专利名称：一种格列苯脲快速检测卡及其检测方法
技术领域：
本发明涉及一种格列苯脲快速检测卡及其检测方法，是一种检测格列苯脲的检 测器具，属于中药非法添加西药成分检测技术领域。
背景技术：
中成药中添加西药成分，一类是合法的，例如消渴丸中加上了格列苯脲，这就 使得疗效明显提高。另一类是非法添加西药的，说明书中根本就没有说明其中添加了什 么西药，这是最危险的，患者服用不当必然酿成大祸。糖尿病药品或保健品中最常添加的降糖西药成分是格列苯脲、格列齐特和格列 吡嗪。格列苯脲又叫优降糖，是一种降糖效果明显的西药，但是由于副作用也比较明 显，如果长期大量服用格列苯脲，最终会造成病人的低血糖和肾�。踔恋贾滤劳�。在 临床上经常会遇到患者因私自服用过量号称纯中药的药物而出现病情加重或恶化的情 况。因此，加强对中成药中非法添加西药成分的检测是非常必要的。目前，检测这 些西药成分的主要方法有高效液相色谱法及液质联用等进行定性和定量的分析。这些方 法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此 建立一种准确可靠又快速方便的检测中药中西药成分的分析方法是非常必要的。本发明拟发明一种基于小分子物质格列苯脲偶联蛋白质后而具有抗原性的免疫 学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金标记技术和免疫层析法设计的一种 快速检测试剂，可快速特异地检测降糖中药样品中的格列苯脲。根据检测卡样品检测线 (T)和质控线(C)的有无显色来判定降糖中药样品中的格列苯脲含量。反应是利用格列 苯脲蛋白质偶联物抗原性而建立的一种检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检 测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，既 可以在实验室进行，也可在超市、家庭、车间等实地进行测定。由于样本量需要少、简 便快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，灵敏度高，准确率大。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能检测格列苯脲的检测器具，直接应用免疫学的方 法检测降糖中药样品中格列苯脲的含量，克服现有色谱法检测的操作繁琐等缺点，建立 基于免疫学特异性的检测方法。本发明的技术方案一种格列苯脲快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测 卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4 ；测试条2是由支承 背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9 所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一 端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫 与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7;胶体金膜为含抗格列苯脲抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次 是含格列苯脲蛋白质偶联物的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条 置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。应用免疫学的方法直接检测样品中格列苯脲的含量，检测样品为胶囊、片剂和 药丸降糖中药样品，处理方法如下
(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻；
(2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震 荡反应30min ；
抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；
(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后 的上清液；若上清液澄清，则按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液 IOOyL加入300yL样品稀释液，混合均勻后测定；上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤 后的上清液按上清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定；
样品稀释液为pH7.6、IOmmol PBST溶液；
当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中 格列苯脲含量未超标。当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表 示被检测样品中格列苯脲含量超标。当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。本发明的有益效果本发明的优点是能检测降糖中药样品中含有的格列苯脲， 易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
图1格列苯脲快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试 条，3、检测窗孔，4、加样孔。图2检测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测 带，11、质控带。图3格列苯脲快速检测卡的检测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维 素膜，7、胶体金膜，8、样品垫，9、吸水膜。
具体实施例方式本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下 实施例1
一种格列苯脲快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的 结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽 20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联 接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1 的壳座内。测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2.5mm。测试条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0.5mm，长 60mm,宽4mm;支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0.5mm，长 20-25mm,宽4mm。硝酸纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2， 二条显示印迹带中，一条是检测带10，含格列苯脲蛋白质偶联物；另一条是质控带11， 含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5—端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上 叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6 —端搭接， 在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7，胶体金膜7 是含抗格列苯脲单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7厚0.5-0.8mm,长 5mm,宽 4mm。样品垫 8 厚 0.5_0.8mm，长 20mm，宽 4mm。吸水膜 9 厚 0.5_0.8mm， 长16-20mm，宽4mm。胶体金膜7、样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为 l-2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。本发明格列苯脲检测卡用于检测降糖中药样品中的格列苯脲的检测。实施例2
使用格列苯脲快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入格 列苯脲快速检测卡的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7 所含的抗格列苯脲单克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观
察结果。应用免疫学的方法直接检测样品中格列苯脲的含量，检测样品为胶囊、片剂和 药丸降糖中药样品，处理方法如下
(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻；
(2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震 荡反应30min ；
抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；
(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后 的上清液；若上清液澄清，则按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液 IOOyL加入300yL样品稀释液，混合均勻后测定；上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤 后的上清液按上清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定；
样品稀释液为pH7.6、IOmmol PBST溶液。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体 金标记的抗体，在测试带上分别与含格列苯脲蛋白质偶联物，以及质控带抗兔抗体或抗 鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有待检格列苯脲存在，当样品加入后即与抗体 发生反应，而不会与检测带所含的格列苯脲蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应 的结果有以下3种情况
1、当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检 测样品中格列苯脲含量未超标；
2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说 明被检测样品中格列苯脲含量超标；
3、当检测带10和质控带12均不显色，则表明检测试条已失效。
权利要求
1.一种格列苯脲快速检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状的检测卡外壳(1)中 设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4)；测试条(2)是 由支承背板(5)上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫(8)、胶体金膜(7)、硝酸纤 维素膜(6)、和吸水膜(9)所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，支 承背板一端叠置粘贴吸水膜(9)，另一端叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜内端与样品垫 内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置 粘贴一段胶体金膜(7)；胶体金膜为含抗格列苯脲抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝 酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是含格列苯脲蛋白质偶联物的检测带(10)，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(11)，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正 对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
2.权利要求1所述格列苯脲快速检测卡的检测方法，其特征在于应用免疫学的方法直 接检测样品中格列苯脲的含量，检测样品为胶囊、片剂和药丸降糖中药样品，处理方法 如下(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻；(2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震 荡反应30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后的 上清液；上清液澄清，按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液IOOyL 加入300 μ L样品稀释液，混合均勻后测定；上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤后的上 清液，按上清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定；样品稀释液为pH7.6、IOmmol PBST溶液；当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中 格列苯脲含量未超标；当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被 检测样品中格列苯脲含量超标；当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。
全文摘要
一种格列苯脲快速检测卡及其检测方法，属于中成药中非法添加西药成分检测技术领域。本发明格列苯脲快速检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗格列苯脲单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有两条检测带，一条为含格列苯脲蛋白质偶联物的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本发明优点是应用免疫学的方法直接检测降糖中药样品中非法添加的格列苯脲的含量。本发明格列苯脲快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。
文档编号G01N33/558GK102012426SQ20101060333
公开日2011年4月13日 申请日期2010年12月24日 优先权日2010年12月24日
发明者吴文晔, 周坚, 熊晓芳 申请人:无锡安迪生物工程有限公司
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
