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一种电子烟烟液中烟草特有亚硝胺的液相色谱串联质谱测定方法
【专利摘要】一种电子烟烟液中烟草特有亚硝胺的液相色谱串联质谱测定方法，其特征在于：是将电子烟烟液样品经稀释后直接引入液相色谱-电喷雾电离-串联质谱仪进行测定，采用内标法定量分析物。可快速、准确检测出电子烟烟液中烟草特有亚硝胺的含量水平。本发明为全新的电子烟烟液中烟草特有亚硝胺含量的测定方法，串联质谱法更好的提高了方法的选择性与准确性，NNK、NNN、NAT和NAB的定量限分别为0.08ng/mL，0.10ng/mL，0.12ng/mL和0.09ng/mL，方法的回收率范围是90.9-108.1%，RSD＜12.1%。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化，较好的提高了色谱分离过程，缩短了色谱分析的时间，为6min。
【专利说明】一种电子烟烟液中烟草特有亚硝胺的液相色谱串联质谱测定方法
【技术领域】
[0001]本发明属于电子烟的理化检验【技术领域】，具体说是一种采用液相色谱-电喷雾电离-串联质谱仪测定电子烟烟液中烟草特有亚硝胺含量的方法。
【背景技术】
[0002]4-(亚硝基甲氨基)-1_ β -吡啶基)-1- 丁酮(NNK)、#-亚硝基降烟碱(NNN)、#-亚硝基新烟草碱(NAT)和亚硝基假木贼碱(NAB)是广泛存在于卷烟烟气中的致癌物，并且这些物质只存在于烟草制品或者卷烟烟气中，因此被称为烟草特有亚硝胺(TSNAs)。国际癌症研究机构(IARC)、Hecht研究团队等，对加拿大政府名单中有害成分的毒性评价结果表明，并有足够的证据认为，TSNAs中的NNK对实验室动物有致癌性。因此，准确测定TSNAs在烟草制品及卷烟烟气中的含量对人类健康的具有十分重要的意义，关于卷烟中的TSNAs测定的各种方法也常见于公开文献中。
[0003]电子烟(electrical cigarette, e-cigarette)又名电子烟碱传送系统(electronic nicotine delivery systems, ENDS),是一种外表类似于卷烟的新型烟碱摄入方式。多年来，电子烟以“保健”，“戒烟”，“清肺”等为宣传口号，以网络为主要营销途径，在中国地区销量大增。但是，针对电子烟产品的成分测定，安全性评估等方面的研究还很少。最近有文献报道在电子烟烟液中也存在少量的TSNAs，而关于电子烟烟液中TSNAs测定方法的报道很少。韩国学者建立了液液萃取、固相萃取-LC-MS/MS测定电子烟烟液中TSNAs的方法，但是其方法前处理比较繁琐，包括液液萃取和固相萃取，不利于电子烟烟液中TSNAs的常规分析。因此，能否提供一种前处理简单的、快速、高灵敏度的测定电子烟烟液中TSNAs的方法，已引起有关业内研究人员的关注。

【发明内容】

[0004]本发明的目的旨在克服现有技术缺陷，建立一种简单、快速、选择性好的测定电子烟烟液中烟草特有亚硝胺的LC-MS/MS方法，该方法能快速、准确检测电子烟填充液中烟草特有亚硝胺的含量，测定结果准确、测定干扰少。
[0005]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
一种电子烟烟液中烟草特有亚硝胺的液相色谱串联质谱测定方法，是对四种烟草特有亚硝胺:NNK、NNN, NAT和NAB的测定，具体包括以下工艺步骤:
a、准确称取1.00 g电子烟烟液样品，放入10 mL的容量瓶；
b、加入50PL的混合内标溶液，用100 mM的乙酸铵溶液定容到刻度，超声10 min混合均匀以后即为样品待测液；
C、标准工作液配制:用乙酸铵溶液配制不同浓度的NNK、NNN、NAT和NAB混合标准工作溶液；
d、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS )测定，吸取上述配制好的不同浓度的混合标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，NNK, NNN, NAT和NAB的线性回归方程分别为y=0.0462x-0.000362，y=0.0825x+0.00655, y=0.271x+0.00884 和 y=0.134x+0.0112，其中Y代表分析物的峰面积，X表示样品中目标分析物的浓度，相关系数均大于0.999，对样品待测液进行测定，测得分析物与内标峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。
[0006]在本发明中，所述混合内标为NNK-d4、NNN-d4、NAT_d4和NAB_d4，四种内标的浓度均为 5 Pg/mL。
[0007]所述NNK、NNN, NAT和NAB混合标准工作溶液浓度分别为1.02，5.08，10.2，20.3，30.5,40.6 和 50.8 ng/mL ；1.21,6.06，12.1,24.2,36.4,48.5 和 60.6 ng/mL ；0.90,4.49，
