专利名称：用于检测发育异常上皮组织的改进诊断方法
技术领域：
本发明涉及用于体内检测发育异常的上皮组织的改进诊断方法。
在更确切的方面，本发明是用于检测和/或描绘癌性或癌前期上皮组织的改进诊断方法，该方法的假阳性率低。
按照本发明的另一方面，涉及选择性染色癌性与癌前期上皮组织的染剂的局部应用的诊断方法的假阳性率显著降低了。
通过下列说明，本发明的这些和其他进一步与更具体的方面将为本领域技术人员所显而易见。
已知各种阳离子体外活体染剂具有选择性染色上皮组织的癌性与癌前期细胞以及因发育异常、增生、肿瘤发生和其他活性表面损害而异常的细胞的能力。例如，这类染剂公开在Mashberg的美国专利No.4,321,251、Tucci等的5,372,801、Pomerantz的5,882,627和Bernal等的未决国际申请PCT/US00/05387中。另见Chenz《中国口腔病学杂志》(2744-47)(1992)和Filurin《口腔病学》(俄罗斯)(7244-47)(1993)。其他类似可用的染剂包括若丹明、阿尔新蓝、孔雀绿、酚藏花红、吖啶黄、派若宁Y、甲苯(撑)蓝和煌绿。类似可用的“非染剂”化合物包括芍药素、羟硫胺、替莫碘铵、依利醋铵和呋唑氯铵。
已经显示这类选择性染色的机理涉及标志剂分子吸收或进入癌性或癌前期上皮细胞的线粒体。癌性组织线粒体的这种选择性染色显然是由高于正常细胞的电位(癌性线粒体膜内部的负电荷)引起的。
尽管线粒体标志剂也暂时染色附近的非癌性组织，不过它从正常组织释放的速率大大快于癌性组织的线粒体中释放的速率。因而，癌症的诊断根据是染剂在从正常组织自生性释放之后继续保留在癌性组织中。染剂的应用与组织的诊断观察之间的经过时间的正确选择允许诊断医师检测和选择性描绘正常上皮表面上的癌性或癌前期组织部位。这种程序允许癌性与潜在癌性部位的鉴别，准确度高，也就是假阴性的发生率非常低。不过，由于患者组织之间和其他变量、例如诊断医师技能等上的差异，这种诊断技术也可能产生假阳性结果。
假阳性更优选于假阴性结果，尽管如此，减少假阳性率也将是非�？扇〉模员苊饣蚣跎偾秩胄灾な凳匝榈谋匾裕苊獠槐匾厥够颊卟皇�。
为了尝试减少假阳性率，有人已经提出在大约两周后重复该程序，提供非癌性损害或伤口愈合的时间，这些损害或伤口即使不是癌性或癌前期的，也明显比正常组织趋于更长时间地蓄积和保留染剂。当然，这种重复的确防止大量假阳性。不过，由于其他原因，假阳性的可能性仍然存在。
这些染剂染色正常组织的暂时而不显著的趋势是由于染剂与上皮组织的细胞外基质(ECM)组分结合。鉴于染剂实际上进入癌性与癌前期细胞的线粒体，它仅暂时地与ECM组分结合，特别是纤连蛋白。
阳离子染剂和其他线粒体标志剂与ECM组分的暂时结合可能是由于各种机理中的一种或多种。因而，线粒体标志剂可能通过静电吸引暂时与带负电的ECM蛋白质结合。此外，可能在ECM蛋白质与排斥水的标志剂杂环部分之间发生疏水性相互作用。通过标志剂的不同部分与电中性ECM蛋白质的结合，可能发生其他非特异性结合。即使在上皮细胞之间的紧密接点之外也能发生线粒体标志剂与ECM蛋白质的这类暂时性结合，例如在上皮的表面上，以及癌性细胞之间和下方。
通过用无毒的两亲性蛋白质预处理所要施用标志剂的上皮区域，多半能够防止线粒体标志剂与ECM蛋白质的不可取的暂时结合。两亲蛋白质通过各种结合机理进入ECM蛋白质，因而暂时使它们不能结合随后施用的线粒体标志剂。用两亲蛋白质预处理上皮显著减少了由线粒体标志剂与ECM蛋白质暂时结合引起的假阳性反应的发生和可能因此被误认为癌性或癌前期组织的正常上皮上“染色”区域的外观。
所要用于预处理的两亲蛋白质的精确性质不是非常关键。所有粘多糖都是两亲的。不过，为方便操作和应用，当前优选采用白蛋白(可溶于水)或球蛋白(可溶于稀盐溶液)。例如有效地采用血清白蛋白和乳蛋白，例如酪蛋白。也有效采用谷蛋白，例如小麦白蛋白与醇溶谷蛋白(可溶于含水醇)和麦谷蛋白(可溶于稀酸与碱、洗涤剂或还原剂)。
