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专利名称：一组特异性多肽及其在制备肺癌早期诊断试剂中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一组特异性多肽，还涉及该组多肽在制备肺癌早期诊断试剂中的用途。
背景技术：
血清多肽组谱图(简称多肽图)是指通过质谱技术快速分析获得的血清中多肽 (蛋白质)组的精确质量数的谱图。在谱图中以精确质量数标识的多肽(蛋白质)峰在必要时可进一步通过生物质谱分析获得蛋白质序列。血清多肽图可在数分钟时间内通过微量血液的生物质谱分析获得，已在恶性肿瘤早期诊断中显示出了良好前景，预兆了医学分子诊断领域的一次重要突破，为肿瘤患者早期发现带来了福音。血清多肽图作为一种全新的诊断方法，已经取得了令人振奋的进展。Petricoin博士等科研人员应用血清多肽图技术成功地对早期卵巢癌进行了诊断。(Emanuel FP, Ardekani AM, Hitt ΒΑ, et al. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet 2002 ；359 572-7.)他们利用生物质谱技术分析健康对照组和疾病组血清多肽组的组成模式，并基于这些模式寻找差异点进行临床卵巢癌的检测。该方法检测卵巢癌显著优于传统的CA125检测，特别是对早期卵巢癌(I期)的诊断也十分成功，提示此项技术还可望用于卵巢癌的早期或预警检测。美国斯坦福大学的Soltys通过血清多肽组图谱技术对鳞状上皮细胞癌进行诊断(Soltys SG, Le QT, Shi G，et al. The Use of Plasma Surface-Enhanced Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry Proteomic Patterns for Detection of Head and Neck Squamous Cell Cancers. Clinical Cancer Research 2004 ； 10 :4806-4812.) ；2005 年台湾大学 Cheng AJ 等在 Clinical Chemistry 上发表了他们利用血清多肽组图谱技术对口腔癌进行诊断的结果。此外，JCI.Mollecular&Cellular ftOteomics等杂志最近也发表了系列的通过血清多肽图技术对疾病进行诊断的研究结果 (Villanueva J, Shaffer DR, Philip J, et al. Differential exoprotease activities confer tumor-specific serum peptidome patterns. J Clin Invest 2006 ；116 :271-284. Villanueva J, Martorella AJ, Lawlor K, et al. Serum peptidome patterns that distinguish metastatic thyroid carcinoma from cancer-free controls are unbiased by gender and age. Mol Cell Proteomics 2006;5:1840-1852·)。以上表明，利用多肽图技术对临床上一些重大和疑难疾病进行诊断已经初露曙光，前景广阔。但是多肽图技术作为肿瘤诊断工具，在技术上还存在瓶颈。概括起来有两方面第一，血清多肽组快速分离和制备技术。它需要满足快速性、有效性、稳定性、标准化和通量化，才能真正符合未来临床诊断的需要；第二，多肽图中疾病特征峰的识别、鉴定和模型建立。它不同于单个疾病标志物的应用，而是数十甚至逾百个血清多肽的不断组合的变化。这样复杂的改变必须依靠生物信息学工具的应用，才可能识别出各种复杂疾病特征性的多肽组变化模式。在此基础上，才能获得标准化的多肽图疾病诊断模型，用于临床诊断和鉴别诊断，以及重大疾病的临床前预警。
与其它技术比较癌症的早期发现对于其治疗和控制至关重要。目前如CT、核磁共振、肿瘤特异性抗原检测等诊断方法在临床上还未能达到恶性肿瘤早期发现所需的灵敏度。高通量的基因组技术可以快速筛查癌细胞中的基因改变，如DNA芯片技术实现了在全基因组水平分析检测癌变过程中基因的异常活化或改变。但一些与肿瘤发生发展相关的改变可能与基因水平异常无关，而与基因表达产物——蛋白质的改变直接相关。酶联免疫吸附试验(ELISA)广泛用于在体液中单个、特异性已知的标志物的检测，但在临床上应用还依赖于新的标志物发现。血清多肽组技术使用复合的标志物较单个标志物更为可靠和有效，而且所反映的不仅仅是传统概念上的肿瘤标志物。多肽组的疾病相关改变，可能是蛋白质过量表达和蛋白质异常表达在血清中的反映，也可能是在疾病状态下机体整体机能反应的体现，而且随着疾病的发生和发展被修饰或移除。通过质谱分析获得的多肽图需要数字化并经成熟的生物信息学分析工具进行诊断，可与一个细胞或一个组织或一个机体在“正常”条件下的参考图谱进行比较，从而鉴别疾病样本的血清多肽组图谱。肿瘤是威胁人类健康的第一大杀手，而且发病年龄越来越提前。大多数肿瘤患者在发现时多已处于晚期，因此早期诊断显得十分重要，对患者的愈后与生存意义重大，理论和现实意义明显。血清多肽图技术在癌症早期诊断中已经显示的价值超过了传统的标志物检测，在肿瘤早期诊断方面传出了令人振奋的信息，给相对沉寂的肿瘤诊断领域带来了可以寄托的希望。到目前为止，尚未见到血清多肽图技术用于肺癌早期诊断的报道。

