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专利名称：己烯雌酚残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒及其检测方法
技术领域：
本发明属于免疫检测技术领域，涉及一种化学品污染残留的检测试剂盒及其制备 方法，具体涉及一种检测己烯雌酚残留的时间分辨免疫分析试剂盒及其制备方法。
背景技术：
己烯雌酚(diethylatilbestrol，DES)属于人工合成激素，己烯雌酚(简称DES) 为第一个口服有活性的人工合成雌激素，化学名为1，2-2_双(4-2-羟苯基)21，22 二乙基 乙烯，俗名乙底酚，为无色结晶或白色结晶性粉末，是目前国内医学临床最为广泛应用的合
成激素，其结构式如式(I)所示
权利要求
一种检测己烯雌酚残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒，其特征在于包括包被了己烯雌酚抗原的酶标板、己烯雌酚抗体、镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体；所述镧系元素为Eu3+、Tb3+、Dy3+或Sm3+。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述己烯雌酚抗原是将己烯雌酚和载体 蛋白偶联得到；所述己烯雌酚抗体包括单克隆抗体、兔多克隆抗体或基因工程抗体。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于还包括己烯雌酚标准溶液、增强液、浓缩 洗涤液和样品稀释浓缩液。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述己烯雌酚标准溶液是以浓度为 1000 μ g/L的己烯雌酚标准品配成的浓度梯度为8μ g/L、4μ g/L、2μg/L、lμ g/L、0. 5μ g/ L,0μg/L的己烯雌酚标准品工作液。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述增强液包括β-二酮体、三辛基氧化 磷(TOPO)、Triton X-100、冰醋酸和pH值为2. 0 3. 2的邻苯二甲酸氢钾。
6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述浓缩洗液包括0.5 1. 5%吐温20 的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液PH值为7. 4，浓度为0. lmol/L ；所述浓缩稀释液为pH 值 7. 4 8. 0,0. 1 0. 25mol/L 的 Tris-HCl。
7.根据权利要求1所述的时间分辨免疫分析试剂盒，其特征在于所述酶标板是96孔酶 标板，包被有浓度为75 μ g/L抗己烯雌酚抗原，并封闭微孔表面未吸附位点；所述封闭液包 括溶于PBS的脱脂奶粉溶液。
8.一种己烯雌酚的检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)样品前处理；(2)用权利要求1 7任一项所述的试剂盒进行检测；(3)结果处理与分析。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于所述样品前处理为(1)尿液样本处理清澈尿液样品可以直接进行检测分析；若尿样呈浑浊状，2000r/min离心5min或过滤， 用上清液检测；或(2)饲料样本处理将饲料粉碎，称取Ig置于50mL试管中，加入IOmL乙酸乙酯，充分混勻振荡lOmin， 5000r/min离心lOmin，取有机相ImL有机相于另一试管中，减压旋蒸干，加入2mL正己烷溶 解样品；加入ρΗ7· 0的PBS-甲醇(3 2)溶液2mL，漩涡振荡5min, 4000r/min离心lOmin, 除去上层正己烷，取下层溶液50 μ L待测；或(3)组织样本处理所述组织包括肌肉、肝脏或肾脏；将组织破碎和均质化，称取3g均质化后的组织，加入 乙酸乙酯9mL，无水氧化钙0. 3g，漩涡振荡10min，4000r/min离心l0min，去上清6mL蒸干， 加入正己烷2mL溶解残渣，加入pH7.0的PBS-甲醇(3 2)溶液lmL，漩涡振荡5min，4000r/ min离心lOmin，除去上层正己烷，取下层溶液50 μ L待测。
10.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于包括以下步骤(1)将试剂盒从冷藏环境中取出，置于20 24°C环境中平衡不少于30min，将酶标板条 固定，做平行实验，按顺序编号；(2)在标准品孔加入50μ L标准溶液，样品孔加入50 μ L待测样品，然后每孔加入 50 μ L己烯雌酚抗体工作液，混勻；振荡反应；(3)步骤(2)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入100μ L铕标二抗工作液，振荡反应；(4)步骤(3)所述振荡反应后洗板，拍干，每孔加入200μL增强液，混勻，振荡；(5)用时间分辨免疫分析检测仪测定各孔荧光值；(6)根据标准溶液荧光值与浓度半对数做标准曲线，根据标准曲线与样品溶液荧光值 计算样品浓度。
全文摘要
本发明提供了一种己烯雌酚残留的时间分辨免疫分析检测试剂盒及其检测方法。本发明所述试剂盒包被有己烯雌酚抗原的酶标板，镧系元素标记羊抗兔或羊抗鼠抗体、己烯雌酚抗体等。本发明还公开了应用上述试剂盒检测己烯雌酚残留的方法。本发明提供的检测己烯雌酚的试剂盒采用间接竞争时间分辨免疫分析技术，灵敏度高、稳定性好，大大简化了操作步骤和反应时间，减少了因操作复杂引起的误差，降低了成本，非常适合大量样品的筛查，具有重要的现实意义。
文档编号G01N21/75GK101988923SQ201010268979
公开日2011年3月23日 申请日期2010年8月31日 优先权日2010年8月31日
发明者孙远明, 徐振林, 李丽华, 杨金易, 沈玉栋, 王弘, 雷红涛 申请人:华南农业大学