专利名称：阿尔茨海默病的新型诊断制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及痴呆领域并且特别涉及神经退行性疾病领域，本发明主要针对阿尔茨海默病。更特别地，本发明涉及阿尔茨海默病临床前和临床中预兆的领域。本发明更特别地涉及一种来自待测的受试者或者患者的样本中的具体参数的新型神经化学方法或新型神经化学分析方法，其中实现了对阿尔茨海默病的发生或发展的预测的显著提高或推断出阿尔茨海默病的存在或者推断出阿尔茨海默病的临床前和临床中的预兆。更特别地，本发明涉及将来自受试者或者患者的体液样品中两种不同的淀粉样β_肽的定量比值用于测定他或她罹患阿尔茨海默病的概率，或者用于测定他或她罹患阿尔茨海默病的预兆。此外，本发明涉及可能用于测定受试者或者患者罹患阿尔茨海默病的概率的相应方法，或者用于推断所述疾病存在的相应方法。最后，本发明涉及一种试剂盒，该试剂盒提供测定患者或者受试者罹患阿尔茨海默病的概率的工具，或者提供测定所述受试者或者患者的临床前和临床中预兆存在的工具。
背景技术：
·痴呆通常是指在所述受试者或者患者中存在的与认知、情绪和社交技能有关的缺陷，随着疾病发展的影响该缺陷有时导致个人日常生活严重受损。痴呆的主要特征是丧失已经获得的技能，并且这可以特别地影响语言、运动技能和人格结构。痴呆通常与短期记忆明显恶化和智力水平严重退化相关。大部分的痴呆被称为神经退行性疾病，例如所讨论的阿尔茨海默病、额颞叶痴呆和路易体痴呆.神经退行性疾病通常是指一组中枢神经系统发展缓慢的疾�。渚哂幸糯曰蚺挤⑿岳丛椿蛞糯曰蚺挤⑿栽�。所述疾病的一个明显特征是神经细胞提前丧失，从而导致各种神经学病症。虽然患所述疾病的风险随着年龄的增长显著增加，但神经退行性疾病原则上可以发生在生命的各个阶段。神经退行性疾病一般有扩散或者全身化的过程并且通常每个人伴随着特有的组织学损害类型。神经退行性疾病最常见的形式之一是阿尔茨海默病，它通常并且在下文也缩写简称为“AD”。阿尔茨海默病同样也是一种神经退行性疾�。涑Ｔ诶夏耆酥蟹⑸�。因此，虽然阿尔茨海默病的相应预兆形式或者阿尔茨海默病的临床前和/或临床中的预兆形式也可以更早地发生，但是阿尔茨海默病中最常见的形式发生在65岁以上的人群中。神经退行性疾�。绕涫前⒍暮Ｄ〉幕疾÷收谙灾黾�。因此，到2009年底全球受阿尔茨海默病影响的人数估算约为3，500万人，并且照这样下去，据估计到2050年受阿尔茨海默病影响的人数将超过I亿。
全球神经退行性痴呆的患病率正持续地增加，因此公共卫生系统在未来将承受严重的社会经济压力。就此而论，阿尔茨海默病是痴呆的最常见类型。关于阿尔茨海默病的起因和分布，发现存在一定程度的家族聚集性，这是因为约15%到20%所测定的阿尔茨海默病例与特定的家族聚集性有关。所述病例尤其是这样一种情况，除了自身罹患阿尔茨海默病的他或她之外，那些来自该家族的兄弟姐妹、父母和祖父母等等也会受阿尔茨海默病的侵袭。仅在非常少量的患者中遗传因素也是很重要的，其具体包括在早老基因和APP基因(淀粉样蛋白前体基因)中的变异。然而，关于阿尔茨海默病的全部病例，与遗传相关的比例小于O. 5%，所以结论是所有阿尔茨海默病病例的绝大部分是偶发性的。