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一种蛋白质芯片的制作方法
【专利摘要】本实用新型属于生物医学检测【技术领域】，具体为一种蛋白质芯片，包括呈方形的固相载体，固相载体的四角处均设有一阴性质控区和一阳性质控区，所述固相载体的中部设有至少一种炎症因子识别区。本实用新型通过在固相载体的四个角处均设阴性质控区和阳性质控区，便于与各炎症因子识别位点进行比较判断，提高蛋白芯片检测结果的准确性。每种炎症因子识别区、每个阴性质控区和每个阳性质控区均设五个点，且呈点阵式排列，不仅可提高反应容量，还可提高检测结果的准确性。由玻片、氨基修饰层、醛基修饰层和琼脂糖修饰层构成的固相载体可使样品稳定固定在其上且保持活性。
【专利说明】一种蛋白质芯片
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及生物医学检测【技术领域】，尤其涉及一种蛋白质芯片。
【背景技术】
[0002]蛋白质芯片技术概念起源于20世纪80年代后期，是生命科学领域热门的新技术之一。蛋白质芯片具有平行性、高通量、灵敏度高、样品用量少、检测速度快等优点。然而，由于蛋白质的化学成分和结构复杂多变，固定在芯片表面的蛋白质容易变性失活。因此，寻找合适的载体和表面修饰方法以保证固定足够量的蛋白质并保持其天然活性成为研制蛋白质微阵列的关键步骤之一。
[0003]近年来经过科研人员的尝试和研发，逐步形成了以滤膜、塑料、玻片和金属膜等为主的固相载体。在这几类载体中，玻片具有廉价、表面光滑、荧光背景低、性能稳定、抗体用量低等优点。但是，用玻片固定蛋白往往具有样品易蒸发、不适合多步反应、容量较小和容易发生交叉污染等缺点。
[0004]通过改进蛋白质芯片的结构特点来克服反应容量小、样品易蒸发的问题，以及提高检测结果准确性是一种可行的方法，从而更充分发挥蛋白质芯片的优势。
实用新型内容
[0005]本实用新型解决的技术问题是提供一种反应容量大、检测结果准确性高的蛋白质
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[0006]为解决上述技术问题，本实用新型采用以下技术方案:一种蛋白质芯片，包括呈方形的固相载体，所述固相载体的四角处均设有一阴性质控区和一阳性质控区，所述固相载体的中部设有至少一种炎症因子识别区。
[0007]所述固相载体的中部设有若干种炎症因子识别区，所述每种炎症因子识别区由5个同种炎症因子识别位点构成。
[0008]所述每个阴性质控区由5个阴性对照点组成；所述每个阳性质控区由5个阳性对照点组成。
[0009]所述炎症因子识别位点、阳性对照点和阴性对照点在固相载体上呈矩阵式排列。
[0010]所述炎症因子识别位点、阳性对照点和阴性对照点的体积均为1mm3。所述炎症因子识别区中相邻两个炎症因子识别位点的距离为1.5mm ;所述阴性质控区中相邻两个阴性对照点的距离为1.5mm ;所述阳性质控区中相邻两个阳性对照点的距离为1.5mm。
[0011]所述固相载体由玻片，以及玻片上由下至上依次设置的氨基修饰层、醛基修饰层和琼脂糖修饰层组成。
[0012]所述阴性对照点为BSA阴性对照点，所述阳性对照点为二抗阳性对照点。
[0013]述炎症因子识别位点包括CRP识别位点、Myoglobin识别位点、cTnT识别位点、NT-proBNP识别位点、CK-MB识别位点、H-FABP识别位点、GPBB识别位点和D-Dimer识别位点。[0014]与现有技术相比，本实用新型的有益效果是:本实用新型通过在固相载体的四个角处均设阴性质控区和阳性质控区，便于与各识别位点进行比较判断，提高蛋白芯片检测结果的准确性。每种炎症因子识别区、每个阴性质控区和每个阳性质控区均设五个点，且呈点阵式排列，不仅可提高反应容量，还可提高检测结果的准确性。由玻片、氨基修饰层、醛基修饰层和琼脂糖修饰层构成的固相载体可使样品稳定固定在其上，且保持活性。
【专利附图】

【附图说明】
[0015]图1为本实用新型的蛋白质芯片的结构示意图。
【具体实施方式】
[0016]为了更充分理解本实用新型的技术内容，下面结合具体实施例对本实用新型的技术方案作进一步介绍和说明。
[0017]实施例
