专利名称：一种苦瓜叶乙醚提取物化学成分的检测方法
技术领域：
本发明属于植物资源的综合开发技术领域，涉及采用现代分析仪器检测植物、蔬 菜化学成分的检测方法，更具体的说是一种苦瓜叶不同提取物中化学成分的检测方法。
背景技术：
苦瓜(Momordica Charantia L)又名锦荔枝、癞葡萄、癞瓜、凉瓜等，系葫芦科苦 瓜属蔓性草本植物，据嵩明人兰茂所著的《滇南本草》记载，苦瓜叶片具有治胃痛、痢疾、 疗疮肿毒、驱虫等功效，通过田间调查和实验证实苦瓜叶及其提取物还具有较强抗虫性， K. Prabakar等对苦瓜、蛇瓜、丝瓜、冬瓜和西瓜这五种葫芦科植物叶片的甲醇提取物对致倦 库蚊(Celux quinquefasciatus)幼虫杀虫活性进行了研究，结果表明苦瓜叶甲醇提取物对 致倦库蚊的杀虫活性最大，其LC5tl值为465. 85ppm，低于其它四种葫芦科植物。陈宏等采用 乙醚、丙酮、乙醇、石油醚4种有机溶剂浸提和热提苦瓜叶片，以提取液涂抹桑叶和甘蓝叶 分别饲喂家蚕和菜青虫，试验结果表明4种有机溶剂提取液处理试虫，其取食量降低，生 长速率缓慢，存活率下降，其中以乙醚提取液的作用效果最强。但苦瓜叶中对幼虫具有杀虫 活性的化学成分有哪些至今未见相关的文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种苦瓜叶乙醚提取物中化学成分的检测方法及结果。本文 通过气相色谱_质谱_计算机联用系统对苦瓜叶中的化学成分作了一个系统的分析，试图 揭示苦瓜叶抗虫作用的化学本质，为苦瓜叶片抗虫作用的进一步研究提供参考，并为苦瓜 叶作为一种植物资源的综合开发提供科学依据。为实现此目的，本发明内容提供如下的技术内容一种苦瓜叶乙醚提取物化学成分的检测方法，其特征在于包括如下的步骤(1)苦瓜叶乙醚提取物称取2g新鲜苦瓜叶片研磨成粉末，加入200mL乙醚，用索氏提取器反复抽提至无 色，移除溶剂，称重，再取提取物重新溶于IOOmL乙醚；然后取IOmL醚提液，加体积比2 1 的乙醚-正己烷混合液Iml，甲醇5ml，0. 8mol/L氢氧化钾甲醇溶液Iml，摇勻，静置5min，加 水5ml，300rPm离心，进行甲酯化处理，备用；(2)采用GC-MS进行分析，气相色谱条件柱子初始温度60°C保持2min，以5°C / min升至150°C保持3min，再以10°C /min升至220°C，保持3min，进样口温度250°C ；质谱 连接线温度250°C，高纯氦气为载气，流速l.Oml/min，分流比60 1，进样量1. O μ L，质 谱条件质谱电离方式为ΕΙ，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度250°C ；电子倍增器电 压1. 0X105 ；溶剂延迟时间:3min ；扫描范围m/z :35_1000aum ；(3)利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量，从苦瓜叶乙醚提取物中分析 签定出45种化合物，占总出峰面积的重量百分比为54. 2%，苦瓜叶醚提物中的主要成分有 十九烷(3. 85% )，十四烷(3. 19% ), η-棕榈酸(2. 64% )，二丁基羟基甲苯(2. 56% ),2,611-三甲基十二烷(2. 42%)，2，6，10_三甲基十五烷(2. 38%),1"甲基-萘烯(2. 05%), 2，4，6_三甲基癸烷(2. 02% )0本发明采用GC-MS (气相色谱-质谱联用)分析技术对苦瓜叶不同提取物中的化 学成分进行研究。结果从醚提物中鉴定出45种，占总出峰面积的54.2%。结果显示十九 烷，十四烷，η-棕榈酸等为苦瓜叶乙醚提取物中的主要成分本发明的检测方法为苦瓜叶作 为一种植物资源的开发利用奠定了基础，提供了实证依据。本发明具更加体的试验方法如下1、材料与方法1.1仪器和试剂GC-MS 联用仪(Thermo，Focus GC, DSQ II，美国)TR-5MS 色谱柱(30mX 25mmX0. 25 μ m)，NIST05 标准谱图库乙醚、无水硫酸钠和氢氧化钠均为分析纯(天津市元立化工有限公司)苦瓜叶采自天津市郊区，经鉴定为葫芦目葫芦科苦瓜属长丰三号苦瓜的叶片，用 去离子水洗净后烘干备用。