专利名称：双柱固相萃取-液相色谱法测定烟草中吡蚜酮残留量的方法
技术领域：
本发明属于痕量分析技术领域，具体涉及一种双柱固相萃取-液相色谱法测定烟草中吡蚜酮残留的方法。
背景技术：
吡蚜酮属于吡啶类或三嗪酮类杀虫剂，最早由瑞士汽巴嘉基公司于1988年开发，是全新的非杀生性杀虫剂，该产品对多种作物的刺吸式口器害虫表现出优异的防治效果。吡蚜酮对刺吸式口器害虫特别是蚜虫、白粉虱、黑尾叶蝉具有独特的防治效果，可用于多种抗性品系害虫的防治。因其具有的高选择性、对哺乳动物的低毒性和对鸟类、鱼类、非靶标节肢动物的安全性，在综合防治中显示出良好的发展前景。随着吡蚜酮在农业生产中的大量应用，其在环境和农产品上的残留问题也日益受到人们的关注。经对现有技术的文献检索发现，目前关于吡蚜酮残留量的测定方法，一般是采用乙腈、丙酮和水的混合溶液，调节PH酸碱性，提取水稻、蔬菜中的吡蚜酮农药残留，经二氯甲烷萃取或层析柱净化，用气相色谱-氢火焰检测器(FID)或者液相色谱进行检测。检测实践发现，目前已有残留分析方法虽然能够保证提取效率，但存在以下不足:1)由于采用有机溶剂和水的混合溶液作为提取剂，糖类、脂肪、蛋白质等杂质也容易被提取出来，对吡蚜酮的检测存在较大的干扰，虽然用二氯甲烷多次萃�。黾恿瞬僮鞑街瑁唤鲈黾恿斯ぷ髁浚胰菀自斐晌蟛�。2)提取和净化过程中需要反复调节pH，使得提取和净化过程相对繁琐。3)采用柱层析的方法不仅操作复杂，而且重现性差，并不适应于烟草类含大量色素、油脂、杂质的样品，净化不当，杂质峰极易干扰检测结果。《现代农药》2010年12期公开了一种吡蚜酮在水稻中的残留分析方法，它是用乙腈和水混合溶液提�。ヒ� SPE-C18柱净化，用液相色谱检测。实践发现，这种残留分析方法存在以下不足:1)去除烟草中杂质效果较差，烟草样品峰中存在大量杂质，影响结果判断的准确度。2)最低检测浓度偏高，不利于低含量吡蚜酮的测定。《烟草科技》2010年第5期公开了一种高效液相色谱法测定干烟叶中吡蚜酮含量，它是用乙腈超声提�。译娑啻蜗醇粒ü齈esticarb/NH2固相萃取小柱净化，用IOmL乙腈/甲苯(V:V,3:1)预淋洗，30mL乙腈/甲苯(V:V,3:1)洗脱。这种方法用来检测烟草中吡蚜酮残留量存在的缺陷是:1)对于极性和非极性两种不同杂质难以同时完全去除。2)对于鲜烟叶的提取净化效果欠佳。3)采用甲苯作为淋洗液和洗脱液，用量大，毒性强，对环境和人体安全存在潜在威胁。由于烟草样品本身的复杂性，现有检测吡蚜酮残留量的方法难于满足对烟草中残留检测的需要，极易造成结果的偏离，影响最终的检测结果和对吡蚜酮在烟草上合理使用的评估
发明内容
本发明的目的在于弥补现有吡蚜酮检测技术的不足，提供一种快速、准确的检测烟草中吡蚜酮残留的检测方法。该方法具有简便、准确、迅速、可靠的特点，对控制烟草中吡蚜酮残留、指导吡蚜酮在烟草上的安全合理使用具有重要价值。本发明是通过以下技术方案实现的:一种双柱固相萃取-液相色谱法测定烟草中吡蚜酮残留的方法，包括以下步骤::(I)标准溶液的配制:称取一定质量吡蚜酮标准品，用甲醇溶解定容，制成吡蚜酮标准储备液，将吡蚜酮标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液；(2)提取:称取烟叶样品置于锥形瓶中，加入烟草样品的3 30倍甲醇，经振荡后过滤，浓缩近干；(3)净化:浓缩瓶中残留物用水溶解，转入甲醇、水预淋洗的C18固相小柱中，甲醇-水混合溶液淋洗，甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，加入甲醇-二氯甲烷混合溶液溶解，转入甲醇-二氯甲烷混合溶液预淋洗的PSA固相小柱中，甲醇-二氯甲烷混合溶液洗脱，收集流出液，浓缩，定容；(4)检测:待仪器稳定后，用步骤(I)配制的系列浓度标准工作液进样，保留时间定性，液相色谱检测，在此基础上，对步骤(3)收集的净化样品进行液相色谱检测；(5)标准曲线的建立:以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；(6)结果分析:按以下公式计算试样中吡蚜酮的含量
权利要求