阿尔茨海默病另一个特征是它与认知表现衰退相关，患病一段时间后，衰退增加，并且通常与日常活动的减少、行为古怪以及神经心理学症状相关联。就此而言，参考文献中也经常称阿尔茨海默病为阿尔茨海默型痴呆。在一定程度上，阿尔茨海默型痴呆是阿尔茨海默病的后果或者结果，用来描述疾病的进程。因此当脑损害的程度是如此之大从而导致 认知缺陷不能再通过仍然完整的神经元成功地补偿时，首先是指阿尔茨海默型痴呆。一般而言，术语“阿尔茨海默病”涵盖术语“阿尔茨海默型痴呆”。阿尔茨海默病能判定诊断的特异病症性特征是在患者大脑中形成斑块，这些斑块以错误折叠的淀粉样β_肽和在神经元中堆积的神经元纤维为关键特征。胞内神经元纤维束基本上由微管相关蛋白组成，当过度磷酸化时微管相关蛋白随后聚集形成所述纤维。在患病期间，神经元的死亡导致脑萎缩现象；此外，不再产生足够量的乙酰胆碱信使，其具体原因也是乙酰胆碱转移酶含量减少。淀粉样β_肽，其也可被称为β_蛋白、β_肽、A-β肽或Αβ肽，其形成于膜本体蛋白的淀粉样前体蛋白(APP)。APP为与氨基端一起存在于细胞外侧的I型跨膜蛋白。蛋白的羧基端相应地在细胞内侧。APP被称为分泌酶的特定蛋白酶裂解，并且所述分泌酶特别地是β-分泌酶和Y-分泌酶。在淀粉样蛋白途径过程的第一步中利用细胞外侧的β_分泌酶裂解APP时，APP裂解导致β-肽从前体蛋白中释放。随后，通过Y-分泌酶产生进一步裂解，该裂解产生在APP的跨膜区并导致Αβ-肽释放。由于β-分泌酶和Y-分泌酶的活性，Αβ_肽因此是形成于淀粉样前体蛋白的潜在神经毒性片段，该A β -肽通常具有37至42个氨基酸的长度。由此形成的A β -肽主要类型是具有40个氨基酸长度的A β (1-40)，而形成一小部分相应地具有42个氨基酸的Αβ (1-42)。长的Αβ (1-42)比短的Αβ (1-40)具有更高的聚集趋势。此外，可以形成许多更进一步的A β -肽，例如切除氨基端的A β -肽，例如A β (2-40)和A β (2-42)。现有技术中，Αβ -肽与阿尔茨海默病的病理学发展相关。在这一背景下，现有技术中已经尝试实施许多治疗方法，并试图使所述方法实现治疗阿尔茨海默病的目的。因此，治疗重点的一个方面是实现对上述A β -肽的免疫，尤其与在这方面特异的抗体的生物合成的诱导有关。进一步治疗方法包括发展和使用特异分泌酶抑制剂，特别地，预望该特异分泌酶抑制剂特异于前述β_分泌酶或者Y-分泌酶。然而，从治疗的角度来看，该方法在这方面仍无法令人满意或者该方法有时与严重的副作用相关联。进一步的治疗方法为乙酰胆碱酯酶抑制剂的控制给药，这种治疗方法应该会减少乙酰胆碱酶裂解，但这种情况在阿尔茨海默病患者中极少发生。然而，这不是影响疾病本身的治疗方法。这是因为乙酰胆碱酯酶抑制剂例如多奈哌齐、利伐斯的明和加兰他敏的给药目的是对阿尔茨海默病的对症治疗。在此方法的基础上，其可能仅仅是在有限时间内轻度地改善认知表现，或者保持在不变的水平。总之，迄今为止在现有技术中没有发现可以用于治愈阿尔茨海默病的治疗方法。尤其在目前缺少有效的治疗阿尔茨海默病方法的背景下，对该疾病非常早期的诊断显得尤为重要，并且该诊断需要在阿尔茨海默病的早期临床或者甚至临床前阶段时作出。这是因为它不仅首先可能基于预测或确定受试者或者患者是否罹患阿尔茨海默病的概率，而且其次可能基于在非常早期阻止该疾病的进一步发展。