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专利名称：：戊型肝炎病毒抗原、其抗原组合物、及其含有该抗原或抗原组合物的试剂盒和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种肝炎病毒抗原，尤其涉及一种戊型肝炎病毒抗原、其抗原组合物、及其含有该抗原或抗原组合物的试剂盒和应用。
背景技术：
：HEV是一种无包膜的单股正链RNA病毒，基因组全长约7.2kb，有三个开放型读码框(0RF)，从5'端依次为非编码区(NCR)、0RF1、0RF2、0RF3和3'端非编码区及PolyA尾巴。其中0RF3与0RF1C末断的一个氨基酸和0RF2的N端部分氨基酸重叠。0RF1编码1690个氨基酸，主要是与病毒复制相关的非结构蛋白。0RF2编码660个氨基酸，为病毒的结构蛋白。0RF3编码123个氨基酸，功能尚不太清楚。目前国际病毒分类委员会(ICTV)暂未对其进行准确分类。Lu(LuL，LiCH，Hagedorn.2006.PhylogeneticanalysisofglobalhepatitisEvirussequences:geneticdiversity，subtypesandzoonosis.RevMedVirol16:5-36.)等对Genbank中421个HEV的核苷酸序列进行了分析，HEV主要分为4个基因型，而且具有明显的地域性。1型主要分布在亚洲和非洲等发展中国家，2型主要分布在墨西哥，3型主要在欧洲以及美洲等发达国家，4型主要在亚洲。中国即有1型，也有4型的流行。目前从猪等动物中分离出了大量的HEV3型和4型的病毒株，认为HEV3型和4型是人畜共患性，但1型和2型是否是人畜共患性传染病尚需进一步研究。戊型肝炎(HE)是由戊型肝炎病毒(HEV)引起的一种非甲非乙型病毒性肝炎。HE属典型的自限型疾�。�急性肝炎期约持续一到四周，一般不会发展成慢性肝炎。主要经粪-口途径传播，既有散发，也有流行，在卫生条件差的地区常引起大规模爆发流行，主要由水源污染所引起。感染率在1540岁青壮年最高，孕妇感染HEV后死亡率可达20%，尤其是怀孕三个月左右的孕妇致死率甚至高达25%，幸存者也有着较高的流产率和死胎率。接触传染的几率较低，有可能存在垂直传播和血液传播。HE在亚洲、非洲和美洲等发展中国家人群中发生比较普遍，在一些地区可占到急性病毒性肝炎的50%，是导致发病和病死的重要因素。在一些非HE流行的国家的献血员中HEV抗体阳性率达15%。在非HE流行区的养猪者和与猪密切接触的兽医中，抗HEV抗体阳性率远高于普通献血员。血清学和核酸检测是戊型肝炎流行病学和临床诊断的主要方法。其中前者主要是检测血清中的抗HEV抗体IgM，IgG和IgA;核酸检测主要是通过检测血清，胆汁和粪便中的HEVRNA.，这些检测可以互补用于帮助临床区别新近感染和既往感染，以减少误诊。现有的戊型肝炎病原学检测主要有以下几种方法1.免疫学检测免疫学检测的方法主要针对抗HEV抗体，采用酶联免疫检测方法，检测血清中的抗HEVIgM，IgG禾口IgA抗体。抗HEVIgG出现的较早，在急性期滴度升高，持续时间长，目前其检测主要采用间接ELISA法，利用重组的0RF2和0RF3抗原进行检测。世界范围内使用较为普遍的商业化试剂为Genelab公司和Abott公司的检测试剂盒。他们均采用HEV1型和2型抗原为检测抗原。但是，由于抗HEVIgG抗体持续时间较长，所以无法区别既往感染和近期感染。Chauetal认为，IgA抗体也可以作为HEV近期或急性感染的标识抗体，虽然其阳性持续时间与HEV诊断中的意义还有待临床和流行病学研究的进一步证实。但是，在急性期感染的诊断中，IgA的检测可以作为IgM检测的辅助试验，确证诊断。通常认为，IgM作为急性感染最重要的标志性抗体出现的要比IgG早。一个理想的IgM检测试剂应该具有以下特点灵敏，假阳性率低，持续时间短，能够区别近期感染和既往感染。