发明内容
为了解决肺癌早期诊断的问题，本发明公开了一组特异性多肽，其氨基酸序列如序列表中的序列1- 所示，各多肽的氨基酸序列及分子量M/Z如下表所示。
权利要求
1. 一组特异性多肽，其特征在于各多肽的氨基酸序列如下所示序列表中序列号氨基酸序列M/Z序列1VETRTIVRFNRPFLMUVPTDTQNrFFMSKVTNPKQA4355.17序列2LVETRTIVRFNRPFLMIIVPTDTQNIFFMSKVTNPKQA4468.33序列3SALVETRTIVRFNRPFLMIIVPTDTQNIFFMSKVTNPKQA4626.48序列4AELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEM(CH3)RDRA3378.77序列5GNTEGLQKSLAELGGHLDQQVEEFR2756.98序列6RNGFKSHALQLNNRQI1897.14序列7DDPDAPLQPVTPLQLFEGRRN2379.63序列8GLEEELQFSLGSKINVKVGGNS2306.57序列9PITVTVP VEVSRKNPKFMETVAEKALQEYRKKHREE4269.95序列10AVPPNNSNAAEDDLPTVELQGVVPR2603.84序歹丨J 11SSSYSKQFTSSTSYNRGDSTFESKSY (CH3)2948.02序列12SSSYSKQFTSSTSYNRGDSTFESKSYKMADEAGSEADH GTHSTK4786.97序列13SSSYSKQFTSSTSYNRGDSTFESKSYKMADEAGSEADH5904.23EGTHSTKRGHAKSRPV序列14DEAGSEADHEGTHSTKRGHA2093.08序列15DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRP2561.64序列16DSGEGDFLAEGGGVR1537.58序列17ADSGEGDFLAEGGGVR1466.50序列18NLGHGHKHERDQGHGHQ1945.02序列19KHNLGHGHKHERDQGHGHQ2210.34序列20HRIHWESASLL1349.53序列21THRIHWESASLL1450.63序列22SKITHRIHWESASLL1779.04序列23GHGLGHGHEQQHGLGHGHKF2128.27序列24SRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF2272.52序列SSRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF2359.60序列26PGVLSSRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF2726.06序列27MNFRPGVLSSRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF3274.73序列28SARLNSQRLVFNRPFLMFIVDNNILFLGKVNRP3891.62序列29PNHFRPAGLPEKY1526.73
2.权利要求1所述特异性多肽在制备肺癌早期诊断试剂中的用途。
3.根据权利要求2所述用途，其特征在于利用权利要求1所述特异性多肽建立肿瘤血清多肽图数据库，确定正常组与肿瘤之间的差异表达多肽组，建立诊断模型。
4.根据权利要求3所述用途，其中诊断模型的诊断准确率在90%以上。
全文摘要
本发明公开了一组特异性多肽，多肽的氨基酸序列如序列表中序列1-29所示，还公开了上述特异性多肽在制备肺癌早期诊断试剂中的用途。本发明的特异性多肽是通过血清多肽图结合生物信息学软件进行比较分析、识别差异表达的多肽，进而应用质谱分析鉴定的。利用本发明公开的特异性多肽，可以制备肺癌早期诊断试剂，具有广阔的应用前景。
文档编号G01N33/50GK102558329SQ201010581548
公开日2012年7月11日 申请日期2010年12月10日 优先权日2010年12月10日
发明者何昆, 张学敏, 李爱玲, 王娜, 王杰 申请人:中国人民解放军军事医学科学院生物医学分析中心