例如，人们普遍认为，例如常规运动、有针对性的记忆练习和有针对性的优化生活方式可以延缓或者减缓疾病的进程，并能延迟病情发作，即阿尔茨海默病的临床诊断。已经在临床前或者早期临床预兆水平中提出的阿尔茨海默病的早期诊断，对于治疗阿尔茨海默病的新疗法也具有重大意义。在这一背景下，现有技术中已经研究了大量预期实现非常早的诊断阿尔茨海默病的方法。例如，就此而言，普遍确立的临床方法非常重要，它们主要基于不同的诊断方法，包 括特别设计的认知能力测试以及家族记忆力(heteroanamnesis)测试，即考虑对患者的家族成员的观察。成像方法，例如也可以使用计算机X射线断层术或者磁共振体层摄影术，从而能够诊断阿尔茨海默病。然而，影响前述方法的缺陷在于它们首先常常涉及复杂的设备并且通常直到较晚或者晚期临床阶段才能诊断阿尔茨海默病。早期诊断阿尔茨海默病的还一方法包括分析受试者或者患者的体液，特别地，使用脑脊液(CSF)进行分析。这主要针对特定生物标记的分析，同时在本文中也针对体液中的特定的Αβ-肽的分析。然而，缺点是必须通过复杂的穿孔来获取样品，这样存在风险并且时常伴有疼痛，同时也时常与不希望的感染相关联。因此，体液取样仅可有限的用于研究可能的阿尔茨海默病的初次怀疑，并且例如，同样地存在于轻微的认知受损的患者中，仅有限的用于评估患有阿尔茨海默型痴呆的风险。现有技术已经在脑脊液中鉴别出痴呆的特定生物标记，因此早期甚至临床前阶段的阿尔茨海默病的可靠检测的诊断精确度据信已提高至一定水平。与血液分析相比，用于确认痴呆的神经化学CSF诊断方法(基于CSF神经化学痴呆诊断(CSF-NDD))具有高度侵入性并且更加疼痛、更为昂贵以及更加耗费时间。因此不能用于以继续检查为目的而进行的常规重复分析。因此非常需要取样简便且压力较小的替代检测方法，另外该方法也应该能够监测疾病过程或者治疗进展。
发明内容
因此，在上述背景下，本发明的目的在于对特定的方法和应用提供新的有效的概念，在此基础上能够在非常早尤其是在临床前或者早期临床阶段对阿尔茨海默病的存在或者对可能罹患阿尔茨海默病的预后出具报告。更特别地，在本发明内容中，提供容易操作并具有最小水平副作用的相应概念或者方法。同时，在本发明内容中，也应当确定用于本发明构思的目的的待分析样品的提供或者取样与受试者最轻的疼痛和最小副作用相关联，如果有任何这样的疼痛和副作用的话。
本发明另一目的是提供一种试剂盒，该试剂盒可以用于实现本发明构思的简单标准化操作，所述构思用于测定阿尔茨海默�。绕洳舛ò⒍暮Ｄ〉脑缙谛问�。最后，本发明的根本目的是提供前述类型的方法和应用以及试剂盒，它们各自能够避免或至少减少现有技术中存在的缺陷。 更特别地，在本发明内容中，来自特定样本的特定生物标记将以可控的形式进行使用，从而在此基础上能够对阿尔茨海默病的存在或任何发展作出非常早期的报告。更特别地，基于本发明，该目的也是以简单安全的方式实现观察已经确定的阿尔茨海默病进程或者了解治疗方法有效性。为了实现上述目的，如权利要求I所述，本发明提出(根据本发明的第一方面)将受试者或者患者体液样本中的两种不同淀粉样β_肽的至少一个定量比值用于测定他或她 罹患阿尔茨海默病的概率，或者测定他或她患有阿尔茨海默病的预兆症状；此外，本发明这一方面的有利形式是它的从属权利要求的内容。