专利名称：测定糖化血清蛋白的试剂盒的制作方法
测定糖化血清蛋白的试剂盒本发明涉及ー种医药试剂，具体涉及ー种测定糖化血清蛋白的试剂盒。糖化血清蛋白(GSP)是临床上血糖监测的指标之一，对于评价糖尿病患者近期血糖控制情况及反映短期内血糖水平的变化具有较高的临床价值。人体中葡萄糖与蛋白质发生非酶糖化反应即形成糖化蛋白。糖化血红蛋白(HbAlc)是血液中葡萄糖与红细胞内的血红蛋白在其生命的120天内非酶促反应形成的ー种糖蛋白，故可反映測定前2 3个月内患者的总体血糖水平，是国际上评价长期血糖控制的金标准，因血红蛋白半衰期长，其測定值难以反映患者近期血糖水平；糖化血清蛋白(GSP)是血清蛋白(主要是白蛋白)与葡萄糖发生非酶促反应的产物，由于白蛋白的半衰期为17 19天，故其值能反映測定前2 3周血糖的平均水平，是目前临床上用来判断短期血糖控制的指标。早在上世纪80年代，日本学者就研发了高压液相离子交換法(HPLC法)进行糖化血清蛋白的測定。HPLC法測定糖化血清蛋白可准确检测患者短期内血糖控制的总体水平，但当时由于其代价高昂，处理样本量�。皇室肆俅渤９婵苟吹玫焦惴河τ�。本发明为了克服现有技术的不足，提供了一种简单、快速、灵敏、准确定量的检测试剂，其检测具有良好的稀释直线性、准确度、精密度，并与HPLC检测法有良好的一致性。为了实现上述目的，本发明设计了ー种测定糖化血清蛋白的试剂盒，包括试剂Rl和试剂R2，其中试剂R1，包括缓冲液20mmol/L;表面活性剤，占试剂Rl的0. 5 % ;抗干扰物0. 05-0. lmmol/L ;稳定剂 0. 5-lg/L ;防腐剤 0. 05g/L ；试剂R2，包括果糖氨基酸氧化酶20mmol/L ;辣根过氧化酶20KU/L ;色原0. Immol/L ;防腐剤 0. 05g/L ;稳定剂 0. 5-lg/L。所述的试剂Rl中，缓冲液为MES缓冲液或磷酸钾缓冲液，PH值为5. 5-8. 5。所述的试剂Rl中，表面活性剂为TritonX-100、Tween-20或Bri j35中的ー种。所述的试剂Rl中，抗干扰物为高碘酸钠或亚铁氰化钾。所述的试剂Rl中，稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金属离子中的ー种。所述的试剂Rl中，防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素或氯霉素中的ー种。所述的试剂R2中，色原为DA-64。所述的试剂R2中，防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素或氯霉素中的ー种。 所述的试剂R2中，稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金属离子中的ー种。
本发明同现技术相比，采用本发明的糖化血清蛋白測定试剂盒，酶法測定糖化血清蛋白，完全可以替代HPLC应用于临床实验室进行大批量样本的測定，其操作简便，线性范围宽，成本低，具有很高的应用价值。图I为本发明试剂盒和HPLC測定糖化血清蛋白的相关性分析曲线。图2为本发明试剂盒測定糖化血清蛋白的线性范围。下面结合附图
对本发明作进ー步描述。实施例I :
试剂Rl包括以下组分MES 缓冲液20mmol/L ；TritonX-100 (表面活性剂)占试剂Rl的0. 5% ;高碘酸钠(抗干扰物)0. 05mmol/L ；蛋白酶K20KU/L ；海藻糖(稳定剂)lg/L ；叠氮化钠(防腐剂)0. 05g/L ；试剂R2包括以下组分磷酸钾缓冲液20mmol/L ；果糖氨基酸氧化酶(FAOD)10KU/L ；辣根过氧化物酶(HRP)20KU/L ；色原(DA-64)0. lmmol/L ；庆大霉素(防腐剂)0. 05g/L ；海藻糖(稳定剂)lg/L ；用上述试剂盒測定新鮮的病人样本中糖化血清蛋白(GSP)的含量，在日立7170生化分析仪上进行检测，測定參数如下分析方法两点终点法；测定温度37°C ;比色杯光径I. Ocm ;波长700nm (主)/800nm (副)；样品量20ul;试剂 Rl 200ul ;试剂 R2 50ul ；反应方向上升；反应时间IOmin測定操作步骤如下表
权利要求
1.一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，包括试剂Rl和试剂R2，其中 试剂R1，包括缓冲液20mmol/L ;表面活性剂，占试剂Rl的0. 5 % ;抗干扰物0.05-0. lmmol/L ;稳定剂 0. 5-lg/L ;防腐剤 0. 05g/L ； 试剂R2，包括果糖氨基酸氧化酶20mmol/L ;辣根过氧化酶20KU/L ;色原0. lmmol/L ;防腐剂 0. 05g/L ;稳定剂 0. 5-lg/L。
2.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂Rl中，缓冲液为MES缓冲液或磷酸钾缓冲液，PH值为5. 5-8. 5。
3.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂Rl中，表面活性剂为TritonX-100、Tween-20或Bri j35中的ー种。
4.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂Rl中，抗干扰物为高碘酸钠或亚铁氰化钾。
5.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在干，所述的试剂Rl中，稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金属离子中的ー种。
6.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂Rl中，防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素或氯霉素中的ー种。
7.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂R2中，色原为DA-64。
8.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂R2中，防腐剂为叠氮化钠、庆大霉素或氯霉素中的ー种。
9.根据权利要求I所述的測定糖化血清蛋白的试剂盒，其特征在于，所述的试剂R2中，稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、甘露醇、氨基酸或金属离子中的ー种。
全文摘要
本发明涉及一种医药试剂，具体涉及一种测定糖化血清蛋白的试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中试剂R1，包括缓冲液20mmol/L；表面活性剂，占试剂R1的0.5％；抗干扰物0.05-0.1mmol/L；稳定剂0.5-1g/L；防腐剂0.05g/L。试剂R2，包括果糖氨基酸氧化酶20mmol/L；辣根过氧化酶20KU/L；色原0.1mmol/L；防腐剂0.05g/L；稳定剂0.5-1g/L。本发明同现技术相比，采用本发明的糖化血清蛋白测定试剂盒，酶法测定糖化血清蛋白，完全可以替代HPLC应用于临床实验室进行大批量样本的测定，其操作简便，线性范围宽，成本低，具有很高的应用价值。
文档编号G01N21/31GK102650591SQ20121009953
公开日2012年8月29日 申请日期2012年4月6日 优先权日2012年4月6日
发明者孙明礼, 李子樵 申请人:上海蓝怡科技有限公司
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