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专利名称：一种酶标仪线性关系快速评估的方法
技术领域：
本发明涉及一种酶标仪线性关系快速评估的方法，属于酶标仪性能评价技术领域。
背景技术：
酶标仪是临床及实验室中常用的设备，其检测结果的准确性和可靠性备受关注。线性关系是酶标仪仪器性能的核心指标之一，也是预防和快速检查酶标仪设备故障的方法之一。简易可行的酶标仪线性关系评估方法可有效避免因酶标仪故障问题等客观原因和检测人员操作失误等主观原因造成的错误的检测结果。目前，有关酶标仪线性关系评估和校正的方法已有公开报道。如国家质量监督检 验检疫总局于2007年发布了《酶标分析仪检定规程》(JJG861-2007) [I]，检定用设备包括交流电压表、频率表、兆欧表、微孔酶标板、以及分光光度计，检定用试剂主要是重铬酸钾，适用于酶标分析仪的首次检定、后续检定和使用中检验。杨青成等[2]采用重铬酸钾溶液建立了酶标仪的日常校准方法，经验证可代替标准滤光片。成军等[3]采用甲基橙溶液建立了酶标仪性能评价与鉴定的方法。何宗忠等[4]采用酶联反应试剂建立了酶标仪线性校正的方法。经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。参考文献[I] JJG- 861: 2007.中华人民共和国国家计量检定规程酶标分析仪[S].[2]杨青成，陈艳春，侯治兵，等.酶标仪校准方法探讨[J].临床血液学杂志，2011，24(4): 212-215.[3]成军，孙关忠，郑怀竞.酶标仪性能评价与鉴定方法的理论基础及其解释[J]·陕西医学检验，1998，13(4) : 12-14.[4]何宗忠，王强，王大钊，等.介绍一种酶标仪线性校正的简易方法[J].现代检验医学杂志，2007，22(5) : 7-8.

发明内容
本发明的目的在于提供一种酶标仪线性关系快速评估的方法，为酶标仪的性能评价提供技术支持。本发明的技术解决方案是根据朗伯-比尔定律，中性红溶液在特定的吸收波长处，其吸光强度与稀释浓度成正比的特性，在酶标仪波长540 nm处，读取各孔的吸光度值，进行线性关系分析。本发明的目的通过下述技术步骤来实现I、采用去离子水将中性红染料配制成6个浓度的溶液，分别为0. 78、I. 56,3. 13、6.25>12.5>25 μ g/mL。2、将配制的中性红溶液加入到96孔细胞培养板中，每孔200 μ L，每个浓度做8孔平行。3、在酶标仪波长540 nm处，读取各孔的吸光度值。4、线性关系分析采 用一元线性回归的数据拟合方式，得出线性回归方程和相关系数。本发明方法的优点在于操作简单易行，经济实用，能够快速实现酶标仪线性关系的评估，为酶标仪的性能评价提供技术支持。


图I中性红溶液与吸光度值的散点和线性回归图。
具体实施例方式I.实验材料中性红染料，为实验室常用试剂；容量瓶；移液管；96孔细胞培养板。2.主要实验器材酶标仪Bio-Rad 680型；水浴锅；移液枪。3.实验原理根据朗伯-比尔定律，中性红溶液在特定的吸收波长处，其吸光强度与稀释浓度成正比的特性，在酶标仪波长540 nm处，读取各孔的吸光度值，进行线性关系分析。4.实验方法将6个不同浓度的中性红溶液加入到96孔细胞培养板内，在540 nm波长处检测每孔的吸光度值，采用一元线性回归的数据拟合方式，得出线性回归方程和相关系数。具体步骤如下a、打开酶标仪，进行仪器预热。b、采用去离子水将中性红染料配制浓度为I mg/mL的溶液，由于中性红是一种结晶性染料，配制时应使之充分溶解后再用容量瓶定容。C、采用去离子水将I mg/mL的中性红溶液稀释成6个浓度的溶液，分别为0. 78、
I.56,3. 13,6. 25、12. 5、25 μ g/mL，并将之充分混匀以保证溶液的均一性。d、将以上配制的6个浓度的中性红溶液加入到96孔细胞培养板中，每孔200 μ L,每个浓度做8孔平行。e、在酶标仪波长540 nm处，读取各孔的吸光度值，见表I。由表I知在酶标仪540nm波长处，中性红溶液的吸光度值随着浓度的增加而增加，呈显著的正比关系。f、线性关系分析根据各孔的吸光度值，以中性红溶液的浓度为横坐标，以各浓度的吸光度值的平均值为纵坐标，绘制散点图；采用一元线性回归的数据拟合方式，得出线性回归方程和相关系数，y=0. 0497x+0. 0268，R2=O. 9984，见图I。5.实验结果申请人经研究发现，该方法中6个浓度的中性红溶液与其吸光度值拟合的回归方程，其决定系数(R2)达到O. 9984，拟合程度较好，中性红溶液与吸光度值间具有真实的线性关系。表I不同浓度中性红溶液的吸光度值
权利要求
1.一种酶标仪线性关系快速评估的方法，其特点在于该方法的步骤如下 a、采用去离子水将中性红染料配制成6个浓度的溶液，分别为0.78,1.56,3. 13、.6.25>12. 5>25 μ g/mL ；b、将配制的中性红溶液加入到96孔细胞培养板中，每孔200μ L，每个浓度做8孔平行； C、在酶标仪波长540 nm处，读取各孔的吸光度值； d、线性关系分析采用一元线性回归的数据拟合方式，得出线性回归方程和相关系数。
全文摘要
本发明涉及一种酶标仪线性关系快速评估的方法，属于酶标仪性能评价技术领域。该方法的步骤为a、采用去离子水将中性红染料配制成6个浓度的溶液，分别为0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25μg/mL；b、将配制的中性红溶液加入到96孔细胞培养板中，每孔200μL，每个浓度做8孔平行；c、在酶标仪波长540 nm处，读取各孔的吸光度值；d、线性关系分析采用一元线性回归的数据拟合方式，得出线性回归方程和相关系数。本发明方法的优点在于操作简单易行，经济实用，能够快速实现酶标仪线性关系的评估。
文档编号G01N21/31GK102928370SQ20121043042
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月1日 优先权日2012年11月1日
发明者米其利, 曾婉俐, 张涛, 高茜, 周岚, 李雪梅, 夭建华 申请人:云南烟草科学研究院