专利名称：一种灵芝醇提物的质量控制方法
技术领域：
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种灵芝醇提物的质量控制方法。
背景技术：
灵芝为多孔菌科真菌赤芝fefloofe/ma lucidum (Leyss. ex Fr. ) Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang 或松杉灵芝 fefloofe/ma tsugae Murr.的干燥子实体，具有补气安神、止咳平喘等功效。研究表明，灵芝中主要含有多糖、三萜、核苷、生物碱、黄酮、氨基酸及微量元素等多种化学成分，具有抗肿瘤、免疫调节、护肝、抗氧化、降压、降血脂等功能。目前，药理活性研究主要集中在灵芝多糖和灵芝三萜类成分，特别是对灵芝三萜药理研究报告较多，因此，三萜类成分作为灵芝的主要功效成分之一，很有必要对其含量进行测定。目前，灵芝醇提物的质量控制大多用紫外分光光度法测定总三萜含量，该方法 常出现假阳性，专属性差。高效液相色谱法特异性强，可达到鉴别和质量控制的目的。本发明采用高效液相色谱法分离并建立了灵芝醇提物中灵芝酸八3、(2的含量测定方法，并以灵芝酸A、B、C2的总量作为质控指标，为灵芝醇提物的质量控制提供了参考依据。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵芝醇提物的质量控制方法，将灵芝醇提物中的灵芝酸a、b、c2含量之和作为质量控制指标。赤芝、紫芝及松杉灵芝均含有相对含量较高的特征成分灵芝酸A、B、C2。对比目前常用的比色法测定总三萜含量的方法，特异性强，可达到鉴别和质量控制的目的。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案
一种灵芝醇提物的质量控制方法，其特征在于将灵芝醇提物中的灵芝酸A、B、C2含量之和作为质量控制指标;
灵芝醇提物以甲醇作为溶剂，超声提�。橹ニ酇、灵芝酸B经高效液相色谱柱C8分离；灵芝酸C2经高效液相色谱柱C18分离，分别用二极管阵列检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，峰面积外标法定量，分别测定试样中灵芝酸A、B和灵芝酸C2的含量，并计算其总量。灵芝酸A、B测定的色谱条件以辛烷基键合硅胶为键合相(色谱柱AgilentZorbax-SB C8,150 mm X 4. 6 mm, 3. 5 U m或同规格色谱柱)，乙腈为流动相A,体积分数为
0.1%的醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为257 nm ;柱温为22 °CV流速为I. 0ml/min ;理论板数按灵芝酸A计算不低于5000 ；
对照品溶液的制备取减压干燥至恒重的灵芝酸A、B对照品，加甲醇制成每Iml含20V- g灵芝酸A和每Iml含15 ii g灵芝酸B的混标溶液；
供试品溶液的制备取灵芝醇提物0. 2g，置IOOml容量瓶中，加甲醇超声处理25min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 Ul，注入液相色谱仪，测定，用主峰保留时间定性，峰面积定量。灵芝酸C2测定的色谱条件以十八烷基键合硅胶为键合相(色谱柱=AgilentZorbax-SB C18, 250 mm X 4. 6 mm, 5 U m或同规格色谱柱)，乙腈为流动相A,体积分数为
0.1%的醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为257 nm ;柱温为20 °CV流速为I. 0ml/min ;理论板数按灵芝酸C2计算不低于5000 ；
对照品溶液的制备取减压干燥至恒重的灵芝酸C2对照品，加甲醇制成每Iml含10 yg灵芝fe C2的对照品溶液；
供试品溶液的制备取灵芝醇提物0. 2g，置IOOml容量瓶中，加甲醇超声处理25min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过；
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20 Ul，注入液相色谱仪，测定，用主峰保留时间定性，峰面积定量。
·
灵芝醇提物的制法灵芝经粉碎成粗颗粒,加8-10倍量质量分数为90%的乙醇溶液浸泡2-5小时，70°C _80°C加热2小时，过滤，再加8_10倍量的质量分数为90%的乙醇溶液，70°C-80°C加热2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩回收乙醇，待浓缩至近干时，测定总固体含量，需要时，加适量辅料，混合均匀后干燥至水分低于5%，粉碎过筛即得；赤芝、紫芝符合《中华人民共和国药典》2010年版一部规定,松杉灵芝rfefloofe/ma tsugae Murr.」符合说明书中具体实施方式
