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专利名称：纸片法筛查儿童铅中毒的方法
技术领域：
本发明纸片法筛查儿童铅中毒的方法涉及一种血铅检测方法。
国内血铅测试的方法均需采用静脉血或末梢血，血标本必须放入试管中才能运输，使运输困难这一问题甚为突出，无检测设备的地区基本无法开展血铅的检测。国外有纸片法进行血铅检测，使标本的运输困难这一难题得到了解决，其步骤为采血、标本预处理、标准曲线的建立、用原子吸收光谱仪(石墨炉法)测试。其中采血过程是在滤纸上有一个1/2英寸的圆圈，取6-8滴血滴滴满圆圈，此采血过程有采血困难、血滴易重叠、凝血，从而影响测试结果；标本预处理过程是0.6cm直径的标本2片放入试管内，放入5％的硝酸0.6ml，振荡，静置15秒，重复2次振荡和静置过程，离心，取上清液测定。此标本预处理过程振荡次数多，预处理时间长，取标本量多，重复试验较困难。标准曲线的建立过程是将已知铅浓度的标准水溶液稀释成0、10、20、50、100μg/dl，加入空白纸片2片，供测试时作标准曲线之用，用水溶液作标准曲线，与测试的血标本背景不一致，误差较大；在测试过程中，加样16μl，加磷酸二氢钠7μl，进样量大，测试时间长。同时，用于血铅测定的原子吸收光谱仪价格昂贵，血标本往往需要转送到有条件的实验室进行分析，针对国外纸片法所存的问题，本发明提出一新的更适合国情的技术方案。
本发明的目的在于提供一种简便、快速、经济、符合我国国情的儿童铅中毒筛查方法，使没有相应检测设备的地区也能通过邮寄标本的方式开展儿童铅中毒的防治工作。
本发明的目的可通过下述技术方案实现一种纸片法筛查儿童铅中毒的方法，步骤分为血标本采集、标本预处理、标准曲线的建立、测试，特征在于第一步血标本采集，依次对小儿手指用肥皂棉球、2％EDTA棉球、75％酒精棉球擦拭，嘱咐小儿手心向下，屈曲其余手指，待手指干燥后用三梭针针刺，轻轻挤压指腹，形成足够大的血滴后，让血直接滴于滤纸上，形成直径大于0.6cm血斑，每滴血形成一处血斑，每张滤纸上滴二至三处血斑，滤纸在室温下晾干后放入经去离子处理的塑料袋中，于4-10℃环境温度下保存。具有采血方便，血滴不易重叠、凝血；第二步标本预处理，系在血斑中心打洞裁下直径0.6cm小圆片直接置入试管中加入浓度3-10％的硝酸200μl，振荡5-10秒，使纸片充分浸没于硝酸溶液中，4℃环境温度下放置16-24小时，取出后再次振荡5-10秒，然后离心处理，取上清液进行测试。具有振荡次数少，节省预处理时间，取标本量少，便于重复测试；第三步标准曲线的建立系在已知血铅浓度0-500μg/L的范围内，选取5-6点，取30μl血样滴于滤纸上，室温晾干后与测试标本相同，进行上述第二步标本预处理后测试，作曲线。用全血作标准曲线，与测试的血标本背景一致，有助于减少误差。
在上述技术方案基础上，本发明所述的一种纸片法筛查儿童铅中毒的方法，原子吸收光谱仪波长283.3nm，狭缝0.7nm；石墨炉的参数为干燥90-120℃、30-40秒，灰化600-700℃、30秒；原子化1700-1800℃,5秒，读数2秒，每次测定的进样量为20μl。具有进样量少，测试时间短的特点。