目前国内市面上广泛应用的商业化试剂是新加坡Genelab公司和北京的万泰公司所产。而大多数试剂所采用的抗原都是0RF2的C端和部分或全长的0RF3抗原。另外，Zhangetal还报道了利用组合的单克隆抗体检测血清中的HEV抗原的方法来诊断急性感染。其ELISA使用的是源于1型和4型的0RF2抗原。2.分子生物学检测分子生物学检测是指使用RT-PCR方法检测血清，粪便，胆汁和组织等样本中的HEVRNA.。然而，HEV病毒血症持续时间很短，许多病人就医时已经错过病毒血症或已接近末期，血液中的病毒RNA拷贝数很低，难以通过RT-PCR检出，这种情况在医药卫生条件不发达的发展中国家尤其突出，粪便排毒虽然持续时间略长于病毒血症，但样品采集困难，易受污染且粪便中可能存在影响PCR的物质。目前报道的RT-PCR在HE病人中检出的阳性率存在很大的差异，从30%到80%不等，这可能与样品采集时间，保存情况，引物匹配，PCR条件和其他不确定因素有关。因此，目前检测HEVRNA的RT-PCR诊断方法仅用于实验室研究，还没有在临床广泛推广应用的商品化试剂。综上，目前急需一种稳定，快速，高灵敏度和特异性的HEV感染的诊断试剂和基因分型的试剂。为此，本发明人通过对HEV的0RF2和0RF3进行分段表达，并经检测不通抗原片段的抗原性筛选出了最佳的检测抗HEVIgM的抗原片段组合，获得了灵敏度高，特异性强，可以尽早检测样品中出现的抗HEVIgM抗体的试剂盒，从而实现了在HEV感染的早期进行准确检测诊断。
发明内容本发明的目的在于提供一种戊型肝炎病毒抗原，该抗原的抗原性较佳，特异性强。为实现本发明的目的，采用如下技术方案—种戊型肝炎病毒抗原，其中所述抗原的抗原片段为pSl-6、pS4-6、pSl-l或pS4-l;所述pSl-6为1型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为351391到640660aa;所述pS4-6为4型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为365405到654674aa;所述pSl-1为1型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为120到90130aa;所述pS4-l为4型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为120到104144aa。优选如下抗原片段所述pSl-6为1型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为371_660aa;所述pS4-6为4型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为385_674aa;所述pSl-1为1型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为1-llOaa;所述pS4-l为4型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为l_124aa。本发明中，所述的1型HEV0RF2和4型HEV0RF2参见"1型与4型戊型肝炎病毒0RF2抗原性比较"(何鹏、张华远、王佑春和李卓的"1型与4型戊型肝炎病毒0RF2抗原性比较"，中华微生物学和免疫学杂志2006年3月第26巻第3期210-214)，其中1型HEV0RF2编码660个氨基酸，4型HEV0RF2编码674个氨基酸。如上述优选的抗原片段具体如下pSl-6为编码660个氨基酸的1型HEV0RF2中取371_660aa的片段；pS4-6为编码674个氨基酸的4型HEV0RF2中取385_674aa的片段；pSl-l为编码660个氨基酸的1型HEV0RF2中取l-110aa的片段；pS4-l为编码674个氨基酸的4型HEV0RF2中取l-124aa的片段。