专利名称：一种检测庆大霉素和/或小诺霉素的方法及其专用量子点荧光免疫试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种检测庆大霉素和/或小诺霉素的方法及其专用量子点荧光免疫 试齐U盒。 目前其中兽药残留问题是影响动物性食品安全的最主要因素之一，由于动物样本 成分复杂，待测物浓度较低，而且大多数取样量很少，这就对分析方法的选择性和灵敏度提 出了更高的要求。量子点(Quantum dot,QD)由于具有独特的光学和电学性质，使其在荧光 免疫分析中得到越来越多的应用，作为荧光探针，QD的光学特性比在免疫荧光分析法中经 常采用的传统发色团如罗丹明6G或其它有机染料分子有明显的优越性QD的激发光谱宽， 且连续分布，而发射光谱呈对称分布且宽度窄，荧光发射波长可通过改变量子点的大小而 加以调节，因而不同大小的半导体量子点能被单一波长的光激发而发出不同颜色的荧光。 量子点可持续发光，其荧光寿命可达染料分子的100倍以上，比常规的酶联免疫吸附检测 方法的抗背景干扰能力强，自动化程度高，提高了分析方法的精密度，在兽医学、医学、食品 分析等方面将会有更广阔的应用前景。庆大霉素(Gentamicin，GEN)是一种氨基糖苷类广 谱抗生素，可作用于多种革兰氏阳性和阴性菌，主要用于呼吸道感染以及乳腺感染等兽医 临床治疗及饲料药物添加剂。在兽医临床上，庆大霉素主要通过注射途径给药，但该药的排 泄较慢，如果使用不当，容易造成在动物性产品中的残留蓄积。不规范用药会引起畜产品， 尤其是泌乳动物的乳汁中有药物残留，对人类的健康构成潜在危害，造成耳毒性和肾脏毒 性。国内外相继规定了其在动物性食品中的最高残留限量，我国农业部规定庆大霉素在牛 奶中的最高残留限量为200 μ g/L。动物组织中庆大霉素残留的检测方法主要采用液相色谱 法、液相色谱_联质谱法、酶联免疫法等。本发明的一个目的是提供一种检测庆大霉素和/或小诺霉素的方法及其专用量 子点荧光免疫试剂盒。本发明提供的检测庆大霉素和/或小诺霉素的量子点荧光免疫试剂盒，包括庆大 霉素特异性抗体、包被原和标准品溶液；所述包被原为庆大霉素半抗原与载体蛋白的偶联 物；其结构式如式I所示
背景技术：
发明内容
所述试剂盒还包括浓缩洗涤液、浓缩复溶液、包被缓冲液、封闭液和量子点标记抗 抗体；所述试剂盒由庆大霉素特异性抗体、包被原、标准品溶液、浓缩洗涤液、浓缩复溶 液、包被缓冲液、封闭液和量子点标记抗抗体组成。所述庆大霉素特异性抗体为庆大霉素单克隆抗体或庆大霉素多克隆抗体，所述庆 大霉素单克隆抗体是由保藏号为CGMCC No. 3778的对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN 分泌的抗体。所述标准品溶液中标准品的浓度为0 μ g/L、l μ g/L、5 μ g/LUO μ g/L、50 μ g/L或 100 μ g/L，所述标准品为庆大霉素；所述浓缩洗涤液是将0. 05g叠氮化钠和IOOmL浓度为0. 02M、pH为7. 4的磷酸盐 缓冲液混合得到溶液；所述浓缩复溶液是将0. Ig牛血清白蛋白和IOOmL浓度为0. 05mol/L、pH为7. 4的 磷酸盐缓冲液混合得到的溶液；所述包被缓冲液是pH值为9. 6的浓度为0. 03mol/L的碳酸盐缓冲液；所述封闭液是将0. Olg叠氮化钠、IOg牛血清白蛋白和IOOmL浓度为0. 03mol/L、 PH值为7. 4磷酸盐溶液混合得到的溶液。所述包被原是按照如下方法制备得到的将每IOOmg庆大霉素半抗原、20mg载体 蛋白和2mL 50mM磷酸缓冲液混勻，得到混合液，记作溶液A ；将150mg乙基二甲氨基碳化二 亚胺(EDC)溶于ImL水中，得到溶液B ；将溶液B逐滴加入溶液A中，25°C搅拌反应2h，将得 到的产物透析，得到所述包被原。所述庆大霉素半抗原的结构式如式II所示 所述庆大霉素半抗原为庆大霉素。所述量子点标记抗抗体为量子点QD650标记羊抗鼠抗抗体；所述载体蛋白为鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白，优选为卵清 蛋白。本发明的另一个目的是提供一种检测庆大霉素和/或小诺霉素的方法。本发明提供的检测庆大霉素和/或小诺霉素的方法，包括以下步骤1)样品前处理
