专利名称：一种改良的总氧自由基清除能力测定方法
技术领域：
本发明涉及一种改良的总氧自由基清除能力测定方法。
背景技术：
总氧自由基清除能力(TOSC)是医学或生物科学实验中常用的一项检测指标，因其操作简单，反应灵敏，可行性佳，重现性好且能综合全面反映抗氧化能力的变化等特有的优势，已受到众多国内外学者的重视。其主要原理是2，2’-偶氮-双(2-眯基丙烷)二盐酸盐(ABAP)在加热条件下产生自由基，而4-甲硫基-2-丁酮酸(KMBA)在自由基作用下可氧化产生乙烯，若有抗氧化剂的存在，则可与KMBA竞争结合自由基，从而使乙烯的产量减少。根据有无抗氧化剂存在时乙烯量的变化，可计算所测样品中存在的抗氧化剂总量，从而判断氧化系统的总体情况。由于ABAP在加热条件下可产生自由基，而KMBA在自由基作用下可氧化产生乙烯，若有抗氧化剂的存在，则可与KMBA竞争结合自由基，从而使乙烯的产量减少。因此，根据乙烯量的变化，可计算所测样品中存在的抗氧化剂总量，从而判断氧化系统的总体情况。但该检测方法也存在一些不足如在现有的操作流程中没有说明具体的反应时间。
发明内容
本发明在多次实验探索的基础上，对TOSC测定方法进行了改进，主要是对几个关键反应时间进行了定量，使该文法可操作性更强。
技术方案下面以小鼠肝脏总氧自由基清除能力测定为例对本发明的技术方案进行说明
1.在10ml顶空瓶内分别加入0.2mmol/L的KMBA0.8ml，组织匀浆上清液0.1ml；2.密封瓶盖；3.用1ml注射器穿透瓶盖向内注入0.2mol/L的ABAP 0.1ml；4.置于35℃水浴中恒温振荡1小时；5.用1ml微量进样器抽取0.6ml瓶顶液上气进行检测；6.根据上述公式计算TOSC，并根据蛋白量计算TOSC/mg。
技术特征对操作流程中的主要步骤进行严格的时间定量。
1.每样品置于恒温水浴的操作间隔为2分钟。
2.反映1小时后按次序对水浴样品进行抽气检测，同时上述的加样水浴步骤仍可继续进行本发明的主要益处1.水浴1小时，各物质的反应充分而彻底。
2.每样品间隔2分钟，使操作人员在一定时间内完成最大量的样品检测。
3.每个反应体系不需要终止反应，达到反应时间后立即抽气检测。
4.各反应体系的平衡减小了系统误差。
权利要求
1.一种改良的总氧自由基清除能力测定方法。其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行(以小鼠肝脏总氧自由基清除能力测定为例)1).在10ml顶空瓶内分别加入0.2mmol/L的KMBA(用0.1mol/L pH 7.4的磷酸缓冲液配置0.8ml，组织匀浆上清液0.1ml；2).密封瓶盖；3).用1ml注射器穿透瓶盖向内注入0.2mol/L的ABAP 0.1ml4).置于35℃水浴中恒温振荡1小时；5).用1ml微量进样器抽取0.6ml瓶顶液上气进行检测；6).根据上述公式计算TOSC，并根据蛋白量计算TOSC/mg。
2.根据权利要求1所述的一种改良的总氧自由基清除能力测定方法，其特征在于每样品置于恒温水浴的操作间隔为2分钟。
3.根据权利要求1所述的一种改良的总氧自由基清除能力测定方法，其特征在于水浴时间为1小时，各物质的反应充分而彻底。
全文摘要
一种改良的总氧自由基清除能力测定方法。在10ml顶空瓶内分别加入0.2mmol/L的KMBA 0.8ml，组织匀浆上清液0.1ml；用1ml注射器穿透瓶盖向内注入0.2mol/L的ABAP 0.1ml；置于35℃水浴中恒温振荡1h；用1ml微量进样器抽取0.6ml瓶顶液上气进行检测。本发明各物质的反应充分而彻底；每样品间隔2分钟，使操作人员在一定时间内完成最大量的样品检测；每个反应体系不需要终止反应，达到反应时间后立即抽气检测；各反应体系的平衡减小了系统误差。
文档编号G01N31/00GK1912618SQ20061005303
公开日2007年2月14日 申请日期2006年8月21日 优先权日2006年8月21日
发明者邢鸣鸾, 刘慧刚, 徐立红 申请人:浙江大学
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