本发明的另一目的在于提供一种戊型肝炎病毒抗原组合物，该抗原组合物抗原性强，特异性强，检出时间早，更适于临床应用。本发明所述的抗原组合物为所述的抗原组合物为将pSl-6的C末端和pSl-l的N末端组合、pS4-6的C末端和pS4-l的N末端组合、pSl-6的C末端与pS4_l的N末端组合或pSl-l的N末端与pS4-6的C末端组合。优选的，本发明所提供的抗原组合物为将pSl-6的C末端与pSl-l的N末端组合或将pS4-6的C末端与pS4-l的N末端组合而成的。本发明还提供一种检测戊型肝炎病毒IgM抗体的试剂盒，该试剂盒实现了在HEV感染的早期进行准确检测诊断的目的，用于间接ELISA方法检测HEVIgM抗体本发明所提供的试剂盒含有本发明所述的任一抗原或抗原组合物。本发明还提供所述的抗原或抗原组合物在检测戊型肝炎病毒抗体中的应用，即利用间接ELISA方法检测样本中HEVIgM抗体的体外方法。以下为本发明的详细描述。现已确认的HEV基因组共存在3个开放读码框(0RF1-3)。0RF1(28-5106nt)编码HEV病毒最大的蛋白，该蛋白约186kDa，包括至少4个结构区。到目前为止只有很少实验室能够表达完整的0RF1蛋白，分段表达的0RF1蛋白多用于功能学研究，目前0RF1片段仅在HEV抗体Western印迹检测试剂中应用，ELISA检测试剂中很少使用。0RF2基因长1980bp(约5147-7126nt)，编码分子量约为72kDa的病毒衣壳蛋白。0RF2蛋白有一个111氨基酸的信号序列和三个可能用于分泌表达的潜在的羰基化位点。在HEV感染中0RF2蛋白抗体具有重要的意义，虽然HEV的感染极力仍未阐明，但作为HEV衣壳蛋白的0RF2蛋白在感染过程中很可能扮演着与宿主细胞膜上的受体结合并诱发病毒衣壳和进入细胞的角色，因此目前一经发现的多数中和抗体都为抗0RF2蛋白抗体。目前用于抗体检测的0RF2蛋白主要来源于昆虫细胞系统表达的完整0RF2蛋白和大肠杆菌系统表达的0RF2蛋白片段，但不同的抗原表现出不同的抗体结合力，比如0RF2蛋白片段比0RF2蛋白全长能更有效的结合恢复期病人血清中的抗HEV抗体。目前市场上所使用的试剂使用的抗原多为0RF2的C端片段，几乎没有使用其N端抗原的试剂。而且，其基因来源多为1型和2型。但是，在中国既有1型，也有4型，且4型的0RF2蛋白较1型的0RF2蛋白长14个氨基酸。50RF3编码HEV病毒的一个小磷酸化蛋白，分子量约为13.5kDa。它同被成为AMBP的肝细胞骨架蛋白相互作用。0RF3蛋白较�。�其含有的抗原表位也相对较少，其C端，尤其是105-122aa据说抗原性较高，HE病人中针对该表位的抗体阳性率较高，目前抗体诊断试剂中多包含0RF3蛋白的部分片段，其基因来源同0RF2，也多为1型和2型。而中国流行的4型HEV其0RF3蛋白较1型的0RF3蛋白短9个氨基酸。为了获得检测HEVIgM抗体的高灵敏度检测方法，本发明人从患者的粪便样品中钓出1型和4型的两株病毒基因，将其在大肠杆菌中分段表达，比较两个基因型间统一区域和基因型内不通区域抗原片段的抗原性，筛选出最佳抗原，进行ELISA检测。除非另外定义，这里所有的技术和科学名词都表达的是在本发明涉及领域里熟练技术人员所理解的通�：�义。这里所用的命名和在细胞培养，分子遗传学，核酸化学，免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。本发明的一方面，涉及两个基因型HEV0RF2抗原的C末端和N末端抗原位点，其为所述抗原的抗原片段为pSl-6、pS4-6、pSl-l或pS4-1;所述pSl-6为1型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为351391到640660aa;所述pS4-6为4型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为365405到654674aa;所述pSl-l为1型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为120到90130aa;所述pS4-l为4型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为120到104144aa。