向每IOmL牛奶中加入200 μ 1 50% (体积百分含量)的三氯乙酸水溶液，混勻；以 3000g离心5min ；取上清液，用复溶液稀释5倍后得到样本溶液；所述复溶液为将所述浓缩 复溶液用0. 05mol/L、pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液稀释10倍得到的；2)利用所述的检测庆大霉素的量子点荧光免疫试剂盒检测步骤1)中的样本溶液。由保藏号为CGMCC No. 3778的对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN分泌的庆大 霉素单克隆抗体也属于本发明的保护范围。保藏号为CGMCC No. 3778的对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN也属于本发 明的保护范围。该细胞株已于2010年4月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中心(简称CGMCCJia 北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编 100101)，保藏号为 CGMCC No. 3778。庆大霉素的通用名称为庆大霉素，化学名称为9α-氟基-11 β，17α-二羟 基-6 α -甲基-孕烷-1，4-二烯-3，20-酮。本发明的实验证明，本发明的量子点荧光免疫试剂盒主要采用间接竞争方法定性 或定量检测庆大霉素的残留量，该试剂盒的主要内容物采用了方便使用的工作液形式，工 作液保存性及稳定性好；利用本发明试剂盒检测庆大霉素的残留量的方法，可用于检测牛 奶样品中庆大霉素的残留量，具有样品前处理过程简单、操作简便、费用低廉、特异性高、灵 敏度高、精确度高等特点，能够现场监控且适合大量样本的筛查。因此本发明检测方法及其 专用试剂盒将在动物源性食品中庆大霉素的残留检测中发挥重要作用。
图1为庆大霉素标准曲线图
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中各试剂盒的检测原理如下当在量子点荧光板微孔上预包被庆大霉素半抗原与载体蛋白的偶联物时，加入样 本溶液或标准品溶液后，再加入庆大霉素抗体溶液，样本中残留的庆大霉素或庆大霉素标 准品与量子点荧光板上包被的庆大霉素偶联抗原竞争庆大霉素抗体，加入量子点标记抗抗 体，用荧光酶标仪检测荧光强度，样本荧光强度值与样本中庆大霉素的含量成负相关，与标 准曲线比较即可得出样本中庆大霉素的残留量。实施例1、量子点荧光免疫试剂盒的制备及其检测方法一、量子点荧光免疫试剂盒包括(1)将包被原溶解于包被缓冲液中得到的，其中包被原在包被原溶液中的浓度为 0. 08μ g/mL ；包被原为庆大霉素半抗原与载体蛋白偶联物的偶联物。(2)量子点标记羊抗鼠抗抗体工作液用稀释液稀释量子点标记的羊抗鼠抗抗体 得到的，稀释度为1 500;稀释液为牛血清白蛋白和50mL磷酸盐缓冲液混合得到；所述磷酸盐缓冲液的浓
6度为0. 02M, pH值为7.4。羊抗鼠抗抗体购自北京博奥森，产品目录号为bs_0295G。(3)庆大霉素标准品溶液将标准品溶于稀释液中得到的，其中标准品在庆大霉 素标准品溶液的浓度分别ο μ g/L，1 μ g/L，5 μ g/L，10 μ g/L，50 μ g/L，100 μ g/L，稀释液为 pH7. 4、0. 05M的磷酸盐缓冲液。庆大霉素标准品为庆大霉素，购自中国兽医药品监察所，产品目录号为K0070604。(4)庆大霉素单克隆抗体工作液将单抗溶于稀释液中得到的，单抗与稀释液的配比为1 1000;单克隆抗体由保 藏号为CGMCC No. 3778的对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN产生。稀释液为25g酪蛋白、0. 03g叠氮化钠和IOOOmL磷酸盐缓冲液混合得到。