专利名称：一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检测方法
技术领域：
本发明涉及一种药物检测方法，特别涉及一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的有关物质检测方法。具体的讲是一种新的采用UPLC仪器的方法检测亚硫酸氢钠穿心莲内酯有关物质的方法。
背景技术：
亚硫酸氢钠穿心莲内酯为一种抗菌消炎药物，其制剂的名称为莲必治注射液，已有产品上市销售。现有亚硫酸氢钠穿心莲内酯的质量标准无有关物质测定方法。中国新药杂志2005年14卷7期中报道了一种用HPLC检测亚硫酸氢钠穿心莲内酯有关物质的方法，若采用该方法检测并使用DAD检测器进行全波长扫描，可发现其主峰的峰纯度不高，显示有杂质峰包含在主峰内，因此，采用文献已报道的有关物质测定方法检测，结果不准确。同时，文献报道的方法检测时间较长。所述的有关物质即亚硫酸氢钠穿心莲内酯制备过程中残留在成品中的类似物，异构体，中间体等杂质成分，一般难以分离除去，也难以通过常规方法检测到，为控制产品质量，提高产品纯度，检测有关物质的含量和分离去除有关物质是必要的，因此本发明在于寻找一种快速，准确，适合工业化的检测方法。本发明经过筛�。业揭恢至槊舳雀�、杂质和主成分亚硫酸氢钠穿心莲内酯的分离度高的高效液相色谱检测法，和现有技术相比，操作简单，重现性好，峰纯度高，准确度高，检测时间短，为亚硫酸氢钠穿心莲内酯后续的一些研究工作开展创造有利条件。
发明内容
本发明提供一种灵敏度高，杂质和主成分亚硫酸氢钠穿心莲内酯的分离度高的亚硫酸氢钠穿心莲内酯的含量测定方法，该方法采用超高效液相色谱法，具体包括以下步骤步骤1，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液；步骤2，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液；步骤3，将上述溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；步骤4，根据色谱图计算亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品的有关物质的含量。其中的色谱条件为色谱柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um粒径，
2.lmm*50mm，柱温 20°C _50°C，流动相 A 相0. 001-0. 2mol/L 磷酸二氢钾和 O. 01-0. lmol/L四丁基硫酸氢铵溶液相甲醇，两者体积比例为A相55-95 B相45_5，优选A相60-70 B相40-30，最优选A相68 B相32，梯度方式为恒流，检测波长220nm，流速O. 5ml/min ；优选的色谱条件为柱温40°C，流动相A相0. 01-0. 05mol/L磷酸二氢钾和O. 03-0. 08mol/L四丁基硫酸氢铵溶液；两者体积比例为A相60-70 B相40-30，检测波长220nm，更优选的色谱条件为柱温40°C，流动相A相0.02mol/L磷酸二氢钾和0. 05m0l/L四丁基硫酸氢铵溶液；两者体积比例为A相68 B相32，检测波长220nm。其中步骤I所述的供试品溶液的配制方法如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，加水制成0. 01-10mg/ml的溶液。优选的，配制成0. l-4mg/ml的溶液，更优选的是0. 5-3mg/ml的溶液,最优选的是2mg/ml的溶液。其中步骤2所述的对照品溶液的配制方法如下精密量取亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液，加水制成0. 005-2mg/ml的溶液；优选的，配制成0. Ο1-lmg/ml的溶液，更优选的是0. 02-0. 5mg/ml的溶液，最优选的是0. 02mg/ml的溶液。其中步骤3，吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，进样量10μ 1，本发明所述亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药样品为工业化生产得到的未知有关物质的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药产品。通过以上方法得到对照品和供试品的色谱图，用峰面积自身对照法可以计算出样品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的有关物质的含量，计算公式如下(供试品总峰面积一供试品主峰面积)+对照品主峰面积X100%以上公式中主峰系指亚硫酸氢钠穿心莲内酯峰。本发明的有关物质测定方法是经过对色谱条件的充分摸索和筛选得到的，属于最优选的方法。以下的一些试验可以表明本发明上述的检测方法的可行性、准确性和可靠性。一 检测波长的选择取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，加水溶解制成约2 mg/ml的供试品溶液，按照上述方法进行测定，并采用DAD检测器进行全波长扫描。 检测图谱表明，亚硫酸氢钠穿心莲内酯及其有关物质在检测波长220nm处有最大吸收。因此，选定220nm为检测波长。二 系统适用性取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，加水溶解制成约2 mg/ml的供试品溶液，按照上述方法进行测定。各成分峰的理论塔板数大于2000，符合要求；均达到基线分离，符合要求；拖尾因子在0. 8-1. 2之间，符合要求。该方法的系统适用性符合要求。三专属性取配制供试品溶液的纯水，按照上述色谱条件进行测定，记录图谱，如
图1。取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，加水溶解，在沸水浴中保温2小时，取出冷却，加水稀释制成约2 mg/ml的供试品溶液，按照上述色谱条件进行测定，记录图谱，如图2。取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，加入2m0l/L的盐酸适量溶解，在沸水浴中保温2小时，取出冷却，用2m0l/L的氢氧化钠溶液调节PH至接近中性，加水稀释制成约2 mg/ml的供试品溶液，过滤，按照上述色谱条件进行测定，记录图谱，如图3。取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，加入2m0l/L的氢氧化钠适量溶解，在沸水浴中保温2小时，取出冷却，用2m0l/L的盐酸调节PH至接近中性，加水稀释制成约2 mg/ml的供试品溶液，过滤，按照上述色谱条件进行测定，记录图谱，如图4。取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，加入3%的过氧化氢适量溶解，在沸水浴中保温2小时，取出冷却，加水稀释制成约2 mg/ml的供试品溶液，过滤，按照上述色谱条件进行测定，记录图谱，如图5。观察上述图谱，如图1，空白对照无干扰；如图2 图5，主峰与杂质峰达到基线分离，专属性符合要求。四检测限取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯原料药适量，加水稀释至很小浓度，进样检测，取信噪比为约3:1时样品的浓度为检测限，如图6，此时主峰信噪比为3. 4，进样浓度为O. 5ng/ml，最低检测浓度为约O. 5 ng/ml。中国新药杂志2005年14卷7期890页“亚硫酸氢钠穿心莲内酯的有关物质测定的方法学研究”中报道的最低检测浓度为O. 4ug/ ml。很明显，本方法的灵敏度大大优于文献报道的方法。五线性关系试验取恒重后的亚硫酸 氢钠穿心莲内酯原料药适量，加水溶解制成约2 mg/ml的供试品溶液，作为忙备液，分别用 流动相稀释至O. 16mg/ml、0. 18mg/ml、0. 19mg/ml、0. 20mg/ml、