优选如下抗原片段所述pSl-6为1型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为371_660aa;所述pS4-6为4型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为385_674aa;所述pSl-l为1型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为1-llOaa;所述pS4-l为4型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为1-124aa。本发明的另一方面，涉及抗原组合物，戊型肝炎的一型和四型的0RF2抗原的两端组合，即对应亚型的N端和C端组合。具体为将所述的抗原组合物为将pSl-6的C末端和pSl-l的N末端组合、pS4-6的C末端和pS4-l的N末端组合、pSl_6的C末端与pS4_l的N末端组合或pSl-l的N末端与pS4-6的C末端组合。优选将pSl-6的C末端与pSl-l的N末端组合或将pS4-6的C末端与pS4-l的N末端组合而成的。本发明的再一方面，涉及一种利用前述任一抗原组合物及其中的任何一种抗原用于间接ELISA方法检测HEVIgM抗体的试剂盒。本发明涉及一种利用间接ELISA方法检测样本中HEVIgM抗体的体外方法。与现有技术相比，本发明具有如下优点1)本发明所提供的抗原或抗原组合物抗原性强、特异性强；2)本发明所提供的试剂盒灵敏度高，特异性强，可以尽早检测样品中出现的抗HEVIgM抗体的试剂盒，从而实现了在HEV感染的早期进行准确检测诊断；3)本发明所提供的抗原或抗原组合物可应用在检测戊型肝炎病毒抗体中，从而利用间接ELISA方法检测样本中HEVIgM抗体的体外方法。图l-A为纯化后的融合多肽pSl-l到6的SDS-PAGE检测；6图1-B为纯化后的融合多肽pS4-l到6的SDS-PAGE检测；图1-C为纯化后的融合多肽pSl-9，pSl-7，pSl-8，pS4_9，pS4_7和pS4_8的SDS-PAGE检测，其中M表示预染蛋白质marker;图2-A为免疫印迹分析已纯化的融合多肽pS4-l到9的抗HEVIgM抗体反应，图中M表示预染蛋白质marker;图2-B为免疫印迹分析已纯化的融合多肽pSl-9到1的抗HEVIgM抗体反应，其中M表示预染蛋白质marker,—抗为抗HEVIgM抗体反应阳性的猴子免疫血清；图3-A、图3-B、图3_C和图3-D为接种了人源的1型HEV感染的猴子的系列血清测多肽的HEVIgM反应;图3-E和图3-F为接种了人源的4型HEV感染的猴子的系列血清测多肽的HEVIgM反应；图3-G、图3-H、图3_I和图3_J为接种了猪源的4型HEV感染的猴子的系列血清测多肽的HEVIgM反应;其中图3-A-J中0周为接种前，接种后依次每周采血。其抗HEVIgM抗体用ELISA方法检测，包被以下抗原1型的pSl-l，pSl-6和pSl-8，4型的pS4-l，pS4-6和pS4_8。其值使用S/CO表示，1作为阳性临界。图4-A-J分别使用1型和4型的组合抗原pSH+pSl-6和pS4-l+pS4-6，应用ELISA方法检测图3-A-J中的系列血中的抗HEVIgM反应。图5-A-C检测急性肝炎患者系列血清中的IgM抗体。检测方法是ELISA，包被抗原为1型和4型的单个抗原或组合抗原。405至lj654674aa20到90130aa;20到104144aa。具体实施例方式以下为本发明的具体实施方式，所述的实施例是为了进一步描述本发明，而不是限制本发明。