1.一种双柱固相萃取-液相色谱法测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于包括以下步骤: (1)标准溶液的配制:称取一定质量吡蚜酮标准品，用甲醇溶解定容，制成吡蚜酮标准储备液，将吡蚜酮标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液； (2)提取:称取烟叶样品置于锥形瓶中，加入烟草样品的:Γ30倍甲醇，经振荡后过滤，浓缩近干； (3)净化:浓缩瓶中残留物用水溶解，转入甲醇、水预淋洗的C18固相小柱中，甲醇-水混合溶液淋洗，甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，加入甲醇-二氯甲烷混合溶液重新溶解，转入甲醇-二氯甲烷混合溶液预淋洗的PSA固相小柱中，甲醇-二氯甲烷混合溶液洗脱，收集流出液，浓缩，定容； (4)检测:待仪器稳定后，用步骤(I)配制的系列浓度标准工作液进样，液相色谱检测，在此基础上，对步骤(3)收集的净化样品进行液相色谱检测； (5)标准曲线的建立:以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线； (6)结果分析:按以下公式计算试样中吡蚜酮的含量
2.根据权利要求1所述测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于:所述步骤(3)中的甲醇-水混合溶液，是指甲醇和水体积比为5:95的混合溶液；所述甲醇-二氯甲烷混合溶液，是指甲醇和二氯甲烷体积比5:95的混合溶液。
3.根据权利要求1所述测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于:所述步骤(4)中的液相色谱检测采用高效液相色谱仪-二极管阵列检测器，Waters Alliance 2695/2487，色谱柱:Waters X-Brige, C18 柱，5.0 Mm, 4.6 X 250 mm ;检测条件: 流动相:乙腈/水溶液，V: V为15:85至80:20 ;流速:0.8ml/min ； 测定波长:298 nm ； 柱温:30°C ; 进样量:10 μ _
4.根据权利要求1所述测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于:所述步骤(I)中的吡蚜酮标准储备液，是指称取0.01 g吡蚜酮标准品，用甲醇溶解定容至100 mL,制成100mg/L储备液。
5.根据权利要求1所述测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于:所述步骤(I)中的系列浓度标准工作液是指0.05,0.1,0.5、1.0,5.0、10.0 mg/L的吡蚜酮标准曲线工作液。
6.根据权利要求1所述测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于:所述步骤(2)中的烟叶样品，是指鲜烟叶、干烟叶中的一种。
7.根据权利要求1所述测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于:所述步骤(2)中的样品置于锥形瓶，是指2 20 g样品置于250 mL锥形瓶。
8.根据权利要求1所述测定烟草中吡蚜酮残留的方法，其特征在于:所述步骤(2)和(3)中的浓缩，是指用旋转蒸发仪将提取`样品在40°C 50°C的范围内浓缩近干。
全文摘要
本发明提供了一种双柱固相萃取-液相色谱法测定烟草中吡蚜酮残留的方法，包括以下步骤(1)标准溶液的配制称取一定质量吡蚜酮标准品，用甲醇溶解定容，制成吡蚜酮标准储备液，将吡蚜酮标准储备液逐级稀释，配制成系列浓度标准工作液；(2)提取用甲醇提取烟草中吡蚜酮残留；(3)采用双柱固相萃取净化；(4)液相色谱检测；(5)建立标准曲线；(6)计算分析吡蚜酮残留量。本发明的检测方法具有简便、准确、迅速、可靠的特点，对控制烟草中吡蚜酮残留、指导吡蚜酮在烟草上的安全合理使用具有重要价值。
文档编号G01N30/88GK103163266SQ20131008681
公开日2013年6月19日 申请日期2013年3月18日 优先权日2013年3月18日
发明者李义强, 王秀国, 孙惠青, 徐金丽, 徐光军, 郑晓 申请人:中国农业科学院烟草研究所
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
