专利名称：黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法
技术领域：
本发明属于化学检测技术领域，涉及ー种黄瓜果实中丙醇ニ酸的检测方法，具体涉及ー种利用高效液相色谱技术(HPLC)对黄瓜果实中丙醇ニ酸进行定性定量的检测方法。
背景技术：
丙醇ニ酸(Tartronic acid)是ー种小分子有机酸。它可抑制碳水化合物在动物体内转化为脂肪。现代药理学研究表明黄瓜果实中含有丙醇ニ酸，可以阻止人体内脂肪堆积，有减肥和预防冠心病的功效。黄瓜发涩的ロ感主要来自黄瓜所含的丙醇ニ酸，这是其它 一般蔬菜不含的成分。丙醇ニ酸和唾液融合会有点儿发涩的ロ感。据研究，黄瓜中所含丙醇ニ酸无毒副作用，是良好的天然减肥食品。丙醇ニ酸在不同品种的黄瓜果实中含量差异比较大。目前关于黄瓜中含有丙醇ニ酸的宣传报道有很多，但却没有黄瓜中丙醇ニ酸的鉴定和含量检测方法，此方面研究国内外尚属空白。鉴于丙醇ニ酸的减肥和美容功效以及黄瓜在人们餐桌上的重要性，预计此领域的研究将会倍受青睐。
发明内容
针对目前各种关于黄瓜中含有丙醇ニ酸的报道，但却没有相应的实验方法对其进行定性定量检测，本发明提供ー种黄瓜果实中丙醇ニ酸的定性定量检测方法。本发明的上述目的通过以下技术方案实现(I)黄瓜果实的前处理将黄瓜果实去除两端和种腔部分，粉碎后再研磨；(2)丙醇ニ酸的提取将研磨好的黄瓜果实样品离心，取上清液；(3)丙醇ニ酸的HPLC检测HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择检测器測定波长后进行检测，所述流动相为硫酸钠溶液；流速为O. 8 I. Oml/min ；r = 215nm,进样量为 10 μ I ；(4)丙醇ニ酸定性定量方法的建立用流动相逐级稀释丙醇ニ酸标准品，配制成浓度为O. 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液，以姆个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇ニ酸含量。本发明通过建立黄瓜果实中丙醇ニ酸的检测方法，对发掘黄瓜中丙醇ニ酸含量高和低的种质资源，从而为黄瓜种质资源创新、高丙醇ニ酸专用品种选育及其产品开发奠定基础。此方法前处理简单，成本低，可同时分析多个样品，重复性好，结果精确稳定。
图I为5mg/ml丙醇ニ酸标准品的HPLC图2为丙醇ニ酸标准曲线。
具体实施例方式具体实施方式
一本实施方式按照如下方法检测黄瓜果实中丙醇ニ酸(I)黄瓜果实的前处理将黄瓜果实去除两端末梢部分，然后切成段，去除种腔部分(包括种子)，用榨汁机粉碎至糊状，取少量于研钵中研磨。(2)丙醇ニ酸的提取将研磨好的黄瓜果实样品装入I. 5ml离心管中，记录管中样品重量。然后离心，取 上清液过O. 45 μ m滤膜，进行HPLC检测。(3)丙醇ニ酸的 HPLC-DAD 检测HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择測定波长后检測。(4)丙醇ニ酸定性定量方法的建立用流动相逐级稀释丙醇ニ酸标准品，配制成浓度为O. 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液,在O. 5 10mg/ml浓度范围内，以姆个浓度下的标准溶液所得的相对响应值(O. 5mg/ml :415309. 3 ；lmg/ml :1073755 ；2mg/ml :2310325 ；5mg/ml :6693463 ；10mg/ml :14609955)为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线(见图2)，线性方程为y = 1498. 2x_522765，R2 = O. 9988，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇ニ酸含量。本实施方式所述步骤(I)中，黄瓜果实为新鮮黄瓜，或是新鲜黄瓜粉碎后装入袋中，置于-20°C下保存。本实施方式所述步骤(I)中，要将黄瓜研磨至完全没有颗粒的状态，达到细胞破碎的目的。本实施方式所述步骤(2)中，要做两管样品，每管装混合均匀的黄瓜样品I. 40g左右，先称出空管的重量，再称出加样品后的总重量。在10000 12000r/min条件下离心3 6min。本实施方式所述步骤(2)中，将上清液倒至一个空的离心管中，然后用5ml注射器将倒出的上清液吸干，将注射器中的空气推出，从注射器上读出上清液体积。本实施方式所述步骤(3)中，在新的色谱柱第一次使用时，要先进ー针高浓度的丙醇ニ酸标准品溶液，如10mg/ml。本实施方式所述步骤(3)中，检测时间为8 IOmin。本实施方式所述步骤(3)中阴离子交换色谱柱为HypersilSAX，规格为5μπι，4. 6X250mm,大连依利特阴离子交换柱；流动相硫酸钠溶液(O. 02 O. 3mol/L);流速O. 8 I. Oml/min ;检测器紫外检测器，r = 215nm,进样量10 μ I。本实施方式所述步骤(4)中，5mg/ml标准溶液的配制方法为首先称取IOmg丙醇ニ酸标准品，然后加入2ml流动相，将配好的标准溶液置于4°C下保存。其他标准溶液的配制方法同上。
具体实施方式