1.2分析样品的制备苦瓜叶粗脂肪的提取称取2g新鲜苦瓜叶片研磨成粉末置于滤纸套内，加入200mL乙醚，用索氏提取器 反复抽提至无色，所得提取液用旋转蒸发仪移除溶剂，称重，再取提取物重新溶于IOOmL乙醚。苦瓜叶乙醚提取物的甲酯化处理取IOmL乙醚提取液，加乙醚-正己烷(2 1)混合液1ml，甲醇5ml，0. 8mol/L氢 氧化钾甲醇溶液1ml，摇勻，静置5min，加水5ml，离心(300rPm)，取上层液作GC-MS分析。1. 3 GC-MS 分析条件气相色谱条件柱子初始温度60°C保持2min，以5°C /min升至150°C保持3min， 再以10°C /min升至220°C，保持3min ；进样口温度250°C ；质谱连接线温度250°C，高纯氦 气为载气，流速l.Oml/min ；分流比60 1;进样量1.01^。质谱条件质谱电离方式为EI，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度250°C ；电 子倍增器电压1. OX IO5 ；溶剂延迟时间3min ；扫描范围m/z :35_1000aum。按上述GC-MS分析条件对苦瓜叶提取物上机测试，苦瓜叶乙醚提物的总离子流色 谱图(见图1)。各峰的鉴定主要通过NIST05谱库检索，并根据有机化合物的质谱断裂一般 规律和文献报道的数据分析确定，利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量(结果见 表1)。通过GC-MS技术，从苦瓜叶乙醚提取物中分析签定出45种化合物，占总出峰面积 的54.2%，苦瓜叶醚提物中的主要成分有十九烷(3. 85% )，十四烷(3. 19% )，η-棕榈酸 (2. 64% )，二丁基羟基甲苯(2. 56% )，2，611_ 三甲基十二烷(2.42% )，2，6，10_ 三甲基 十五烷(2. 38%)，1_甲基-萘烯(2.05%)，2，4，6_三甲基癸烷(2.02%)等。从化合物类 型来看醚提物中烷烃及其衍生物占绝大多数。从乙醚提取物中鉴定出的化合物只要是一些 烷烃及一些脂肪酸类化合物，对昆虫可能有抗性的化合物有1-亚甲基-1-氢茚和2，5- 二 羟基-5-(4-甲基苯基)-4_苯基恶唑等。
表1苦瓜叶乙醚提取物分析结果 3 结论将GC-MS联用技术应用于苦瓜叶化学成分的分析鉴定上，本发明从乙醚提取液中 鉴定出45种化学成分，占总出峰面积的54.2%。结果显示十九烷，十四烷，η-棕榈酸等为 苦瓜叶乙醚提取液中的主要成分，这为苦瓜叶抗虫作用的进一步研究和苦瓜叶的综合开发 利用提供了实证依据。
图1苦瓜叶乙醚提取物的总离子流色谱图。
具体实施例方式为了更充分的解释本发明的实施，提供下述制备方法实施实例。这些实施实例仅 仅是解释、而不是限制本发明的范围，所用原料均有市售。实施例1苦瓜叶乙醚提取物称取经过处的新鲜苦瓜叶片2g研磨成粉末，加入200mL乙醚，用索氏提取器反复抽 提至无色，所得提取液用旋转蒸发仪移除溶剂，称重，再取提取物重新溶于IOOmL乙醚；然后取 IOmL乙醚提取物，加体积比2 1的乙醚-正己烷混合液Iml，甲醇5ml，0. 8mol/L氢氧化钾甲 醇溶液Iml，摇勻，静置5min，加水5ml，300rPm离心，进行甲酯化处理，取上层液作GC-MS分析。实施例2采用GC-MS进行分析，气相色谱条件柱子初始温度60°C保持2min，以5°C /min升至150°C保持3min，再以10°C /min 升至220°C，保持3min，进样口温度250°C ；质谱连接线温度250°C，高纯氦气为载气，流速
1.Oml/min，分流比60 1，进样量1.0yL。质谱条件质谱电离方式为EI，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度250°C ；电 子倍增器电压1. OXlO5 ；溶剂延迟时间:3min ；扫描范围m/z :35_1000aum。按上述GC-MS分析条件对苦瓜叶醇溶性成分上机测试，苦瓜叶乙醚提物物的总离 子流色谱图(见图1)。各峰的鉴定主要通过NIST05谱库检索，并根据有机化合物的质谱 断裂一般规律和文献报道的数据分析确定，利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量 (结果见表1)。