专利名称：一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法
技术领域：
本发明涉及药物质量分析领域，具体涉及一种二氢化茚酰胺类化合物的检测分析方法。
背景技术：
蛋白酪氨酸激酶(PTK)是在正�：鸵斐Ｔ鲋彻讨衅鹬匾饔玫陌┑鞍缀驮┑鞍准易逯械某稍保且恢帜苎≡裥缘厥共煌孜锏睦野彼岵谢姿峄囊恢置福谴呋疉TP的Y-磷酸基转移到许多重要蛋白质的酪氨酸残基上，使酚羟基磷酸化。蛋白酪氨酸激酶分为受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK),非受体酪氨酸激酶(nrPTK)以及IR和Janus激酶等。RTK包括胞外配体区、跨膜区和胞内活性区，nrPTKs是一种胞浆蛋白，一般没有细胞膜外结构域，nrPTKs现已经确认的约有30种，分为10大家族。与细胞生存和增殖相关的nrPTKs主要有Abl、Src激酶家族(如Src, Fyn, Yes、Blk, Yrk、Lck、Lyn和Csk等)以及其他酪氨酸激酶如Jak、FAK> Ack、Fes、Rak和Brk等。它们的主要生物学功能是介导细胞内的信号转导。nrPTKs在细胞增殖、分化和死亡调控中起不同的作用，有些广泛表达，有些则只在特异组织中表达。在肿瘤组织中nrPTKs常被激活，再激活下游的信号转导途径，促进细胞增殖、抵抗细胞凋亡，促使肿瘤的发生和发展。目前，国外的制药公司已经研制出来数十种针对酪氨酸激酶的祀向抗癌药，例如格列卫(gleevec),易瑞沙(iressa),特罗凯(tarceva),和索坦(sutent)等,它们对特定酪氨酸激酶高表达型肿瘤疗效确切，毒副作用比经典的抗癌药小。专利W02010072166公开了全新一代的酪氨酸蛋白激酶抑制剂二氢化茚酰胺类化合物，说明书实施例16公开了(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的合成方法，但该专利文献没有公开保证该化合物的质量，即没有公开该化合物和含有该化合物制剂的含量检测分析方法。
发明内容
基于上述原因，申请人根据(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基_3_[(4_批啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的性质，在高效液相检测过程中我们发现，为了提高(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-批啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的峰纯度、保持(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4-甲基-3- [ (4-吡啶-3-基嘧啶_2_基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的稳定性，应该在流动相中加入一定量的盐，采用特定的流动相洗脱，这样就可以很好的将(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基_3-[ (4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐含量确定，同时可以保持(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧唳~2~基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐的稳定性，使(IS) -1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2,3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的含量得到精确的测定，但在流动相中加入太多量的盐会对填充柱损伤较大，而加入盐的量不在一定范围内就不能产生很好的峰纯度，我们通过长期实验研究确定流动相为有机溶剂与含盐的水相组成，可以很好的将(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2,3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐与其性质相近的杂质分离开，保证了(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐含量的精确性，并可以很好的保持色谱柱的使用率。本发明通过以下技术方案实现的。一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，包括(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3- 二氢化茚_5位酰胺倍半硫酸盐、含有(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧 啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的药物制剂的高效液相色谱法检测分析，其方法为采用C18色谱柱，流动相为有机溶剂与含盐的水相组成。其中所述的有机溶剂优选包括甲醇或乙腈。其中所述的含盐水相选自以下盐二乙胺、三乙胺。其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 1%-1. 0%。其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 5%。其中流动相中有机溶剂与含盐水相的体积比为30-40 :70_60。其中含盐水相的pH值为5. 0-7. O。其中含盐水相的优选pH值为6. 5。其中调pH值试剂为磷酸。一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速O. 5-1. Oml/min ;柱温20-400C ;检测波长267 nm。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4-甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O.1-1mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O.1-1mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液2_50μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。其中流速1. Oml/min ;柱温 30°C。
图1 :实施例1高效液相检测图谱。图2 :实施例2高效液相检测图谱。图3 :实施例3高效液相检测图谱。
图4:实施例4高效液相检测图谱。图5 :实施例5高效液相检测图谱。制备实施例 实施例1
(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐检测分析方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速O. 5/min ;柱温25°C;检测波长267nm，流动相以乙腈-O. 2%三乙胺水溶液体积比为30 70 (磷酸调节pH值至5.0)。
对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O.1mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O.1mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例2
(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐检测分析方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1. o/min ;柱温300C ;检测波长267nm，流动相以甲醇-O. 5% 二乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至6.0)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 5mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O. 5mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例3
