专利名称：一种丹参中丹酚酸b的定量测定方法
技术领域：
本发明涉及中药有效成分的定量测定方法，更具体地说是一种对丹参生药和制剂中的丹酚酸B进行定量测定的方法。
背景技术：
丹酚酸B是存在于唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)和唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia)南丹参(S.Bowleyana Dunn)等多种植物中的一种水溶性酚酸类化合物。近年来丹酚酸B被发现具有强烈的抗氧化作用(约为维生素E的1000倍)和清除氧自由基作用，对多种心、脑血管疾病及肝、肾功能损伤和肺纤维化等组织器官的病变均有明显的保护作用，业已得到人们日益广泛的关注。由于中药来源广泛，丹参也不例外。目前市场上的生药来源复杂，而各种丹参制剂更是品种繁多，但人们对目前市售的丹参生药和制剂中丹酚酸B的含量情况却知之甚少。
由于对丹酚酸B的研究起步较晚，有关其含量测定的报道并不多见。曾有文献报道采用反相高效液相色谱法对鼠尾草属植物中所含的丹酚酸B进行定量测定，其样品预处理方法为先用水浸泡过夜—水热提30分钟—盐酸酸化—乙酸乙酯萃取—浓缩—甲醇溶解并定容；其色谱分离采用双泵梯度法。(常用中草药高效液相色谱分析，王慕邹主编，科学出版社1999年9月第一版p375)。但目前的研究结果已表明，作为一种强抗氧剂的丹酚酸B其本身的化学结构并不太稳定，在加温、光照、潮湿和暴露在空气的条件下，丹酚酸B会发生明显的降解而其中温度的影响尤为突出。在上述的文献方法中，样品需经历较长时间的高温，影响测定结果的可靠性；且其预处理过程较为繁琐，可操作性较差。
发明内容
本发明的目的是要寻找一种能对丹参生药和各种丹参制剂中所含有的丹酚酸B进行可靠的定量测定的方法。本发明利用高效液相色谱法建立了一种简便可靠的丹参生药和制剂中丹酚酸B的定量测定方法。
本发明的实现系通过如下二个步骤1.样品预处理对于固体的丹参样品(生药、片剂、胶囊、丸剂、冲剂)，首先要使固体样品中的丹酚酸B能全量转入到提取溶剂中去。由于丹酚酸B在水中具有良好的溶解性，故选用水为提取溶剂。同时，为了保证固体样品有足够表面积与提取溶剂相接触，固体样品须加以粉碎。其中生药应先经干燥后再研细，各种固体制剂可直接研细。取样品粉末精密称定后加水适量，经5-30分钟的超声波处理提取。在超声波的作用下，样品粉末中的丹酚酸B可广泛地与水接触并不断地溶解进入水中；超声波发生器的频率为20-80kHz，功率为50-500W；样品的温度控制在0-8℃左右，以避免丹酚酸B受热分解。该提取液经过滤和定容后即可供液相色谱进样测定。对于液态的丹参制剂，直接取样加适量的水稀释，经过滤和定容后即可供测定。
2.液相色谱测定在本发明中的液相色谱测定中，采用C16、C18或C8键合相为固定相，以甲醇-乙腈-水-甲酸(三氟乙酸)或乙腈-水-甲酸(三氟乙酸)为流动相。根据样品具体情况，流动相中甲醇的比例可为80％～0％；乙腈的比例可为0％～80％；水的比例可为10％～90％；甲酸的比例可为0.02％～2.0％，甲酸可用三氟醋酸代替。流动相的流速可为0.2～2.0ml/min。采用反相色谱分离，紫外检测波长为285±5nm。
本发明的样品预处理方法具有一定的专一性和良好的提取回收率(＞95％)，与上述的液相色谱测定相配合，可简便、可靠地完成丹参生药和固体制剂、注射剂中丹酚酸B的定量测定，其各项方法学指标均可满足2000版中国药典的规定。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。
实施例1色谱条件色谱柱DiscoveryTMRP-Amide C16(250×4.6mm，5μm)；柱温室温；流动相甲醇∶乙腈∶水∶甲酸(42∶5∶52∶1)；流速1ml/min；检测波长285±5nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹酚酸B的出峰时间约为12min，样品柱效优于3000。
对照品溶液的配制取丹酚酸B镁盐对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含丹酚酸B0.1mg的溶液，作为丹酚酸B对照贮备液，精密吸取贮备液5ml置10ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为丹酚酸B对照品溶液。贮备液和对照品溶液均须充氮气后置4℃冰箱保存。