[0018]本实施例提供的一种蛋白质芯片为用于检测心血管疾病的蛋白质芯片。心血管疾病的炎症因子包括CRP (C反应蛋白)、Myoglobin (肌红蛋白)、cTnT (心肌肌钙蛋白T)、NT-proBNP (N末端B型钠尿肽)、CK-MB (肌酸激酶同工酶)、H-FABP (心型脂肪酸结合蛋白)、GPBB (糖原磷酸化酶同工酶BB)和D-Dimer (D 一二聚体)共8项生物标志物。
[0019]BSA为牛血清白蛋白。
[0020]参照图1，本实施例提供的一种蛋白质芯片包括呈方形的固相载体1，固相载体I上设有炎症因子识别区、阴性质控区和阳性质控区。所述固相载体I由玻片，以及玻片上由下至上依次设置的氨基修饰层、醛基修饰层和琼脂糖修饰层组成。在固相载体I上的四个角处分别设有一个阴性质控区和一个阳性质控区。每个阴性质控区由五个组成一排的阴性对照点3构成，阴性对照点3为BSA阴性对照点。每个阳性质控区由五个组成一排的阳性对照点2构成，阳性对照点2为二抗阳性对照点。固相载体I的每个角处的阴性质控区和阳性质控区平行排列。在固相载体I的中部设置八种炎症因子识别区，每种炎症因子识别区均由五个组成一排的相应的炎症因子识别位点4构成。固相载体I上设置的炎症因子识别位点4有CRP识别位点、Myoglobin识别位点、cTnT识别位点、NT-proBNP识别位点、CK-MB识别位点、H-FABP识别位点、GPBB识别位点和D-Dimer识别位点。每个炎症因子识别位点4及阳性对照点2和阴性对照点3的体积均为1mm3。阴性质控区中相邻两个阴性对照点3的距离为1.5mm ;阳性质控区中相邻两个阳性对照点2的距离为1.5mm ;炎症因子识别区中相邻两个炎症因子识别位点4的距离为1.5mm,并且炎症因子识别位点4呈矩阵式排列。
[0021]蛋白质芯片试剂盒的使用:
[0022]将IOOyL血清样品铺于蛋白质芯片上，并将蛋白质芯片放置于摇床上，室温反应lh。反应结束后用PBST清洗蛋白质芯片3次，每次5min。然后将500 μ L，0.5mg/mL的检测剂铺于蛋白质芯片上进行二次免疫反应lh。反应结束后用PBST清洗蛋白质芯片并吹干，然后将蛋白质芯片置于紫外成像仪中进行图像扫描，用图像分析软件QuantArraysoftwareversion3000进行突光强度分析，并用标准曲线法计算血清样品中CRP、Myoglobin、cTnT、NT-proBNP、CK-MB, H-FABP, GPBB 和 D-Dimer 的浓度。
[0023]以上所述仅以实施例来进一步说明本实用新型的技术内容，以便于读者更容易理解，但不代表本实用新型的实施方式仅限于此，任何依本实用新型所做的技术延伸或再创造，均受本实用新型的保护。
【权利要求】
1.一种蛋白质芯片，包括呈方形的固相载体(1)，其特征在于，所述固相载体(I)的四角处均设有一阴性质控区和一阳性质控区，所述固相载体(I)的中部设有至少一种炎症因子识别区。
2.根据权利要求1所述一种蛋白质芯片，其特征在于，所述固相载体(I)的中部设有若干种炎症因子识别区，所述每种炎症因子识别区由五个同种炎症因子识别位点(4)构成。
3.根据权利要求2所述一种蛋白质芯片，其特征在于，所述每个阴性质控区由5个阴性对照点(3)组成；所述每个阳性质控区由5个阳性对照点(2)组成。
4.根据权利要求3所述一种蛋白质芯片，其特征在于，所述炎症因子识别位点(4)、阳性对照点(2)和阴性对照点(3)在固相载体(I)上呈矩阵式排列。
5.根据权利要求4所述一种蛋白质芯片，其特征在于，所述炎症因子识别位点(4)、阳性对照点(2 )和阴性对照点(3 )的体积均为Imm3。
6.根据权利要求5所述一种蛋白质芯片，其特征在于，所述固相载体(I)由玻片，以及玻片上由下至上依次设置的氨基修饰层、醛基修饰层和琼脂糖修饰层组成。
7.根据权利要求3-6任一项所述一种蛋白质芯片，其特征在于，所述阴性对照点(3)为BSA阴性对照点，所述阳性对照点(3)为二抗阳性对照点。
8.根据权利要求7所述一种蛋白质芯片，其特征在于，所述炎症因子识别位点(4)包括CRP识别位点、Myoglobin识别位点、cTnT识别位点、NT-proBNP识别位点、CK-MB识别位点、H-FABP识别位点、GPBB识别位点和D-Dimer识别位点。
【文档编号】G01N33/573GK203519614SQ201320639952
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年10月16日 优先权日:2013年10月16日
【发明者】张二盈, 章国建 申请人:深圳市大爱医疗科技有限公司