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专利名称：一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器的制作方法
技术领域：
—种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器技术领域[0001]本实用新型涉及一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器，具体 是涉及一种基于钼杂化的磺酸化石墨烯纳米材料构建的同时检测胃癌肿瘤标志物的多通 道印刷电极电化学免疫传感器，属于新材料、生物传感及肿瘤检测技术领域。
背景技术：
[0002]胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于肺癌，居第二位，男性发病率为 55. 7/10万，女性发病率为21. 0/10万。我国胃癌的死亡率居恶性肿瘤之首。实施胃癌筛 查、早期诊断及早期治疗是降低胃癌发病率及死亡率最为有效的策略。[0003]肿瘤标志物的发现及应用成为继影像诊断和病理诊断之后，当前临床检测肿瘤常 用的方法之一，并用于肿瘤的随访及治疗效果观察，但目前尚未发现某一种胃癌特异性的 肿瘤标志物,而对血清中癌胚抗原CEA、糖类抗原CA19-9及糖类抗原CA72-4三种肿瘤标志 物同时检测可弥补单一指标的局限性，提高了早期胃癌的诊断率，对胃癌的早期诊断具有 重要的意义。[0004]因此开发出一种能同时快速灵敏检测胃癌肿瘤标志物的多通道印刷电极免疫传 感器势在必行。[0005]目前测定胃癌肿瘤标志物的方法有放射免疫法、酶联免疫法、金标法等，尽管这些 方法都具有不同的优点，但仍然存在不足，例如放射免疫法存在放射线辐射和污染等问题， 酶联免疫法存在操作复杂、设备要求高、要求专门的操作人员等缺点，而金标法存在相对于 酶联免疫法的特异性及敏感性低等缺点。[0006]针对上述不足，本实用新型提供一种操作方便、便携、成本低、快速灵敏检测胃癌 肿瘤标志物多通道印刷电极电化学免疫传感器及其检测方法。实用新型内容[0007]本实用新型的技术方案，包括以下步骤[0008]一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器，其特征在于，在一聚 酯薄膜矩形基片的表面上，用银/氯化银浆印刷I个参比电极；用碳浆印刷3个工作电极、I 个辅助电极；用银浆印刷电极引出线及电极引出线端部；在工作电极表面滴涂纳米复合材 料孵化的不同胃癌肿瘤标志物抗体以及牛血清白蛋白，即制成一种同时检测胃癌肿瘤标志 物多通道印刷电极免疫传感器。[0009]所述纳米复合材料为钼杂化的磺酸化石墨烯，用于修饰工作电极。[0010]所述胃癌肿瘤标志物是癌胚抗原CEA、糖类抗原CA19-9和糖类抗原CA72-4。[0011]所述不同胃癌肿瘤标志物抗体是癌胚抗原CEA、糖类抗原CA19-9和糖类抗原 CA72-4对应的抗体。[0012]所述多通道印刷电极免疫传感器用于胃癌肿瘤标志物癌胚抗原CEA、糖类抗原 CA 19-9和糖类抗原CA72-4的一次性同时检测。[0013]电极以外的基片及上述所述的所有电极引出线端部，用绝缘浆印制一层绝缘层， 并在电极区域制成一个椭圆形电解池凹槽，该椭圆形电解池凹槽用于放置铁氰化钾溶液。[0014]上述所述的牛血清白蛋白用于封闭电极上的非特异性活性位点。[0015]上述所述的多通道印刷电极免疫传感器，用于检测胃癌肿瘤标志物的含量，步骤如下采用循环伏安法，利用峰电流电信号与不同类型的胃癌肿瘤标志物浓度的线性关系， 即可得出样品中三种不同类型的胃癌肿瘤标志物的含量。[0016]与现有技术相比，本实用新型的优势如下[0017](I)印刷电极制备简单、成本低、便于携带、易于微型化和集成化。[0018](2)本实用新型传感器，检测方法简单，所需时间短，样品消耗少，灵敏度高、重现性好，应用范围广。[0019](3)钼杂化的磺酸化石墨烯既能增大电极表面积，结合更多的抗体，又能显著改善电子传递能力，从而提高了本实用新型传感器的灵敏度。[0020](4)本实用新型传感器，与多通道电化学工作站的检测电路相连，能够实现3通道同时检测，更加方便快捷，且同步性好，能减小测量误差，显著提高了检测效率。[0021](5)本实用新型传感器，采用免疫分析技术实现了不同类型胃癌肿瘤标志物的特异性识别，提高了早期胃癌的诊断率，对肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导具有重要的指导意义。