下列实施例阐述当前优选的发明实施方式。本领域技术人员将了解和领会到可以对这种程序进行修改而不背离发明的基本概念。所以，这些实施例不被视为限制发明的范围，后者仅由权利要求书定义。
实施例1前处理组合物的制备制备下列两亲蛋白质前处理组合物组分重量％血清白蛋白 30无菌水 68.5矫味剂(IFF覆盆子IC563457) .5防腐剂(苯甲酸钠)1.0实施例2TBO染剂组合物的制备制备甲苯胺蓝O(TBO)染剂组合物，具有下列组成
组分重量％TBO 1.00矫味剂(IFF覆盆子IC563457).20缓冲剂(乙酸钠三水合物) 2.45防腐剂(过氧化氢30％) .41乙酸 4.61乙醇 7.48水 83.85实施例3前冲洗与后冲洗溶液的制备将1wt％乙酸、苯甲酸钠防腐剂和覆盆子矫味剂溶于纯净水，制备前冲洗与后冲洗溶液。
实施例4临床方案让患者披上围涎，以保护衣服。预期患者会咳吐，所以准备一个10oz口杯，这个杯子可以在传染性废物容器内得到处置，或者内容物可以直接倒入洗涤池的中央排放口，以避免污染洗涤池。遮盖可能被染色的环境表面或物体或将其该区域移走。
进行目视口腔癌检查，无需使用任何可能导致软组织划痕或切伤的仪器。标注软组织和牙齿的外观。
患者用大约15ml前冲洗溶液冲洗口腔大约20秒钟，吐出，以除去过量涎液，提供一致的口腔环境。然后用另外的前冲洗溶液重复该步骤。
患者然后用水冲洗和漱口大约20秒钟，吐出。
患者然后用大约50ml蛋白质前处理组合物冲洗和漱口大约30秒钟，吐出。然后重复该步骤，但是患者在口腔内保留蛋白质前处理组合物大约两分钟，然后吐出。
患者然后用30ml TBO溶液冲洗和漱口一分钟，吐出。
患者然后用15ml后冲洗溶液冲洗，吐出。然后重复该步骤。
患者然后用水冲洗和漱口20秒钟，吐出。然后重复该步骤。
然后目视观察口腔，如果必要的话，利用适当的软组织检查技术，包括退缩、良好平衡的照明与放大。记录已被染成蓝色的怀疑损害的位置、大小、形态、颜色和表面特征。
得到所有保持蓝色的组织样本，进行正常的癌检测组织学程序。注意到没有“假阳性”样本。
实施例5其他蛋白质的使用重复实施例1-4程序，但是实施例1的蛋白质前处理溶液是球蛋白、酪蛋白、谷胶白蛋白、小麦醇溶谷蛋白和麦谷蛋白以及适合的矫味剂在适合的药理学上可接受的溶剂中的溶液。得到等价结果。
实施例6其他线粒体标志染剂的使用重复实施例1-5程序，但是所用染剂是天青B、天青C、煌焦油蓝、若丹明、阿尔新蓝、孔雀绿、酚藏花红、吖啶黄、派若宁Y、甲苯撑蓝、煌绿、芍药素、羟硫胺、替莫碘铵、依利醋铵和呋唑氯铵。得到等价结果。
通过描述使本领域技术人员能够理解和实施本发明，并且鉴别当前优选的实施方式。
权利要求
1.在包括向怀疑组织部位局部施用选择性染色癌性与癌前期细胞的线粒体标志剂步骤的检测发育异常上皮组织的诊断方法中，减少所述方法假阳性率的方法包含通过在施用所述染剂之前向所述部位施用蛋白质，抑制细胞外基质组分被所述染剂所标志。
2.两亲蛋白质的用途，用于在为检测癌性或癌前期组织而施用线粒体标志剂之前对上皮组织进行预处理，与ECM蛋白结合，减少假阳性指示的可能性。
全文摘要
公开了口内甲苯胺蓝染色的方法,其中前冲洗组合物含有两亲蛋白质,例如白蛋白,它与细胞外基质组分结合,例如粘连蛋白。这样,染色对癌前期与癌性细胞更有特异性。
文档编号G01N33/48GK1374855SQ00813014
公开日2002年10月16日 申请日期2000年7月20日 优先权日2000年7月20日
发明者道格拉斯·D·伯克特 申请人:日拉公司
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