I. 2的要求。本发明的有益效果在于赤芝、紫芝及松杉灵芝均含有相对含量较高的功效成分灵芝酸A、B、C2。对比目前常用的比色法测定总三萜含量的方法，特异性强，可达到鉴别和质量控制的目的。
图I是灵芝酸A、B混标溶液色谱图。峰I :灵芝酸B ;峰2 :灵芝酸A。图2是供试品溶液色谱图。峰I :灵芝酸B ;峰2 :灵芝酸A。图3是灵芝酸C2对照品溶液色谱图。峰3 :灵芝酸C2。图4是供试品溶液色谱图。峰3 :灵芝酸C2。
具体实施例方式I、原料要求
I)赤芝、紫芝应符合《中华人民共和国药典》2010年版一部规定。2)松杉灵芝应符合以下规定
范围原料要求适合于松杉灵芝tsugae Murr.彡子实体。表I感官要求
权利要求
1.一种灵芝醇提物的质量控制方法，其特征在于将灵芝醇提物中的灵芝酸々』、(:2含量之和作为质量控制指标； 灵芝醇提物以甲醇作为溶剂，超声提�。橹ニ酇、灵芝酸B经高效液相色谱柱C8分离，灵芝酸C2经高效液相色谱柱C18分离，分别用二极管阵列检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，峰面积外标法定量，分别测定试样中灵芝酸A、B和灵芝酸C2的含量，并计算其总量。
2.根据权利要求I所述的灵芝醇提物的质量控制方法，其特征在于 (1)灵芝酸A、B测定的色谱条件以辛烷基键合硅胶为键合相，乙腈为流动相A，体积分数为0.1 %的醋酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为257 nm;柱温为22 °Cr流速为I. 0 ml/min ;理论板数按灵芝酸A计算不低于5000 ； (2)对照品溶液的制备取减压干燥至恒重的灵芝酸A、B对照品，加甲醇制成每Iml含20 Ug灵芝酸A和每Iml含15 Ug灵芝酸B的混标溶液； (3)供试品溶液的制备取灵芝醇提物0.2 g，置100 ml容量瓶中，加甲醇超声处理25min,放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过； (4)测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20Ul，注入液相色谱仪，测定，用主峰保留时间定性，峰面积定量。
3.根据权利要求I所述的灵芝醇提物的质量控制方法，其特征在于 (1)灵芝酸C2测定的色谱条件以十八烷基键合硅胶为键合相，乙腈为流动相A，体积分数为0. I %的醋酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱；检测波长为257 nm ;柱温为20 °C;流速为I. 0 ml/min ;理论板数按灵芝酸C2计算不低于5000 ； (2)对照品溶液的制备取减压干燥至恒重的灵芝酸C2对照品，加甲醇制成每Iml含10 Ug灵芝酸C2的对照品溶液； (3)供试品溶液的制备取灵芝醇提物0.2 g，置100 ml容量瓶中，加甲醇超声处理25min,放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过； (4)测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20Ul，注入液相色谱仪，测定，用主峰保留时间定性，峰面积定量。
4.根据权利要求1、2或3所述的灵芝醇提物的质量控制方法，其特征在于灵芝醇提物的制法灵芝经粉碎成粗颗粒，加8-10倍量质量分数为90%的乙醇溶液浸泡2-5小时，700C _80°C加热2小时，过滤，再加8-10倍量的质量分数为90%的乙醇溶液，70°C _80°C加热2小时，过滤，合并两次滤液，浓缩回收乙醇，待浓缩至近干时，测定总固体含量，需要时，加适量辅料，混合均匀后干燥至水分低于5%，粉碎过筛即得。
5.根据权利要求I所述的灵芝醇提物的质量控制方法，其特征在于灵芝酸々、8、(2含量之和，以干燥品计，赤芝、松杉灵芝醇提物> 11. 4 mg/g，紫芝醇提物> 2. 2 mg/g。
全文摘要
本发明公开了一种灵芝醇提物的质量控制方法，将灵芝醇提物中的灵芝酸A、B、C2含量之和作为质量控制指标；灵芝醇提物以甲醇作为溶剂，超声提�。橹ニ酇、灵芝酸B经高效液相色谱柱C8分离；灵芝酸C2经高效液相色谱柱C18分离，分别用二极管阵列检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，峰面积外标法定量，分别测定试样中灵芝酸A、B和灵芝酸C2的含量，并计算其总量。赤芝、紫芝及松杉灵芝均含有相对含量较高的特征成分灵芝酸A、B、C2。对比目前常用的比色法测定总三萜含量的方法，特异性强，可达到鉴别和质量控制的目的。
文档编号G01N30/06GK102721764SQ20121022272
公开日2012年10月10日 申请日期2012年7月2日 优先权日2012年7月2日
发明者卢端萍, 吴长辉, 李晔, 王勇, 范明, 蒋婷婷, 陈硕 申请人:福建仙芝楼生物科技有限公司, 福建省药品检验所
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