(6)浓缩洗涤液将0. 05g叠氮钠化钠与IOOmL浓度为0. 02M、pH为7. 4的磷酸盐 缓冲液混合得到。(7)浓缩复溶液将0. Ig牛血清白蛋白与IOOmL浓度为0.05mol/L、pH值为7. 4 的磷酸盐缓冲液混合而成。400mL/瓶，1瓶。(8)包被缓冲液pH值为9. 6的浓度为0. 03mol/L的碳酸盐缓冲液。(9)封闭液将0. Olg叠氮化钠、IOg牛血清白蛋白和IOOmL浓度为0. 03mol/L、pH 值为7. 4的磷酸盐溶液混合而成。二、试剂盒的制备1、量子点荧光板的制备(1)庆大霉素半抗原的合成庆大霉素结构中含有氨基，可以与载体蛋白质直接偶联，因此不用进行结构改造， 可以直接作为半抗原。所述庆大霉素半抗原的结构式如式II所示 (2)包被原的制备采用碳二亚胺法将庆大霉素半抗原和卵清蛋白偶联得到包被 原。将IOOmg庆大霉素(GEN)、20mg卵清蛋白OVA和2mL 50mM PBS搅拌混勻得到混合 液，记作溶液A;然后另称取150mg EDC(乙基二甲氨基碳化二亚胺)溶于ImL水中，得到溶 液B ；将溶液B逐滴加入溶液A中，25°C搅拌反应2h ；将反应液置于0. OlM PBS (pH 7.4)中，4°C搅拌透析72h后，离心取上清液得到包被原。所述包被原为庆大霉素半抗原与载体蛋白 的偶联物；其结构式如式I所示(3)量子点荧光板的制备用包被缓冲液将步骤(2)得到的包被原(即庆大霉素半抗原和卵清蛋白偶联物) 稀释成0. 08 μ g/mL,每孔加入100 μ 1，37°C温育2h，倾去包被液，用稀释20倍的洗涤液洗涤 2次，每次30秒，拍干，然后在每孔中加入150 μ 1封闭液，37°C温育lh，倾去孔内液体，干燥 后获得包被有包被原的量子点荧光板，用铝膜真空密封保存。2、庆大霉素单克隆抗体的制备(1)免疫原合成将庆大霉素半抗原和牛血清白蛋白通过碳二亚胺法偶联得到免疫原。具体制备过程如下与包被原的制备方法相同，不同的是将卵清蛋白(OVA)替换 为牛血清白蛋白BSA。(2)动物免疫与细胞融合采用Balb/c小鼠作为免疫动物，以步骤2的(1)获得的免疫原进行免疫，免疫剂 量为IOOyg/只，首免时将免疫原与等量的弗氏完全佐剂混合制成乳化剂，颈背部皮下多 点注射，间隔2-3周取相同剂量免疫原加等量弗氏不完全佐剂混合乳化，加强免疫一次，四 免后腹腔加强免疫一次，3天后取脾细胞。取免疫BALB/c小鼠脾细胞，按5 1比例(数量配比)与SP2/0骨髓瘤细胞融合。 采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化， 直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，将此细胞株命名为GEN。经筛选得到对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN，该细胞株已于2010年4月12 日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCCJia 北京市朝阳 区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCCNo. 3778。(3)细胞冻存和复苏将上述单克隆杂交瘤细胞株GEN CGMCC No. 3778用冻存液 制成5X IO6个/mL的细胞悬液，分装于冻存管，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立 即放入37°C水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。(4)单克隆抗体的制备与纯化增量培养法将上述培养的杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37°C条件下进行培 养，用下述辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20°C保存。所述细胞培养基为向RPMI-1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠得到的细胞 培养基，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20% (体积百分含量)，使碳酸氢钠在细胞 培养基中的终浓度为0.2% (质量百分含量)；所述细胞培养基的PH为7. 4。辛酸-饱和硫酸铵法1) 50 %饱和度盐析取上述细胞培养液5mL，加等量