实施例1本实施例涉及两个基因型HEV0RF2抗原的C末端和N末端抗原位点，其为所述pSl-6为1型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为351391到640660aa;所述pS4-6为4型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为365所述pSl-l为1型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为1所述pS4-l为4型HEV0RF2的N末端抗原，其位点为1本实施例的具体实施方案为首先从临床患者粪便样本中钓出基因，经测序分析分别属于l型和4型。经Bios皿生物软件(军事医学科学院研制开发)分析其等电点和亲水性，并根据文献(PandaSK，ThakralD，RehmanS.2007.H印atitisEVirus.Rev.Med.Viroll7:151—180.)报道，按着两个基因型对应的原则(除了N端的一对抗原外，其他的基本位置相同)将0RF2蛋白分成六段；同理，将0RF3蛋白分成三段，其具体分段位置及命名见表1。表1.重组HEV-pBVILl融合蛋白及其对抗HEV1型和4型戊型肝炎病毒抗血清的免疫反应7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>a抗HEVIgM抗体反应阳性b抗HEVIgM抗体反应阴性或者检测不到。抗HEVIgM抗体反应强阳性dl型HEV比4型HEV0RF2全长短14个氨基酸，同时，0RF3比后者长9个氨基酸。所有抗原片段都克隆进原核表达载体pBVILl(军事医学科学院构建，参见ZL00100695.9)成功进行表达(除了pS4_2，经再次克隆进pThioHis成功表达)。经常用的离子交换层析纯化并冻干。其浓度测定使用商业化BCA试剂(VigorousBiotechnologyBeijingCo丄td，Beijing,China)，纯度经常规薄层扫描确定。将冻干的蛋白用碳酸盐缓冲液以0.5mg/ml的浓度溶解，取8iU进行SDS-PAGE电泳，分别进行考马斯亮蓝染色和免疫印迹分析。其中前者结果显示所有抗原均呈现清晰条带(图l-A-C)，其分子量大小与预期一致，条带单一，即成功表达纯化后的蛋白基本无其他杂蛋白。后者WesternBlot检测，其操作过程为常规操作，将蛋白转移到硝酸纤维素膜(Hybond-CExtra,0.45ym;AmershamBiosciences,LittleChalfont，Buckinghamshire，UK)，5X脱脂牛奶的，pH7.4的PBS封闭1.5h，一抗为试验感染的猴子阳性血清的混合体，1:500稀释。二抗为碱性磷酸酶标记的山羊抗人IgM抗体(SantaCruzBiotechnology,Inc.SantaCruz，CA)。所有的孵育液均为含1X牛奶的PBST。最后NBT/BCIP(Dingguo，beijing，China)显色。结果分析显示如图2-A-B和表l。免疫印迹结果显示各段抗原和抗体的结合能力是明显不同的pSl-l，pSl-6，pSl-8，pSl-9，pS4-l，pS4-6，pS4-8和pS4_9是两个基因型中对应位置结合能力都比较强的抗原片段。其他抗原片段或者没有反应，或者反应很弱，或者两个基因型间不一致。进一步将所有的抗原片段包被ELISA板。检测的系列血清来源于十只试验感染的猴子，其中编号为JEll，JE12，JE47，JE48的猴子的攻击毒株为人源的1型HEV;JE13，JE14的攻击毒株为人源的4型HEV;JE15，JE16，JE51，JE52的攻击毒株为猪源的4型HEV。其结果显示(图3-A-J):1)两个不同基因型的0RF2的对应区域的抗原片段在检测系列血时无明显差别；2)同一基因型的0RF2的不同抗原片段有不同的抗原性，两端的PS1_1，pS4_l，pSl-6，pS4-6抗原的抗原性最佳；3)0RF2的N端和C端表现出互补性；4)两个不同基因型的0RF3的对应区域的抗原片段显示出基因型的特异性；5)0RF3的pSl_8，pS4_8抗原和IgM抗体反应性最好；6)抗0RF2抗原的抗体在系列血清中出现的时间要比抗0RF3抗原的抗体早，且持续时间短；7)在系列血清中抗pSl-l，pS4-l，pSl-6，pS4_6抗原的抗体出现时间早于转氨酶的升高。