(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐检测分析方法为
色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速Ι/min ;柱温30°C;检测波长267nm，流动相以乙腈-1%三乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至 6. 5)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 2mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O. 2mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液40μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例4
片剂处方(1000制剂单位)(is)-l-(4-甲基哌嗪-1-基)-Ν-(4-甲基_3-[(4_吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐10g，填充剂乳糖17g、微晶纤维素41g，预胶化淀粉3. 7g，崩解剂羧甲基淀粉钠3. 4g，润滑剂硬脂酸镁O. 75g。
制备方法
取处方量(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐、乳糖、微晶纤维素、预胶化淀粉，3g羧甲基淀粉钠混合均匀，用水制软材，制粒，加入O. 4g羧甲基淀粉钠，加入润滑剂，混合均匀，压片，即得。色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1. o/min ;柱温300C ;检测波长267nm，流动相以乙腈-O. 5% 二乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至6.0)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 5mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取样品片剂，用流动相配制成每Iml含O. 5mg的溶液作为供试品溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。实施例5
片剂处方(1000制剂单位)(is)-l-(4-甲基哌嗪-1-基)-Ν-(4-甲基_3-[(4_吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐25g，填充剂乳糖50g、微晶纤维素100g，崩解剂交联聚维酮12. 5g，润滑剂微粉硅胶2. 3g。制备方法
取处方量(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐、乳糖、微晶纤维素，10. 6g交联聚维酮混合均匀，用水制软材，制粒，加入1. 9g交联聚维酮，加入润滑剂，混合均匀，压片，即得。色谱柱C18色谱柱；
色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速Ι/min ;柱温300C ;检测波长267nm，流动相以甲醇-O. 5%三乙胺水溶液体积比为35 65 (磷酸调节pH值至6. 5)。对照品溶液的配制精密称取(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N- (4_甲基-3_[ (4-批唳-3-基喃唳-2-基)氨基]苯基)-2, 3- 二氢化却-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O. 2mg的溶液；
供试品溶液的配制精密称取片剂，用流动相配制成每Iml含O. 2mg的溶液作为供试品 溶液；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液40μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。所述实施例包括但不限于上述。
权利要求
1.一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，包括(lS)-l-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)_2，3- 二氢化茚_5位酰胺倍半硫酸盐、含有(IS)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐的药物制剂的高效液相色谱法检测分析，其特征在于采用C18色谱柱，流动相为有机溶剂与含盐的水相组成。
2.根据权利要求1所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述的有机溶剂包括甲醇或乙腈。
3.根据权利要求1所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述的含盐水相选自以下盐二乙胺、三乙胺。
4.根据权利要求3所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 1%-1. 0%。
5.根据权利要求3所述的一种一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中所述二乙胺或三乙胺的浓度为O. 5%。
6.根据权利要求1一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中流动相中有机溶剂与含盐水相的体积比为30-40 :70-60。
7.根据权利要求1所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中含盐水相的pH 值为 5. 0-7. O。
8.根据权利要求7所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中含盐水相的pH值为6. 5。
9.根据权利要求7或8所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中调pH值试剂为磷酸。
10.根据权利要求1-8任一项所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其特征在于 色谱柱C18色谱柱； 色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速O. 5-1. Oml/min ;柱温20-40°C ;检测波长267nm ； 对照品溶液的配制精密称取(1S)-1_(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2，3- 二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐对照品到容量瓶中，加流动相溶解摇匀，并稀释至刻度，配制每Iml含O.1-1mg的溶液； 供试品溶液的配制精密称取样品，用流动相配制成每Iml含O.1-1mg的溶液作为供试品溶液； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液2_50μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积或峰高计算含量即得。
11.根据权利要求10所述的一种二氢化茚酰胺化合物的检测分析方法，其中流速1.Oml/min ;柱温 30°C。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，本发明公开了化合物(1S)-1-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(4-甲基-3-[(4-吡啶-3-基嘧啶-2-基)氨基]苯基)-2,3-二氢化茚-5位酰胺倍半硫酸盐原料及制剂的检测分析方法；该方法具有检测含量精确、操作简便等优点。
文档编号G01N30/26GK103018349SQ201110283460
公开日2013年4月3日 申请日期2011年9月22日 优先权日2011年9月22日
发明者朱吉满, 曹捷, 解菁雅, 赵海燕, 杨艳, 朱希卓, 郭永起, 孙德杰 申请人:北京美迪康信医药科技有限公司, 哈尔滨誉衡药业股份有限公司
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