为了验证纸片法的有效性及可行性，通过下述测试结果可以进一步得到论证一，纸片法血铅测定的重复性取30份抗凝血，每份吸取30μl滴于滤纸上，重复做4份纸片标本，每周测定一次，其结果详见表1，纸片法血铅测定的重复性表1时间 例血铅 与静脉血相关 T值P值数μg/L 系数第一周 30 271.3+17.8 0.9391 14.4648 ＜0.01第二周 30 285.6+18.9 0.9708 21.4106 ＜0.01第三周 30 280.7+20.4 0.9666 19.9635 ＜0.01第四周 30 292.2+20.3 0.9553 17.0975 ＜0.01静脉血的血铅浓度为270μg/L，从第一周到第四周，血铅的相关系数为0.9391-0.9708，说明纸片法测验定的重复性好，且标本在一个月内测定不影响结果。二，纸片法的重吸收率取已知铅浓度的30份抗凝静脉血，每份吸取30μl滴于滤纸上，测定纸片的血铅值，并与相应的静脉血铅对照，并计算出重吸收率。结果为例数30例，重吸收率范围95.3-110.5％，平均重吸收率98.8％。三，不同血量在滤纸上的扩散度和血铅含量的关系，详见表2，不同血量在滤纸上的扩散度和血铅含量表2血量 例 直径 面 积 单位面积含血 血铅μl数 (cmm)(cm2) 量(μl/cm2) (μg/L)20 12 0.7805 0.4785 41.82+1.08* 96.09+21.2330 12 0.9258 0.6732 44.59+1.43 111.09+36.5950 12 1.1942 1.1201 44.70+1.94 112.08+52.75结果表明，20μl血量滴于滤纸上，其单位面积含血量和血铅浓度都低于30μl和50μl的对应值，经统计处理有显著差别(p＜0.01)，而30μl和50μl之间其单位面积含血量与血铅浓度均无差别(p＞0.05)。说明在一定范围内(血滴30μl-50μl之间，血液在滤纸上的扩散度和血铅浓度是较恒定的。四，纸片法的阳性率、假阴性率和假阳性率，在158例小儿中，静脉血铅水平高于100μg/L、200μg/L的分别有63和2例，纸片法则分别有55和2例。按100μg/L和200μg/L的标准作纸片法筛查儿童铅中毒的阳性率、假阴性率和假阳性率分析，见表3，纸片法的阳性率、假阴性率和假阳性率表3阳性率％假阴性率％假阳性率％ 血铅μg/L≥100 86.9 15.9 8.4≥200 100 00纸片法虽然存在一定的假阴性和假阳性，但血铅结果在国际上公认的误差范围(40μg/L)内。五，静脉血和末梢纸片法血铅浓度的相关性，详见表4，静脉血和末梢纸片法血铅浓度的相关性表4方法 例数 血铅μg/L静脉法15894.55+35.59纸片法15892.75+33.87对象为2-7岁的儿童158例，采集静脉血1ml放入抗凝管中，随后立即采手指末梢血于纸片上。静脉血采用原子吸收光谱法，纸片血的处理和检测方法为本发明，二种测定方法其血铅浓度的相关系数r=0.8689、t=21.9636、p＜0.01。上述测试进一步检证了本发明的可靠性。同时，对标准曲线修正后，本发明也可用于青少年、成人组。
本发明的优越性在于血标本易采集，运输方便，对无检测设备的地区也可进行血铅的普查，检测的结果符合国际公认的标准范围，为大规模的儿童铅中毒流行病学研究奠定了方法学基础，本发明提供了一种简便、快速、经济、符合我国国情的儿童铅中毒筛查方法。下面通过实施例详述本发明。