综上，本发明人选择pSl-l，pS4-l，pSl-6，pS4-6抗原作为检测抗HEVIgM抗体的最佳抗原。实施例2本实施例涉及抗原组合物，戊型肝炎的一型和四型的0RF2抗原的两端组合，即对应亚型的N端和C端组合。具体为将pSl-6的C末端与pSl-1的N末端组合或将pS4-6的C末端与pS4-l的N末端组合而成的。在实施例1的试验中，本发明人发现0RF2蛋白的N端和C端抗原在检测抗HEVIgM抗体时具有互补性，将pSl-1和pSl-6，pS4-l和pS4-6分别组合包被检测上述十只猴子的系列血清，结果显示(图4-A-J)，组合抗原的检出时间和单个看抗原的检出时间几乎一致，但是组合包被抗原后的试剂灵敏性增强，其检测阳性率是两个个体抗原的检测率的累加。例如，pSl-l和pSl-6组合后除了JE16，可以检测出其他所有的系列血中的抗体，相比之下，基于pSl-l单一抗原的试剂却又三份血清阴性，而仅以pSl-6为基础的试剂也有两份血清阴性。抗原的组合比例为基于各自单独包被的浓度l:1。实施例3本实施例涉及一种利用前述抗原组合物及其中的任何一种抗原用于间接ELISA方法检测HEVIgM抗体的试剂盒。9试验采用间接ELISA法，使用96孔聚苯乙烯板进行包被，使用pH9.6的碳酸盐缓冲液将抗原稀释成0.5mg/ml。采用梯度稀释法选择最佳包被浓度，即将欲包抗原梯度稀释进行包被，分别选取确证阳性和阴性的样品作为阳性和阴性对照，随着抗原包被浓度的减�。�其P/N值会逐渐变大，达到一个平台期，本发明人选择此时的抗原浓度作为ELISA的抗原包被浓度。选择的抗原pSl-l，pSl-6，pS4-l，pS4-6，pSl-l+pSl-6和pS4-l+pS4-6的最适包被浓度分别为0.5，2.0，0.5，2.0，0.5+2.0和0.5+2.0yg/ml，每孔加100溶液，37t:，2h，然后fC过夜，pH7.4的PBST洗涤三次后，每孔加入含20%牛血清的包被缓冲液200iU，37t:封闭2h，去除封闭液，保存于4t:备用。使用100份抗HEVIgG和IgM双阴性的献血源血清进行CUT-OFF值的确定，计算其平均值和标准差。pSl-l，pSl-6，pS4-l，pS4-6，pSl-l+pSl-6和pS4-l+pS4-6抗原包被板的平均值加标准差分别为0.241±0.071，0.359±0.123，0.345±0.097forpS4_l，0.366±0.127，0.174-/+0.055和0.251-/+0.029。当CUT-OFF值设为平均值加上3倍的标准差时所有的阴性样品呈阴性。其值大约等于每个板子的三个阴性对照的平均值依次加上0.21，0.36，0.29，0.38，0.16和0.09。进行样品检测时，使用含5X牛血清的PBST将待测样品1:10稀释，100ul/孔加入包被有抗原的微孔板中，37°C孵育30min，PBST洗涤5遍，然后每孔加入lOOulHRP标记的浓度为0.liig/ml的抗人IgM抗体，空白孔除夕卜，37t:，30min孵育后，去除液体，并用PBST洗涤5遍，加入TMB底物，37。C显色15min，在波长450nm和630nm处读取各空A值。实施例4本试验例涉及利用1型HEV0RF2的C末端抗原、位点为371_660aa的pSl_6间接ELISA方法检测HEVIgM抗体的试剂盒。本实施例所采用的方法与实施例3相同，结果显示其抗原性较佳，试剂灵敏性增强。对于1型HEV0RF2的C末端抗原、位点为351391至lj640660aa的其它pSl-6抗原片段进行了类似的试验，其结果与该实施例的结果一致。实施例5本试验例涉及利用4型HEV0RF2的N末端抗原、位点为l_124aa的pS4_l间接ELISA方法检测HEVIgM抗体的试剂盒。