0. 01mol/L、pH7. 4的PBS (1L溶液中含有磷酸二氢钾0. 27g，12水合磷酸氢二钠2. 86g，氯化 钾0. 2g，氯化钠8. Sg)混勻，然后逐渐滴加等体积的饱和硫酸铵(pH7. 4)溶液(使硫酸铵溶 液的饱和度达到50% )，边加边搅拌，室温放置30min，3000g离心30min，弃上清液留沉淀。 2)33%饱和度盐析在步骤1)得到的沉淀中分别加入5mL 0. Olmol/LPBS(1L溶液中含有磷 酸二氢钾0. 27g，12水合磷酸氢二钠2. 86g，氯化钾0. 2g，氯化钠8. 8g)溶解沉淀，再加饱和 硫酸铵溶液达到33%饱和度，边加边搅拌，室温放置30min，弃上清液留沉淀。重复操作2 次。3)脱盐取0. 01mol/L、pH7. 4的PBS (1L溶液中含有磷酸二氢钾0. 27g，12水合磷酸氢 二钠2. 86g，氯化钾0. 2g，氯化钠8. Sg)溶解步骤2)得到的沉淀，装于透析袋中，悬于盛有 0. 01mol/L、pH7. 4的PBS (1L溶液中含有磷酸二氢钾0. 27g，12水合磷酸氢二钠2. 86g，氯化 钾0. 2g，氯化钠8. Sg)的烧杯中脱盐，放置于4°C，每天换液3-4次，BaCl2检测直至透 析液中无硫酸根离子为止。4)透析完毕，3000g离心5min，取上清液得到纯化的庆大霉素单 克隆抗体，_20°C冰箱保存。3、量子点与羊抗鼠抗体的制备表面氨基(-NH2)修饰的水溶性量子点QD650购自北京中科物源，产品目录号为 W-4007-650 ；羊抗鼠抗体购自北京博奥森，产品目录号为bs-0259G ；(1)活化量子点表面氨基(-NH2)修饰的水溶性QD6502mL经20 μ 1偶联剂 SMCC (琥珀酰亚胺4- [N-甲基马来酸]-1-羧环己烷)活化，形成活性表面，得到活化的量子 点。凝胶柱去除过量的SMCC。(2)还原羊抗鼠抗体羊抗鼠抗体2mL中加入还原剂DTT 25 μ 1 (dithiothreitol， 二硫苏糖醇)，断开二硫键形成的巯基。凝胶柱去除DTT。(3)将活化的量子点和还原的羊抗鼠抗体混合，37°C反应1小时，10 μ 1 beta-巯 基乙醇终止反应，形成量子点标记的羊抗鼠抗体。三、用步骤一所述试剂盒检测样品中残留的庆大霉素的方法方法如下1、样品前处理样品为牛奶样本。向IOmL牛奶中加入200 μ 1 50% (体积百分含量)的三氯乙酸水溶液，混勻；以 3000g离心5min ；取200 μ 1上清液，用复溶液稀释5倍后得到样本溶液，进行试验分析；所 述复溶液为将所述浓缩复溶液用0. 05mol/L、pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液稀释10倍得到 的。2、检测向步骤一获得包被有包被原(庆大霉素半抗原与卵清蛋白偶联物)的量子点荧光 板微孔中加入庆大霉素标准品溶液或样本溶液50 μ 1，再加入庆大霉素单克隆抗体工作液 50 μ 1，用盖板膜封板，37°C恒温箱中反应30min ；倒出孔中液体，每孔加入250 μ 1洗涤液， 30秒后倒出孔中液体，如此重复操作共洗板5次，用吸水纸拍干；每孔加入量子点标记的羊 抗鼠抗抗体工作液100mL，37°C恒温箱中反应30min，倒出孔中液体，重复洗涤步骤；用荧光 酶标仪，测定每孔荧光强度值。3、结果分析用所获得的每个浓度的标准品溶液的荧光强度平均值(B)除以第一个标准溶液(0标准)的荧光强度值(BO)再乘以100%，即百分荧光值。计算公式为百分荧光值(%) = (B/BO) X 100%以庆大霉素标准品溶液的浓度(μ g/L)的半对数值为X轴，百分荧光值为Y轴，绘 制标准曲线图(图1)。