专利名称：一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器。具体是采用银杂化的多壁碳纳米管复合材料和咪唑盐类离子液体，构建一种检测大肠杆菌0157:H7的无标记型电化学免疫传感器，属于纳米功能材料、生物传感和环境监测技术领域。
背景技术：
大肠杆菌是与我们日常生活关系非常密切的一类细菌，属于肠道杆菌大类中的一种。其中，肠出血性大肠杆菌0157:H7是一种新出现的食物传播性疾病的病因。它除了引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。因此，建立一种灵敏、特异、快速的检测大肠杆菌0157:H7的方法意义重大。检测大肠杆菌0157:H7的方法有鉴别培养检测方法、分子生物学方法和免疫学检测方法。其特点如下。( I)鉴别培养检测方法，操作简单、成本低，但检测速度较慢，影响对该病原菌的及时防治。(2)分子生物学方法是一种快速的检测方法，以PCR为主的现代分子生物学方法经不断改进，其检测的准确率和速度都有所提高，但耗资较大，未得到广泛应用。(3)免疫学检测方法包括免疫磁珠富集法、酶联免疫吸附分析法、胶体金免疫层析法、免疫传感器、免疫卡片等，并且免疫反应具有特异性高、灵敏度高等特点。使用丝网印刷电极构建的免疫传感器对大肠杆菌0157:H7进行检测，与其它免疫方法相比，具有成本低、快速方便等优势。本实用新型设计了一种低成本、简单、快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器。
实用新型内容本实用新型所采用的技术方案是:一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器，包括PET基板，PET基板上设置有工作电极、辅助电极和参比电极，工作电极、辅助电极和参比电极与相应的电极触点通过银浆导线连接，PET基板上印刷有绝缘浆使工作电极区域有一圆形凹槽。本实用新型中，工作电极和辅助电极为碳浆制成。本实用新型中，参比电极为银浆制成。本实用新型与现有技术相比，丝网印刷电极具有制备简单、加工方便以及成本低等特点，用该丝网印刷电极制备的传感器检测方法简单，具有较高的灵敏度和特异性，可实现对大肠杆菌0157:H7的快速测定。
图1是丝网印刷电极示意图。[0013]标号说明:1.PET基板，2.工作电极，3.辅助电极，4.参比电极，5.触点，6.绝缘浆，7.圆形凹槽。
具体实施方式
以下结合附图和实施例进一步说明本实用新型。实施例1本实用新型所述的丝网印刷电极的制备，参见图1，包括如下步骤。(I)清洗PET基板I，干燥后在基板上印刷碳浆，制成工作电极2及辅助电极3，常
温干燥。(2)在基板上印刷银浆，制成参比电极4，并各电极与相应触点5用银浆连接起来，
常温干燥。·(3)在基板上印刷绝缘浆6，将导线覆盖，干燥后，再印刷一层绝缘浆有机涂层，在工作电极区域形成一个圆形凹槽7，干燥保存。(4)将丝网印刷电极在含有0.1 mol/L氯化钾的磷酸盐缓冲溶液中在+1.7 V下电化学处理5 min,晾干备用。实施例2本实用新型制备的检测大肠杆菌的免疫传感器，用于检测大肠杆菌0157:H7，步骤如下。(I)在上述制备的印刷电极的工作电极区域滴涂IOPL浓度为5 mg/mL银杂化的多壁碳纳米管(Ag-MCNT)的1-丁基-3甲基咪唑六氟磷酸盐离子液体混合液，保存至干燥。(2)在步骤(I)得到的工作电极表面滴涂6 PL浓度为lOPg/mL的大肠杆菌0157:Η7抗体，4 °C冰箱中保存至干燥。(3)在步骤(2)得到的工作电极表面滴涂3 μ 质量分数为1% BSA，用于封闭非特异性活性位点，4 °C冰箱中保存至干燥，超纯水清洗，晾干成膜，将其保存在4 °C的冰箱中。(4)在步骤(3)得到的工作电极表面滴涂6μ 浓度梯度的大肠杆菌0157:Η7抗原，4 °C冰箱中保存至干燥。(5)在步骤(4)得到的工作电极表面滴涂200μ 浓度为5 mmol/L铁氰化钾溶液，将该印刷电极与电化学工作站连接，利用循环伏安法对大肠杆菌0157:H7进行测定。
权利要求1.一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器，其特征在于:包括PET基板Cl), PET基板(I)上设置有工作电极(2)、辅助电极(3)和参比电极(4)，工作电极(2)、辅助电极(3 )和参比电极(4)与相应的电极触点(5 )通过银浆连接，PET基板(I)上印刷有绝缘浆(6)，使工作电极(2)区域有一圆形凹槽(7)。
2.根据权利要求1所述快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器，其特征在于:工作电极(2)和辅助电极(3)为碳浆制成。
3.根据权利要求1或2所述快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器，其特征在于:参比电极(4)为银浆制成。
专利摘要本实用新型涉及一种快速测定大肠杆菌的丝网印刷电极免疫传感器。该传感器的丝网印刷是在聚对苯二甲酸二乙酯(PET)电极基板上依次印刷碳浆、银浆和绝缘浆。该工作电极的表层滴涂10μL浓度为5mg/mL银杂化的多壁碳纳米管(Ag-MCNT)的1-丁基-3甲基咪唑六氟磷酸盐离子液体混合液和6μL浓度为10μg/mL的大肠杆菌O157:H7抗体。以银杂化的多壁碳纳米管复合材料和离子液体作为电极修饰材料，显著提高了传感器的检测灵敏度。本实用新型的优点是提供了一种简单、快速、灵敏的检测大肠杆菌O157:H7的方法，显著降低大肠杆菌检测费用。
文档编号G01N33/569GK202994717SQ20122036825
公开日2013年6月12日 申请日期2012年7月28日 优先权日2012年7月28日
发明者魏琴, 李贺, 李小建, 张勇, 吴丹, 朱宝存, 杜斌, 于海琴, 辛晓东, 闫良国, 孙蒙, 马洪敏, 李燕, 庞雪辉, 曹伟, 张永芳 申请人:济南大学
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