本实施例所采用的方法与实施例3相同，结果显示其抗原性较佳，试剂灵敏性增强。对于4型HEV0RF2的N末端抗原、位点为120到104144aa的其它pS4_l抗原片段进行了类似的试验，其结果与该实施例的结果一致。实施例6本实施例涉及一种利用间接ELISA方法检测样本中HEVIgM抗体的体外方法。本发明人使用所建立组合抗原包被的ELISA方法检测了三份临床患者系列血清，其结果见图5-A-C。以1028为例，随着转氨酶逐渐趋于正常，抗0RF3的抗体逐渐升高，达到峰值后降低，而系列血清中抗0RF2组合抗原IgM抗体随着转氨酶的降低渐渐降低，当转氨酶恢复正常时，抗体也基本检测不到。截止到检测的最后一份样品，患者血清中抗0RF2抗体和转氨酶都基本恢复正常，而抗0RF3抗体却还很强。所以，相对抗0RF3的IgM抗体，抗0RF2的抗体持续的时间短。10权利要求一种戊型肝炎病毒抗原，其特征在于所述抗原的抗原片段为pS1-6、pS4-6、pS1-1或pS4-1；所述pS1-6为1型HEVORF2的C末端抗原，其位点为351～391到640～660aa；所述pS4-6为4型HEVORF2的C末端抗原，其位点为365～405到654～674aa；所述pS1-1为1型HEVORF2的N末端抗原，其位点为1～20到90～130aa；所述pS4-1为4型HEVORF2的N末端抗原，其位点为1～20到104～144aa。2.根据权利要求1所述的戊型肝炎病毒抗原，其特征在于所述pSl-6为1型HEVORF2的C末端抗原，其位点为371660aa;所述pS4-6为4型HEV0RF2的C末端抗原，其位点为385674aa;所述pSl-l为1型HEVORF2的N末端抗原，其位点为1110aa所述pS4-l为4型HEVORF2的N末端抗原，其位点为1124aa。3.—种戊型肝炎病毒抗原组合物，其特征在于所述的抗原组合物为将pSl-6的C末端和pSl-l的N末端组合、pS4-6的C末端和pS4-l的N末端组合、pSl-6的C末端与pS4-l的N末端组合或pSl-l的N末端与pS4-6的C末端组合。4.根据权利要求3所述的戊型肝炎病毒抗原组合物，其特征在于所述的抗原组合物为将pSl-6的C末端与pSl-l的N末端组合或将pS4-6的C末端与pS4-l的N末端组合而成的。5.—种检测戊型肝炎病毒IgM抗体的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒含有权利要求1所述的任一抗原或权利要求3所述的任一抗原组合物。6.权利要求1或2所述的抗原在检测戊型肝炎病毒抗体中的应用。7.权利要求3或4所述的抗原组合物在检测戊型肝炎病毒抗体中的应用。全文摘要本发明涉及一种戊型肝炎病毒抗原，该抗原的抗原片段为pS1-6、pS4-6、pS1-1或pS4-1；pS1-6为1型HEVORF2的C末端抗原，位点为351～391到640～660aa；pS4-6为4型HEVORF2的C末端抗原，位点为365～405到654～674aa；pS1-1为1型HEVORF2的N末端抗原，位点为1～20到90～130aa；pS4-1为4型HEVORF2的N末端抗原，位点为1～20到104～144aa。本发明还涉及含有所述抗原的组合物及其含有所述任一抗原或抗原组合物的试剂盒以及在检测戊型肝炎病毒抗体中的应用。本发明所提供的戊型肝炎病毒抗原其抗原性强、特异性强；本发明所提供的试剂盒和应用可尽早检测样品中出现的抗HEVIgM抗体，从而实现在HEV感染的早期进行准确检测诊断。文档编号G01N33/53GK101735311SQ20081022731公开日2010年6月16日申请日期2008年11月26日优先权日2008年11月26日发明者宋晓国,张贺秋,王佑春,马红霞申请人:中国药品生物制品标准化研究中心;中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所