样品预处理(生药)取干燥研细并过40目筛的丹参生药细粉0.2g，精密称定，加水40ml，冰浴超声波处理20min后，滤过，用水洗涤残渣至50ml棕色量瓶中，加水并稀释至刻度，摇匀即得。
精密吸取样品适量，用水按不同比例稀释后进样，并用上述的固定相和流动相进行液相色谱分析，然后按外标法以峰面积或峰高法计算出样品中丹酚酸B的含量。
实施例2色谱条件色谱柱DiscoverTMRP-Amide C16(250×4.6mm，5μm)；柱温室温；流动相甲醇∶乙腈∶水∶甲酸(42∶5∶52∶1)；流速1ml/min；检测波长285±5nm；进样量∶20μl。在此色谱条件下，丹酚酸B的出峰时间约为12min，样品柱效优于3000。
对照品溶液的配制取丹酚酸B镁盐对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含丹酚酸B0.1mg的溶液，作为丹酚酸B对照贮备液，精密吸取贮备液5ml置10ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为丹酚酸B对照品溶液。贮备液和对照品溶液均须充氮气后置4℃冰箱保存。
样品预处理(固体制剂)取丹参的单方或复方胶囊20粒或丸剂50粒，冲剂10包，大蜜丸10粒的内容物，精密称定，研细，称取适量，置10或25ml棕色量瓶中，加水适量，冰浴超声波处理20min后，加水至刻度，滤过，取续滤液进样(如有需要可进一步按比例稀释)。
丹参的单方或复方注射剂精密吸取样品适量，用水按不同比例稀释后进样。
按外标法以峰面积或峰高法计算出样品中丹酚酸B的含量。
实施例3色谱条件色谱柱DiamonsilTMC18(250×4.6mm，5μm)；柱温室温；流动相为乙腈∶水∶甲酸(37∶62∶1)；流速1ml/min；检测波长285±5nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹酚酸B的出峰时间约为12min，样品柱效优于2000。
对照品溶液的配制取丹酚酸B镁盐对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含丹酚酸B0.1mg的溶液，作为丹酚酸B对照贮备液，精密吸取贮备液5ml置10ml棕色量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为丹酚酸B对照品溶液。贮备液和对照品溶液均须充氮气后置4℃冰箱保存。
样品预处理取丹参片剂20片，精密称定(如有糖衣，先去除糖衣)，研细，称取适量，置10或25ml棕色量瓶中，加水适量，冰浴超声波处理20min后，加水至刻度，滤过，取续滤液进样。
精密吸取样品适量，用水按不同比例稀释后进样，再按外标法以峰面积或峰高法计算出样品中丹酚酸B的含量。
权利要求
1.一种用高压液相色谱法对丹参生药和制剂中丹酚酸B进行定量测定的方法，其特征在于1)采用超声波处理-水提取法对样品预处理，超声波处理温度为0-8℃；2)用C16、C18或C8键合相硅胶为固定相，以甲醇-乙腈-水-甲酸(三氟乙酸)或乙腈-水-甲酸(三氟乙酸)为流动相；3)样品进行反相色谱分离，紫外检测。
2.根据权利要求1所述用高压液相色谱法对丹参生药和制剂中丹酚酸B进行定量测定的方法，其特征在于采用超声波对样品预处理的频率为20-80KHz，功率为50-500W，处理时间为5-30分钟。
3.根据权利要求1所述用高压液相色谱法对丹参生药和制剂中丹酚酸B进行定量测定的方法，其特征在于流动相中甲醇的比例为80％～0％；乙腈的比例可为0％～80％；水的比例为10％～90％；甲酸的比例可为0.02％～2.0％，甲酸可用三氟醋酸代替。
4.根据权利要求1所述用高压液相色谱法对丹参生药和制剂中丹酚酸B进行定量测定的方法，其特征在于采用反相色谱-等度分离，紫外检测波长为285±5nm。
全文摘要
一种采用高效液相色谱法对丹参生药和制剂中的丹酚酸B进行定量测定的方法。其特点为根据丹酚酸B的理化性质，样品预处理方法采用简便的超声波处理－水提取法，在超声波处理中样品的温度可控制在4℃左右(0－8℃)。采用C
文档编号G01N30/00GK1435688SQ02110709
公开日2003年8月13日 申请日期2002年1月31日 优先权日2002年1月31日
发明者张慧, 朱大元, 余琛, 蒋福详, 贾晶莹 申请人:上海市徐汇区中心医院
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