用同样的办法计算样品溶液的百分荧光值，相对应每一个样品的浓 度则可从标准曲线上读出样本中庆大霉素的残留量。本发明中检测结果的分析也可以采用 回归方程法，计算出样品溶液浓度。本发明中检测结果的分析还可以利用计算机专业软件， 此法更便于大量样品的快速分析，整个检测过程只需1. 5小时可以完成。按照上述方法获得三批试剂盒(01批、02批、03批)。实施例2、试剂盒灵敏度、准确度和保存期试验一、试剂盒灵敏度实验对零标准溶液(即稀释液为pH7. 4、0. 05M的磷酸盐缓冲液)进行20次检测，测定 结果的平均值加上3倍标准差作为试剂盒的最低检测限。表1零标准测定结果统计表μ g/L 由表1可知，试剂盒的最低检测限为1. 0 μ g/L。二、标准品精密度试验从实施例1中所述的三批试剂盒(01批、02批、03批)中每批抽取10个试剂盒，
测定10 μ g/L标准品溶液的发光强度值，计算变异系数。检测方法与实施例1中实验三所
述一致。实验设3次重复，结果如表2所示，表明变异系数范围在4. 2% 10. 5%之间，符 合精密度小于或等于20%的规定。表2标准可重复性试验(CV % ) 三、样本精密度和准确度试验1、样品精密度试验将不含庆大霉素的牛奶按照实施例1的方法进行样品前处理后，添加庆大霉素标 准品，使其终浓度为20 μ g/L。从实施例1中所述的三批试剂盒(01批、02批、02批)中每批抽取3个试剂盒，进行实验，每个实验重复5次，分别计算变异系数，结果如表3所示(表 中的数值为5次重复的平均值)。结果表明牛奶样本的变异系数均小于20%，符合了《农业 部文件》农医发200517号附件2试剂盒备案参考评判标准中第四点精密度和准确度的 精密度标准。表3牛奶样本可重复性试验 2、样本准确度试验将不含庆大霉素的牛奶按照实施例1中所述的样品前处理方法进行处理，然后向 牛奶中加入庆大霉素标准品溶液，使其终浓度分别为50 μ g/L和100 μ g/L ；然后用实施例 1中所述的试剂盒检测牛奶中庆大霉素，每个浓度做4个平行，分别计算准确度(即添加回 收率)(准确度=实测值/添加值)。结果如表4所示，表明各样本以50 μ g/L和200 μ g/L 庆大霉素添加回收率均在76. 4% -95. 2%之间。表4试剂盒的准确度 四、交叉反应率试验选择与庆大霉素有类似结构和类似功能的8种药物测定交叉反应率。通过各种药 物的标准曲线分别得到其50%抑制浓度。用下式计算试剂盒对其它药物的交叉反应率。交叉反应越�。敲创耸约梁卸郧齑竺顾氐募觳馓匾煨跃驮胶谩＝徊娣从β�(％)=(抑制50%庆大霉素标准品的浓度/抑制50%的庆大霉素类 似物浓度)X100%表5试剂盒的特异性实验结果表明，本发明所研制的试剂盒对庆大霉素和小诺霉素的特异性好。五、试剂盒保存期试验试剂盒保存条件为2_8°C，保存6个月后，测定试剂盒的50%抑制浓度、庆大霉素 实际添加测定，结果表明试剂盒的50%抑制浓度均在正常范围之内。考虑在运输和使用过 程中，会有非正常保存条件出现，将试剂盒在37°C保存的条件下放置6天，进行加速老化实 验，结果表明该试剂盒各项指标完全符合要求。考虑到试剂盒冷冻情况发生，将试剂盒放 入-20°C冰箱冷冻5天，测定结果也表明试剂盒各项指标完全正常。从以上结果可得出试剂 盒可以在2-8°C至少可以保存6个月以上。
药物
丝呈座空(%)
庆大霉素 小诺霉素 西索米星 新霉素 卡那霉素 新霉胺 链霉素 安普霉素 大观霉素
100 130 3.2 <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 <0.1 <0.权利要求
一种检测庆大霉素和/或小诺霉素的量子点荧光免疫试剂盒，包括庆大霉素特异性抗体、包被原和标准品溶液；所述包被原为庆大霉素半抗原与载体蛋白的偶联物；其结构式如式I所示(式I)。FSA00000215761000011.tif