0.22mg/ml、0. 24mg/ml，分别按照上述方法进行测定，根据测定得到的结果，以浓度为X轴、主峰面积为Y轴，进行线性回归分析。浓度及峰面积如表1，标准曲线、线性回归方程及R2见图7表1:线性关系试验结果
权利要求
1.一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的检测方法，采用超高效液相色谱法，其特征在于，该方法包括以下步骤 步骤1，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液； 步骤2，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液； 步骤3，将上述溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图； 步骤4，根据色谱图计算亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品中有关物质的含量， 其中的色谱条件为色谱柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um粒径，2. lmm*50mm，柱温 20°C _50°C，流动相 A 相0. 001-0. 2mol/L 磷酸二氢钾和 O. 01-0. lmol/L四丁基硫酸氢铵溶液相甲醇，两者体积比例为A相55-95 B相45-5，梯度洗脱方式为恒流，检测波长220nm,流速O. 5ml/min。
2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤I所述的供试品溶液的配制方法如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，加水制成O. 01-10mg/ml的溶液，其中步骤2所述的对照品溶液的配制方法如下精密量取亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液，加水制成O. 005-2mg/ml的溶液，
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤I所述的供试品溶液的配制方法如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，加水制成O. 5-3mg/ml的溶液，其中步骤2所述的对照品溶液的配制方法如下精密量取亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液，加水制成O. 02-0. 5mg/ml的溶液。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤I所述的供试品溶液的配制方法如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，加水制成2mg/ml的溶液，其中步骤2所述的对照品溶液的配制方法如下精密量取亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液，力口水制成O. 02mg/ml的溶液。
5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中步骤3所述吸取供试品和对照品溶液，注入液相色谱仪检测，其中的进样量为10μ I。
6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，其中色谱条件为色谱柱watersAcquity UPLC BEH C18 柱，1. 7um粒径，2.柱温40°C,流动相 A相:0. 01—0. 05mol/L磷酸二氢钾和O. 03-0. 08mol/L四丁基硫酸氢铵溶液；两者体积比例为A相60-70 B相40-30，检测波长220nm。
7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，其中色谱条件为色谱柱:watersAcquity UPLC BEH C18 柱，1. 7um 粒径，2.柱温 40°C,流动相 A 相O. 02mol/L磷酸二氢钾和O. 05mol/L四丁基硫酸氢铵溶液；两者体积比例为A相68 B相32，检测波长220nm。
8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，加水制成lmg/ml的溶液，作为供试品溶液；精密量取亚硫酸氢钠穿心连内酷供试品溶液，加水制成O. O lmg/ml的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，进样量10 μ 1，色谱柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um 粒径,2. lmm*50mm,柱温 40°C,流动相 A 相O. 03mol/L 磷酸二氢钾和 O. 04mol/L四丁基硫酸氢铵溶液；两者体积比例为A相65 :B相35，检测波长220nm，峰面积自身对照法可以计算出样品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的有关物质的含量。
9.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤如下精密称取恒重后的亚硫酸氢钠穿心莲内酯样品，加水制成2mg/ml的溶液，作为供试品溶液；精密量取亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液，加水制成O. 02mg/ml的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品和对照品溶液各适量，注入液相色谱仪检测，进样量10μ 1，色谱柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um 粒径,2. lmm*50mm,柱温 40°C，流动相 A 相:O. 02mol/L 磷酸二氢钾和 O. 05mol/L四丁基硫酸氢铵溶液；两者体积比例为A相68 :B相32，检测波长220nm，峰面积自身对照法可以计算出样品中亚硫酸氢钠穿心莲内酯的有关物质的含量。
全文摘要
本发明涉及一种亚硫酸氢钠穿心莲内酯的有关物质检测方法，步骤如下步骤1，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品溶液；步骤2，配制亚硫酸氢钠穿心莲内酯对照品溶液；步骤3，将上述溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图；步骤4，根据色谱图计算亚硫酸氢钠穿心莲内酯供试品中有关物质的含量。
文档编号G01N30/02GK103063772SQ20121057422
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月25日 优先权日2012年12月25日
发明者吴凌云, 朱音, 姜迎庆 申请人:无锡济民可信山禾药业股份有限公司, 江西济民可信金水宝制药有限公司
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