实施例3(1)苦瓜叶乙醚提取物称取2g新鲜苦瓜叶片研磨成粉末，加入200mL乙醚，用索氏提取器反复抽提至无 色，移除溶剂，称重，再取提取物重新溶于IOOmL乙醚；然后取IOmL醚提液，加体积比2 1 的乙醚-正己烷混合液Iml，甲醇5ml，0. 8mol/L氢氧化钾甲醇溶液Iml，摇勻，静置5min，加 水5ml，300rPm离心，进行甲酯化处理，备用；(2)采用GC-MS进行分析，气相色谱条件柱子初始温度60°C保持2min，以5°C / min升至150°C保持3min，再以10°C /min升至220°C，保持3min，进样口温度250°C，质谱 连接线温度250°C，高纯氦气为载气，流速1. Oml/min，分流比60 1，进样量1. O μ L ；质 谱条件质谱电离方式为ΕΙ，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度250°C，电子倍增器电 压1. OX 105，溶剂延迟时间:3min，扫描范围m/z :35_1000aum ；(3)利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量，从苦瓜叶乙醚提取物中分析 鉴定出45种化合物，占总出峰面积的重量百分比为54.2%，主要成分有3. 85%十九烷， 3. 19%十四烷，2. 64% η-棕榈酸，2. 56%二丁基羟基甲苯，2. 42% 2，611_三甲基十二烷，
2.38% 2，6，10-三甲基十五烷，2. 05% 1-甲基-萘烯，2. 02% 2，4，6_三甲基癸烷。
权利要求
一种苦瓜叶乙醚提取物化学成分的检测方法，其特征在于包括如下的步骤(1)苦瓜叶乙醚提取物称取2g新鲜苦瓜叶片研磨成粉末，加入200mL乙醚，用索氏提取器反复抽提至无色，移除溶剂，称重，再取提取物重新溶于100mL乙醚；然后取10mL醚提液，加体积比2∶1的乙醚 正己烷混合液1ml，甲醇5ml，0.8mol/L氢氧化钾甲醇溶液1ml，摇匀，静置5min，加水5ml，300rPm离心，进行甲酯化处理，备用；(2)采用GC MS进行分析，气相色谱条件柱子初始温度60℃保持2min，以5℃/min升至150℃保持3min，再以10℃/min升至220℃，保持3min，进样口温度250℃，质谱连接线温度250℃，高纯氦气为载气，流速1.0ml/min，分流比60∶1，进样量1.0μL；质谱条件质谱电离方式为EI，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度250℃，电子倍增器电压1.0×105，溶剂延迟时间3min，扫描范围m/z35 1000aum；(3)利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量，从苦瓜叶乙醚提取物中分析鉴定出45种化合物，占总出峰面积的重量百分比为54.2％，主要成分有3.85％十九烷，3.19％十四烷，2.64％n 棕榈酸，2.56％二丁基羟基甲苯，2.42％2，611 三甲基十二烷，2.38％2，6，10 三甲基十五烷，2.05％1 甲基 萘烯，2.02％2，4，6 三甲基癸烷。
全文摘要
本发明公开了一种苦瓜叶乙醚提取物化学成分的检测方法，即通过GC-MS技术鉴定苦瓜叶片化学成分的方法和结果。它是采用有机溶剂提取苦瓜叶片的方法得到提取液，经过甲酯化处理后再经毛细管色谱柱分离，将所得样品质谱图与标准谱图库中的谱图对比定性，并采用峰面积归一化法计算相对含量。从苦瓜叶乙醚提取物中鉴定出45种化学成分，占总出峰面积的54.2％。结果显示十九烷，十四烷，n-棕榈酸等为苦瓜叶醚提物中的主要成分，本发明为苦瓜叶作为一种植物资源的开发利用奠定了基�。峁┝耸抵ひ谰�。
文档编号G01N30/06GK101923077SQ20101022533
公开日2010年12月22日 申请日期2010年7月14日 优先权日2010年7月14日
发明者吴志杰, 陈宏 , 雷盯函 申请人:天津师范大学
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