2.根据权利要求1所述的量子点荧光免疫试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括浓 缩洗涤液、浓缩复溶液、包被缓冲液、封闭液和量子点标记抗抗体；所述试剂盒由庆大霉素特异性抗体、包被原、标准品溶液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、包 被缓冲液、封闭液和量子点标记抗抗体组成。
3.根据权利要求1或2所述的量子点荧光免疫试剂盒，其特征在于所述庆大霉素特 异性抗体为庆大霉素单克隆抗体或庆大霉素多克隆抗体，所述庆大霉素单克隆抗体是由保 藏号为CGMCC No. 3778的对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN分泌的抗体。
4.根据权利要求1-3中任一所述的量子点荧光免疫试剂盒，其特征在于所述标准品溶液中标准品的浓度为O μ g/L、1 μ g/L、5 μ g/L、10 μ g/L、50 μ g/L或 100 μ g/L，所述标准品为庆大霉素；所述浓缩洗涤液是将0. 05g叠氮化钠和IOOmL浓度为0. 02M、pH为7. 4的磷酸盐缓冲 液混合得到溶液；所述浓缩复溶液是将0. Ig牛血清白蛋白和IOOmL浓度为0. 05mol/L、pH为7. 4的磷酸 盐缓冲液混合得到的溶液；所述包被缓冲液是PH值为9. 6的浓度为0. 03mol/L的碳酸盐缓冲液；所述封闭液是将0. Olg叠氮化钠、IOg牛血清白蛋白和IOOmL浓度为0. 03mol/L、pH值 为7. 4磷酸盐溶液混合得到的溶液。
5.根据权利要求1-4中任一所述的量子点荧光免疫试剂盒，其特征在于所述包被原是按照如下方法制备得到的将每IOOmg庆大霉素半抗原、20mg载体蛋白 和2mL 50mM磷酸缓冲液混勻，得到混合液，记作溶液A ；将150mg乙基二甲氨基碳化二亚胺 溶于ImL水中，得到溶液B ；将溶液B逐滴加入溶液A中，25°C搅拌反应2h，将得到的产物透 析，得到所述包被原；所述庆大霉素半抗原的结构式如式II所示
6.根据权利要求1-5中任一所述的量子点荧光免疫试剂盒，其特征在于 所述庆大霉素半抗原为庆大霉素。
7.根据权利要求1-6中任一所述的量子点荧光免疫试剂盒，其特征在于 所述量子点标记抗抗体为量子点QD650标记羊抗鼠抗抗体；所述载体蛋白为鼠血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白或血蓝蛋白，优选为卵清蛋白。
8.—种检测庆大霉素和/或小诺霉素的方法，包括以下步骤1)样品前处理向每IOmL牛奶中加入200 μ 1 50% (体积百分含量)的三氯乙酸水溶液，混勻；以 3000g离心5min ；取上清液，用复溶液稀释5倍后得到样本溶液；所述复溶液为将所述浓缩 复溶液用0. 05mol/L、pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液稀释10倍得到的；2)利用权利要求1-7中任一所述的检测庆大霉素的量子点荧光免疫试剂盒检测步骤 1)中的样本溶液。
9.由保藏号为CGMCCNo. 3778的对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN分泌的庆大霉 素单克隆抗体。
10.保藏号为CGMCCNo. 3778的对庆大霉素的单克隆杂交瘤细胞株GEN。
全文摘要
本发明公开了一种检测庆大霉素和/或小诺霉素的方法及其专用量子点荧光免疫试剂盒。本发明提供的检测庆大霉素的量子点荧光免疫试剂盒，包括庆大霉素特异性抗体、包被原和标准品溶液；所述包被原为庆大霉素半抗原与载体蛋白的偶联物。本发明的实验证明，本发明的试剂盒具有样品前处理过程简单、操作简便、费用低廉、特异性高、灵敏度高、精确度高等特点，能够现场监控且适合大量样本的筛查。
文档编号G01N33/577GK101907623SQ20101024404
公开日2010年12月8日 申请日期2010年8月3日 优先权日2010年8月3日
发明者史为民, 吴聪明, 张素霞, 曹兴元, 汤树生, 沈建忠, 王战辉, 程林丽 申请人:中国农业大学
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