ニ本实施方式可以按照如下方法检测不同品种黄瓜果实中的丙醇ニ酸取不同品种的鲜嫩黄瓜果实，每个品种取鲜嫩黄瓜果实的果肉部分500g，先用榨汁机榨成糊状，再取IOg放于研钵中研磨，研磨至无颗粒很细的状态。取I. 5ml离心管，记录空管重量。将研磨好的黄瓜装入离心管中(大半管接近管ロ的位置)，再称量记录管的重量。12000r/min条件下离心3min。将离心管中的上清液倒至一个空的I. 5ml离心管中，用5ml注射器将其吸干(弹出注射器上清液中的气泡，将注射器旋转着向上推，直至注射器中不再有空气)，从注射器上记录上清液的体积。拔掉针头，换上O. 45 μ m的水相针头过滤器，慢慢将上清液过滤至Waters上机小瓶中。将上述黄瓜果实样品做HPLC分析，记录色谱图(图I)。其中，色谱柱HypersilSAX, 5ym,4.6X 250mm,大连依利特阴离子交换柱；流动相硫酸钠溶液(O. 03mol/L);流速:1. Oml/min ;检测器紫外检测器，r = 215nm ;检测时间IOmin0
标准曲线在标准工作液浓度为O. 5 10mg/ml范围内，以峰面积⑴和标准品浓度(X)进行线性回归，得回归方程为y = 1498. 2x-522765, R2 = O. 9988。按外标法以峰面积计算样品中丙醇ニ酸的含量(表I)。并计算出供试品种黄瓜果实中丙醇ニ酸的平均含量为O. 489g/100g。表I黄瓜果实丙醇ニ酸含量表(单位g/100g)
权利要求
1.一种黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述检测方法如下 (1)黄瓜果实的前处理将黄瓜果实去除两端和种腔部分，粉碎后再研磨； (2)丙醇二酸的提取将研磨好的黄瓜果实样品离心，取上清液； (3)丙醇二酸的HPLC检测HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择检测器测定波长后进行检测，所述流动相为硫酸钠溶液；流速为0. 8 I. Oml/min ；r = 215nm,进样量为 10 U I ; (4)丙醇二酸定性定量检测方法的建立用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，配制成浓度为0. 5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml的一组标准工作溶液，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，在检测样品时，根据样品所得的相对响应值，然后从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量。
2.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(I)中，黄瓜果实为新鲜黄瓜，或是新鲜黄瓜粉碎后装入袋中，置于_20°C下保存。
3.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(I)中，将黄瓜研磨至完全没有颗粒的状态。
4.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(2)中，离心分离转速为10000 12000r/min，时间为3 6min。
5.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(2)中，将上清液倒至一个空的离心管中，然后用注射器将倒出的上清液吸干，将注射器中的空气推出，从注射器上读出上清液体积。
6.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(3)中，阴离子交换色谱柱为HypersilSAX，规格为5 y m，4. 6 X 250_。
7.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述硫酸钠溶液浓度为0. 02 0. 3mol/L。
8.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述检测器为紫外检测器。
9.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(3)中，检测时间为8 IOmin。
10.根据权利要求I所述的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，其特征在于所述步骤(4)中，5mg/ml标准溶液的配制方法为首先称取IOmg丙醇二酸标准品，然后加入2ml流动相，将配好的标准溶液置于4°C下保存。
全文摘要
黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法，属于化学检测技术领域。针对目前没有相应的实验方法对黄瓜中丙醇二酸进行定性定量检测，本发明的黄瓜果实中丙醇二酸的定性定量检测方法为将黄瓜果实去除两端和种腔部分，粉碎后再研磨；将研磨好的黄瓜果实样品离心，取上清液；HPLC检测时采用弱碱阴离子型色谱柱，选择流动相等度洗脱，选择检测器测定波长后进行检测；用流动相逐级稀释丙醇二酸标准品，以每个浓度下的标准溶液所得的相对响应值为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线，从标准曲线中读出样品中丙醇二酸含量。本发明前处理简单，成本低，可同时分析多个样品，重复性好，结果精确稳定。
文档编号G01N30/06GK102706994SQ201210211489
公开日2012年10月3日 申请日期2012年6月26日 优先权日2012年6月26日
发明者周秀艳, 武涛, 秦智伟, 辛明, 高洁 申请人:东北农业大学
专业数控铣床产品供应商
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