实施例1，纸片法筛查儿童铅中毒的方法发明的目的可通过下述技术方案实现一种纸片法筛查血铅的方法，步骤分为血标本采集、标本预处理、标准曲线的建立、测试，特点是第一步血标本采集，依次对小儿手指用肥皂棉球、2％EDTA棉球、75％酒精棉球擦拭，嘱咐小儿手心向下，屈曲其余手指，待手指干燥后用三梭针针刺，轻轻挤压指腹，形成足够大的血滴后，让血直接滴于滤纸上，形成直径大于0.6cm血斑，以0.9-1.1cm为宜，每滴血形成一处血斑，每张滤纸上滴二至三处血斑，滤纸在室温下晾干后放入经去离子处理的塑料袋中，于4-10℃冰箱中保存。具有采血方便，血滴不易重叠、凝血；第二步标本预处理，系在血斑中心打洞裁下直径0.6cm小圆片直接置入圆底塑料管中，然后加入浓度5％的硝酸200μl，振荡器振荡10秒，使纸片充分浸没于硝酸溶液中，在4℃冰箱中放置16-24小时，取出后再次振荡10秒，然后3000转/分离心处理2分钟，吸取上清液即可用原子吸收仪(石墨炉法)进行测定。具有振荡次数少，节省预处理时间，取标本量少，便于重复测试的优点；第三步标准曲线的建立，本实施例选用美国疾病控制中心每月提供的铅质控标本，在0-500μg/L的血铅浓度范围内选5点，用微量进样器吸血30μl滴于滤纸上，室温晾干，打洞后将纸片置于圆底塑料管中，与测试样同时做相同的标本预处理。本发明测试条件为采用Perkin-Elmer公司的4100型原子吸收光谱仪，波长283.3nm，狭缝0.70nm。石墨炉的参数为干燥100℃,30秒；灰化700℃,30秒；原子化1800℃,5秒，读数2秒。每次测定的进样量为20μl。
权利要求
1，一种纸片法筛查儿童铅中毒的方法，步骤分为血标本采集、标本预处理、标准曲线的建立、测试，其特征在于第一步血标本采集，取指血，将足够大的血滴直接滴于滤纸上，形成直径大于0.6cm血斑，每滴血形成一处血斑，每张滤纸上滴二至三处血斑，滤纸在室温下晾干后放入经去离子处理的塑料袋中，于4-10℃环境温度下保存；第二步标本预处理，系在血斑中心打洞裁下直径0.6cm小圆片直接置入试管中加入浓度3-10％的硝酸200μl，振荡5-10秒，使纸片充分浸没于硝酸溶液中，4℃环境温度下放置16-24小时，取出后再次振荡5-10秒，然后离心处理，取上清液进行测试；第三步标准曲线的建立系在已知血铅浓度0-500μg/L的血铅浓度范围内选5-6点，取30μl血样滴于滤纸上，室温晾干后与测试标本相同，进行上述第二步标本预处理后测试，作曲线。
2，根据权利要求1所述的一种纸片法筛查儿童铅中毒的方法，其特征在于原子吸收光谱仪波长283.3nm，狭缝0.7nm；石墨炉的参数为干燥90-120℃、30-40秒，灰化600-700℃、30秒；原子化1700-1800℃,5秒，读数2秒，每次测定的进样量20μl。
全文摘要
本发明纸片法筛查儿童铅中毒的方法涉及一种血铅检测方法,包括血标本采集、预处理、标准曲线的建立、测试,特点是:第一步在指腹采集血标本,在滤纸上形成直径大于0.6cm的血斑,滤纸在室温下晾干后放入经去离子处理的塑料袋中,于4－10℃环境温度下保存;第二步标本预处理,在血斑中心打洞裁下直径0.6cm小圆片直接置入试管中加入浓度3－10%的硝酸200μl,振荡5－10秒,使纸片充分浸没于硝酸溶液中,4℃环境温度下放置16－24小时,取出后再次振荡5－10秒,然后离心处理,取上清液进行测试;第三步标准曲线的建立系在已知血铅浓度0－500μg/L的血铅浓度范围内选5－6点,取30μl血样滴于滤纸上,室温晾干后与测试标本相同,进行上述第二步标本预处理后测试,作曲线。
文档编号G01N21/71GK1318744SQ0011541
公开日2001年10月24日 申请日期2000年4月19日 优先权日2000年4月19日
发明者沈晓明, 章依文, 颜崇淮, 吴胜虎, 周建德, 殷洁敏, 敖黎明 申请人:上海第二医科大学附属新华医院