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专利名称：一种视黄醇结合蛋白定量检测装置的制作方法
技术领域：
本实用新型属生物技术领域，特别是涉及专用的免疫层析分析装置及其配套视黄醇结合蛋白定量检测试剂。
背景技术：
2011年全国肾脏病学术年会公布的数据显示，我国慢性肾病的发病率已达到10%-13%，而且处于不断增长的态势。但是由于肾脏疾病有慢性、隐匿性发展的特点，其知晓率仅为10%，一经发现就已进入重度肾损伤，而不得不承受透析、肾移植等产生的高昂的治疗费用和严重的身心痛苦。因此，肾脏疾病的早期发现、早期诊断、早期干预是维护身心健康、减轻社会和家庭负担、提高生活质量的主要途径。视黄醇结合蛋白(RBP)是肝脏分泌的一种低分子量蛋白(21000kD)，其主要功能是将视黄醇从肝细胞转运到上皮细胞，血浆中的RBP约有90%与甲状腺素结合前蛋白结合，形成高分子蛋白复合物，故而不被肾小球滤过膜滤过，当视黄醇被转运到靶细胞后，RBP便游离到血浆中，迅速被肾小球滤过，几乎全部被肾近曲小管重吸收而分解。故正常人尿液中几乎不含有RBP，但当肾近曲小管损伤时，其重吸收功能下降，会导致尿液中的RBP明显增力口，一般可达到正常人的5倍以上。因此，尿液中的RBP具有早期诊断意义，被认为是肾小管损伤的一个敏感的指标。此外，相关研究表明，糖尿病、高血压、红斑狼疮等也伴有早期肾功能损伤，可见尿RBP的检测对糖尿病、高血压等疾病的诊断同样具有重要价值，可作为上述疾病诊断的常规检测指标而应用于临床。但是目前临床仅限于对血清中RBP的检测，且方法多为酶联免疫吸附(ELISA)和免疫比浊法，其步骤繁杂、耗时长、不可控因素较多，而且还需要专业的技术人员操作并分析结果，大大限制了其应用范围。因而，寻找简便、快速、经济的RBP检测方法对肾脏损伤的早期普查就显得尤为重要。免疫层析方法是20世纪90年代兴起的一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的固相膜免疫分析方法，由这一技术开发出来的胶体金免疫层析试纸现已广泛应用于医学检验、食品安全监测、出入境检验检疫等领域。但现有的胶体金免疫层析诊断试剂多用于定性测定，不能满足临床对某些指标量化的要求。因此，本研究开发了配套的金标免疫层析分析仪，将其与视黄醇结合蛋白的检测相结合，创新地研制出尿RBP免疫层析快速定量检测系统。该检测系统主要有两部分组成视黄醇结合蛋白定量检测试剂和免疫层析分析仪。其中仪器是为该检测试剂“量身定做”的，以特定波长的激光器为光源，通过测量试剂检测带和质控带对特定波长光线的吸收光密度来实现对试剂的定量测定。其内部集成了光学模组、计算机控制系统、可充电电池、微型打印机、液晶显示屏等部件，是一种便携式的快速检测仪器。具有在15min内完成对RBP的快速定量测定；组合排列显示；实时和存储打印等功能。此外，该仪器拥有一套独特的软件系统，确保检测试剂能在一个较宽的范围保持良好的线性，通过验证其对RBP检测可从200-5000ng/ml，检测精度可控制在CV10%以内，同时可有效排除检测试剂基质(尿液)造成的误差，结果准确、可靠。该检测系统具有简便、快速、便携等特点，可有效用于肾脏损伤的早期诊断和动态监测，弥补了临床现有方法的不足，适合于各级医院及基层、社区医疗机构使用，具有很高的临床应用价值。

实用新型内容本实用新型通过提供一种视黄醇结合蛋白定量检测装置，以填补目前快速、简便、自动化的视黄醇结合蛋白定量检测装置的空白。本实用新型的视黄醇结合蛋白定量检测装置，由免疫层析分析仪和视黄醇结合蛋白定量检测试剂组成。其中，所述的免疫层析分析仪的部件包括激光器光源、光学模组、计算机控制系统、可充电电池、微型打印机、和液晶显示屏。另外，作为可选配置，所述的免疫层析分析仪还包括实时存储器和打印部件。此外，免疫层析分析仪还包括一套软件系统，使检测结果在较宽的检测范围内保持线性。同时可有效排除检测试剂基质效应造成的误差，使结果更为准确、可靠。 作为本实用新型的技术特征之一，所述的视黄醇结合蛋白定量检测的检测范围为200-5000ng/ml。所述的定量检测系统对视黄醇结合蛋白的检测精度CV小于10%。本实用新型还提供一种视黄醇结合蛋白定量检测试剂，为胶体金免疫层析试剂。本实用新型的工作流程为I、视黄醇结合蛋白(RBP)定量免疫层析试剂的制作将RBP单克隆抗体标记于制备好的胶体金颗粒表面，并固定于胶金垫上，相应的另一抗体及羊抗鼠分别喷涂在硝酸纤维膜(NC膜)上形成检测线(T)和质控线(C)。