8.97，17.9,26.9, 35.9 和 44.9 ng/mL ；0.49，2.46,4.92,9.84，14.8,19.7 和 24.6 ng/mL。
[0008]在d 步骤中，选取 Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 色谱柱，规格 150 mmX 2.1mm,3.5 Mm,流动相:溶剂A:0.1%乙酸水溶液和溶剂B:0.1%乙酸甲醇溶液，流动相流速为 200 μ L/min，梯度洗脱条件:0-3 min，50%A_10%A ;3_4 min, 10%A-0%A ；4-5 min, 0%A ；
5-5.5 min，0%A-50%A ；5.5-6 min，50%A，分析时间为 6 min，进样量为 5 μ L。
[0009]在d步骤中，串联质谱检测器的条件:电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；电喷雾电压:4500V，雾化气:50 psi,气帘气:35 psi,辅助加热气:30 psi，射入电压:10 V，驻留时间:40 ms ;NNK、NNN、NAT和NAB的监测离子对及其相应的碰撞能量见表1。
[0010]表1多反应监测模式下NNK、NNN: NAT和NAB的质谱参数_
【权利要求】
1.一种电子烟烟液中烟草特有亚硝胺的液相色谱串联质谱测定方法，具体是对四种烟草特有亚硝胺:NNK、NNN, NAT和NAB的测定，其特征在于:包括以下工艺步骤: a、准确称取1.0O g电子烟烟液样品，放入10 mL的容量瓶； b、加入50PL的混合内标溶液，用100 mM的乙酸铵溶液定容到刻度，超声10 min混合均匀以后即为样品待测液； C、标准工作液配制:用乙酸铵溶液配制不同浓度的NNK、NNN、NAT和NAB混合标准工作溶液； d、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定，吸取上述配制好的不同浓度的混合标准工作溶液，注入LC-MS/MS系统，NNK, NNN, NAT和NAB的线性回归方程分别为y=0.0462x-0.000362，y=0.0825x+0.00655, y=0.271x+0.00884 和 y=0.134x+0.0112，其中Y代表分析物的峰面积，X表示样品中目标分析物的浓度，相关系数均大于0.999，对样品待测液进行测定，测得分析物与内标峰面积的比值，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于:所述混合内标为NNK-d4、NNN-d4、NAT-d4和NAB-d4，四种内标的浓度均为5 Pg/mL。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于:NNK、NNN,NAT和NAB混合标准工作溶液浓度分别为 1.02，5.08，10.2,20.3,30.5，40.6 和 50.8 ng/mL ；1.21,6.06，12.1,24.2，36.4，48.5 和 60.6 ng/mL ；0.90,4.49,8.97，17.9,26.9, 35.9 和 44.9 ng/mL ；0.49，2.46，4.92,9.84，14.8,19.7 和 24.6 ng/mL。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于:在d步骤中，选取AgilentZorbaxEclipse XDB-C18色谱柱，规格150 mmX2.1 mm, 3.5 Mm，流动相:溶剂A:0.1%乙酸水溶液和溶剂B:0.1%乙酸甲醇溶液，流动相流速为200 μ L/min，梯度洗脱条件:0_3 min,50%A-10%A ；3-4 min,10%A_0%A ;4_5 min, 0%Α ;5_5.5 min，0%A_50%A ；5.5-6 min，50%A，分析时间为6 min,进样量为5 μ L。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于:在d步骤中，串联质谱检测器的条件:电喷雾离子源，多反应监测正离子扫描方式；电喷雾电压:4500V，雾化气:50 psi,气帘气:35 psi,辅助加热气:30 psi，射入电压:10 V，驻留时间:40 ms ;NNK、NNN、NAT和NAB所选择的定量离子对分别为 208.1-122.1，178.1-148.2，190.1-160.1 和 192.1-162.1。
【文档编号】G01N30/88GK103837633SQ201410094994
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年3月16日 优先权日:2014年3月16日
【发明者】张小涛, 韩书磊, 陈欢, 刘彤, 吴帅宾, 侯宏卫, 胡清源 申请人:国家烟草质量监督检验中心