[0022]图1是多通道印刷电极结构示意图。图1中，①碳工作电极，②银/氯化银参比电极，③碳辅助电极，④引出 线，⑤引出线端部，⑥绝缘层，⑦椭圆形电解池凹槽。
具体实施方式
[0023]
以下结合附图和实例进一步说明本实用新型[0024]实施例1本实用新型的产品结构[0025]结合图1，一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器的产品结构， 其特征在于，在一聚酯薄膜矩形基片的表面上印刷5个电极，其中包括3个碳工作电极①，I 个银/氯化银参比电极②，I个碳辅助电极③；在聚酯薄膜基片上用银浆印刷上述5个电极的引出线④及引出线端部⑤。[0026]在5个电极的引出线端部⑤及5个电极以外的基片上，覆盖有绝缘浆印制的绝缘层⑥，并在电极区域制成一个椭圆形电解池凹槽⑦。[0027]工作电极①及椭圆形电解池凹槽⑦的容积大小可根据需要设定，实际操作中为减小样品消耗，一般将工作电极①的容积设置为5 ΙΟμ ，椭圆形电解池凹槽⑦的容积设置为 80 ΙΟΟμ 。[0028]通过电极表面修饰技术在工作电极上依次固定钼杂化的磺酸化石墨烯孵化的不同类型的胃癌肿瘤标志物抗体以及牛血清白蛋白，置于4°C下晾干，即完成一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器的制备，于4°C下保存备用。[0029]实施例2血清样品中CEA、CA 19-9及CA72-4的同时检测[0030]取血清样品分别滴涂到实施例1所制备的传感器的工作电极表面，于室温下孵化lh，用磷酸盐缓冲溶液清洗干净、晾干；将引出线端部与多通道电化学工作站检测电路相连 接，向本传感器的椭圆形电解池凹槽内加入铁氰化钾溶液，采用循环伏安分析法同时检测 血清样品中CEA、CA 19-9及CA72-4的含量。
权利要求1.一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器，其特征在于，在一聚酯薄膜矩形基片的表面上，用银/氯化银浆印刷I个参比电极；用碳浆印刷3个工作电极、I个辅助电极；用银浆印刷电极引出线及电极引出线端部；在工作电极表面滴涂纳米复合材料孵化的不同胃癌肿瘤标志物的抗体以及牛血清白蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器， 其特征在于，所述纳米复合材料为钼杂化的磺酸化石墨烯。
3.根据权利要求1所述的一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器， 其特征在于，所述不同胃癌肿瘤标志物的抗体是癌胚抗原CEA、糖类抗原CA19-9和糖类抗原CA72-4对应的抗体。
专利摘要本实用新型涉及一种同时检测胃癌肿瘤标志物多通道印刷电极免疫传感器，其特征在于，在1个聚酯薄膜基片表面上印刷5个电极，其包括3个碳工作电极，1个银/氯化银参比电极和1个碳辅助电极，5个电极的引出线及引出线端部。用新型纳米材料作为工作电极传感材料，通过表面修饰技术，在工作电极表面上依次固定铂杂化的磺酸化石墨烯孵化的不同类型的胃癌肿瘤标志物抗体及牛血清白蛋白，滴涂检测液后与多通道电化学工作站检测电路相连，从而实现了胃癌肿瘤标志物癌胚抗原CEA、糖类抗原CA19-9和糖类抗原CA72-4的一次性、同时快速检测，提高了早期胃癌的诊断率。本实用新型传感器制备简单、加工方便、成本低、便于携带、易于商品化。
文档编号G01N33/543GK202854092SQ20122041811
公开日2013年4月3日 申请日期2012年8月22日 优先权日2012年8月22日
发明者吴丹, 张勇, 李贺, 杜斌, 魏琴, 李燕, 王志玲, 朱沛华, 朱宝存, 马洪敏, 范大伟, 闫良国 申请人:济南大学