根据免疫层析的基本原理，将吸水纸、NC膜、胶金垫、样品垫依次贴在带有PVC底板上，切割并装卡。2、定量检测系统的建立吸取待测样品垂直滴加至加样孔中，15min后通过免疫层析分析仪判读结果。金在尺寸减小到纳米量级时表现出强烈的吸收特性。实验和理论均证明，胶体金颗粒对绿光具有较强的吸收特性。免疫层析分析仪通过测量免疫层析试剂检测区胶体金颗粒的漫反射光，分别计算出其上检测线吸收光密度(T_0D)和质控线吸收光密度(C_0D)，通过标准工作曲线，计算出被检样品中目标被检物的浓度。
以下结合附图
进一步说明本实用新型的结构特征及目的图I为RBP定量检测装置不意图。光电扫描处理系统由光机模组和光电电路两部分组成，发光二极管通过匀光玻璃照射到RBP免疫层析定量检测试剂的色带区上，两条色带反射的光经聚光片、透镜聚焦到传感器件上，从而实现数据采集和光电信号的转换。主板电路负责将光电扫描处理系统收集的光电信号进行数字处理及计算，最后将处理的一些结果通过液晶屏显示出来，即可实现对RBP的定量测定。图2定量检测所制作的标准曲线。显示视黄醇结合蛋白定量检测系统的检测范围为200-5000ng/ml，检测精度CV小于10%。
具体实施方式
胶体金-RBP抗体复合物的制备采用经典的Frens法制备粒径均一且高度分散的胶体金。将制备好的胶体金用
O.lmol/L K2C03调节pH至9. 0，加入RBP单克隆抗体，涡旋反应lOmin，加入10%BSA封闭，IOmin后将制备的金标抗体复合物离心、重悬，浓缩至原体积的1/25，4°C保存。RBP免疫层析试剂的研制I、样品垫的制备选用玻璃纤维素膜作为样品垫材料，将其放入样品垫处理液(O. 01mol/L PBS (ΡΗ=7·4)，含有 1%BSA,0. 5%Triton X-100)中浸泡，37°C烘干备用。2、胶金垫的制备选用玻璃纤维素膜作为胶金垫材料，将上述制备的胶体金-RBP 抗体复合物重新分散于O. 05mol/L Tris-HCl缓冲液(PH=8. O,含5%蔗糖，1%BSA)中，并喷于胶金垫上，37 °C烘干。3、分析膜的制备用划膜仪在硝酸纤维素膜(NC膜)的不同位置分别喷点RBP单抗(T线)及羊抗鼠IgG抗体(C线)，37°C烘干。4、组装将吸水纸、分析膜、胶金垫、样品垫依次贴在PVC底板上，并切成4_宽的试纸条，装卡。定量检测系统的建立I、将RBP标准品用正常人尿液作为稀释液配置系列浓度标准品200ng/mL，500ng/mL,800 ng/mL,1000 ng/mL,2000 ng/mL,3000 ng/mL,5000ng/ml。2、将待测样品滴加到检测试剂的加样孔中，15min后通过配套的免疫层析分析仪读出检测线与质控线吸收光密度的比值(每个样品分别用3个检测试纸测定3次，取平均值)，绘制相应的标准曲线(如图2所示)。3、利用上述标准曲线检测临床样品，即可求得实际样品中RBP的含量。检测系统准确度测定准确度是用来衡量测定值和真实值之间一致性的指标，我们通过回收试验对研制的RBP定量检测系统进行评价。回收试验结果
权利要求1.一种视黄醇结合蛋白定量检测装置，其特征在于，由免疫层析分析仪和视黄醇结合蛋白定量检测试剂组成，免疫层析分析仪的部件包括激光器光源、光学模组、计算机控制系统、可充电电池、微型打印机和液晶显示屏。
2.根据权利要求I所述的视黄醇结合蛋白定量检测装置，其特征在于，所述的免疫层析分析仪还包括实时存储器和打印部件。
3.根据权利要求I所述的视黄醇结合蛋白定量检测装置，其特征在于，所述的定量检测装置检测范围为200-5000ng/ml。
4.根据权利要求I所述的视黄醇结合蛋白定量检测装置，其特征在于，所述的定量检测装置对视黄醇结合蛋白的检测精度CV小于10%。
5.根据权利要求I所述的视黄醇结合蛋白定量检测装置，其特征在于，所述的视黄醇结合蛋白定量检测试剂为胶体金免疫层析试剂。
专利摘要本实用新型涉及一种视黄醇结合蛋白定量检测装置，由激光器光源、光学模组、计算机控制系统、可充电电池、微型打印机、和液晶显示屏组成；用以快速、简便、自动化的视黄醇结合蛋白定量检测。
文档编号G01N33/68GK202720235SQ20122016817
公开日2013年2月6日 申请日期2012年4月19日 优先权日2012年4月19日
发明者赵露晶, 沈鹤柏 申请人:沈鹤柏