为：电喷雾离子源（ESI)，离子源 温度为150°C，脱溶剂温度为45(TC，脱溶剂气和锥孔气均为N 2，脱溶剂气流速为900L/h，锥 孔气流速$ 20L/h。AFBi和DON采用正离子监测，ZEA采用负离子监测方式，毛细管电压为 0· 75kV。采用MRM多反应监测方式检测，定量监测离子317. 22 > 175. 06 (锥孔电压38V，碰 撞能量26eV)，定量监测离子317. 22 > 187. 12(锥孔电压38V，碰撞能量22eV)。
[0064] 每种吸附剂5个平行，并设不添加霉菌毒素吸附剂的基质校正组（其余操作参见 上文）。
[0065] 吸附率（％ )的计算公式为：
[0066] Y = α-Ceq/C。）X 100%，式中Y为吸附率，c。为毒素初始（即基质校正组）浓度， Ceq为平衡后体系中游离毒素的浓度。
[0067]实验同时设置以等量取自饲喂所述猪配合饲料的真正的猪胃消化液替代上述方 法中实施例1配制的人工模拟猪胃消化液的对照试验，以便本发明所提供的人工模拟猪胃 消化液进行验证。
[0068] 结果显示：应用实施例1配制的人工模拟猪胃消化液对市售8种蒙脱石类吸附剂 和5种酵母细胞壁类霉菌毒素吸附剂进行评价，2类产品在人工模拟猪胃消化液中的玉米 赤霉烯酮吸附率分别为13. 67%?29· 97%和18· 56%?38. 96% (表1)。该评价结果与采 用猪实际猪胃消化液测得的吸附率基本一致，没有统计学意义上的显著差异，表明实施例i 配制的人工模拟猪胃消化液适于霉菌毒素吸附剂吸附率的评价。
[0069] 表1霉菌毒素吸附剂在人工模拟和实际猪胃液中对玉米赤霉烯酮的吸附率（n二 5)
[0070]

【权利要求】
1. 一种制备人工模拟猪胃消化液的方法，包括如下步骤：将猪配合饲料和人工胃液按 照lg :3?3. 5mL的配比混合，并调节pH值至1. 5?2. 0,39±1°C振荡孵育1?2小时，冷 却至4± 1 °C，8000-9000g 4± 1 °C离心5?10分钟，移取上清液即为人工模拟猪胃消化液； 所述人工胃液的溶剂为水，溶质及浓度为：NaCl 2g/L ;胃蛋白酶12160U/L ; HC10. 084mol/L。
2. -种制备人工模拟猪小肠消化液的方法，包括如下步骤：向权利要求1所述方法中 离心所得的沉淀中加入所述沉淀3?3. 5倍体积的人工小肠液，并调节pH值为6. 8±0. 2， 39 ± 1 °C振荡孵育1?2小时，冷却至4± 1 °C，8000-9000g 4± 1 °C离心5?10分钟，移取上 清液即为人工模拟猪小肠消化液； 所述人工小肠液的溶剂为水，溶质及浓度为：磷酸二氢钾6. 8g/L ;胰蛋白酶6000U/ L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;猪胆盐3g/L ;采用氢氧化钠调节溶液pH至 6. 8±0. 2。
3. 利用权利要求1所述方法制备得到的人工模拟猪胃消化液。
4. 利用权利要求2所述方法制备得到的人工模拟猪小肠消化液。
5. 权利要求3所述的人工模拟猪胃消化液和/或权利要求4所述的人工模拟猪小肠消 化液在测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率中的应用。
6. -种测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率的方法，包括如下步骤： (1) 分别进行如下实验组和基质校正组： 实验组：按照4mg :5mL的比例取待测霉菌毒素吸附剂和人工模拟猪消化液，与霉菌毒 素溶液混合，于39±1°C震荡孵育1?2小时，孵育后冷却至4±1°C ; 基质校正组：与所述实验组相比，缺少所述待测霉菌毒素吸附剂，其余均与所述实验组 相同； 所述人工模拟猪消化液为权利要求3所述的人工模拟猪胃消化液或权利要求4所述的 人工模拟猪小肠消化液； (2) 将经步骤（1)处理后的所述实验组和所述基质校正组的体系分别进行离心、取上 清液检测所述霉菌毒素的浓度； 将所述实验组的上清液中所述霉菌毒素的浓度记为Ceq ;将所述基质校正组的上清液 中所述霉菌毒素的浓度记为Q; (3) 按照如下公式计算所述霉菌毒素吸附剂对所述霉菌毒素的吸附率： Y = (l-Ceq/Q) X100%，式中Y即为所述霉菌毒素吸附剂对所述霉菌毒素的吸附。
7. -种用于测定霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附率的产品，包含权利要求3所述的 人工模拟猪胃消化液和/或权利要求4所述的人工模拟猪小肠消化液。
8. 根据权利要求5-7中任一所述的应用、方法或产品，其特征在于：所述霉菌毒素为玉 米赤霉烯酮。
9. 人工胃液，其特征在于：所述人工胃液的溶剂为水，溶质及浓度为：NaCl 2g/L;胃蛋 白酶 12160U/L;HC1 0.084mol/L;或 人工小肠液，其特征在于：所述人工小肠液的溶剂为水，溶质及浓度为：磷酸二氢钾 6. 8g/L ;胰蛋白酶6000U/L ;胰淀粉酶70000U/L ;胰脂肪酶40000U/L ;猪胆盐3g/L ;采用氢 氧化钠调节溶液pH至6. 8 ±0. 2。
10.权利要求9所述的人工胃液在制备权利要求3所述的人工模拟猪胃消化液中的应 用；或 权利要求10所述的人工小肠液在制备权利要求4所述的人工模拟猪小肠消化液中的 应用。
【文档编号】G01N30/02GK104297372SQ201410524274
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月8日 优先权日:2014年10月8日
【发明者】王瑞国, 苏晓鸥, 樊霞, 王培龙, 张维, 高忠武, 张瑜 申请人:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所