如权利要求31所述或如权利要求32所述，本发明还提供了(本发明的另一方面)测定受试者或者患者罹患阿尔茨海默病的概率的方法；此外，本发明这些方面的另一个有利形式是所述权利要求的从属权利要求的内容。最后，本发明还提供(本发明的还一方面)如权利要求34所述的试剂盒，该试剂盒能够特定地用于测定患者或者受试者罹患阿尔茨海默病的概率，或者可以特定地用于测定他或她患有阿尔茨海默病的预兆症状；此外，本发明这方面的有利形式是所述权利要求的从属权利要求的内容。将可以预见到仅与本发明一个方面相联系的具体形式、实施方案等等的描述在下文中也相应地用于本发明的其它方面，而不需要详细提及。此外，以下引用的所有实验调查或研究等基本上可以通过本领域技术人员公知的或标准化的或明确说明的方法或步骤进行操作。因此，本发明的第二方面提供了将受试者和/或患者体液样本中的两种不同淀粉样肽(Α-β ;Αβ)的至少一个定量比值(系数)用于测定他或她罹患阿尔茨海默病(AD)的概率(风险)和/或测定(诊断)他或她患有阿尔茨海默病的预兆症状的应用，其中淀粉样β_ 肽选自(a)[email protected] (1-42)、α)Αβ (2-40)和(c)[email protected] (2-42)并且其中形成(a) / (b)或(b) / (a)和/或(a) / (c)或(c)/ (a)的定量比值。因此，在本发明内容中，令人十分惊讶的是可以通过上述的基于特定淀粉样β -肽的比例的发明应用实现本发明的目的。在本文中，同样出乎意料的是可以使用所述比例，可靠地测定阿尔茨海默病的存在，或为了可靠地预测性地测定阿尔茨海默病的进展。现有技术基本上公开了这种淀粉样肽的存在和阿尔茨海默病之间的联系，并且在现有技术中淀粉样β_肽应用的普遍方面也被认为与阿尔茨海默病的诊断有关；然而，直至本发明的出现，现有技术中还没有任何考虑本发明的所述淀粉样肽的特定比例的构思(并且此外，更特别地，基于非常特定的样本的使用，如下文将要详述的)从而由此确保对阿尔茨海默病的存在有理由充足或可靠的报告或可靠预测或预知受试者/患者的阿尔茨海默病的形成或进展。在本发明内容中，令人十分惊讶的是特定淀粉样β -肽的具体比例与阿尔茨海默病的存在有显著关联，因此，特定淀粉样β-肽的具体比例可用作阿尔茨海默病存在的可靠指标，甚至在疾病的早期，例如阿尔茨海默病的临床前和早期临床形式。本发明的范围包括一种基于体液的有效样本尤其是基于血液样本的可以体外或体内操作的用途或方法，其确保了有简单可行性的良好标准化。此外，本发明构思显著地减少了受试者/患者的压力，因为可以获得潜在的尤其基于血液的样本，而没有任何显著的损害或者副作用。因此，本发明的一个基本概念是在测定两种特定淀粉样β -肽的定量比值的基础上，针对阿尔茨海默病的发展，使有意义或者可靠的预知或者预测成为可能。然而在本发明内容中，不仅是有意义的预测或预知阿尔茨海默病的发展或者进展的可能；而且还在分析有效样本中两种特定淀粉样β_肽的定性比例的基础上，本发明允许有意义的测定或者诊断阿尔茨海默病或者阿尔茨海默型痴呆的任何存在-并且已经在疾病非常早期阶段，因此这已经可以在临床前或者早期临床阶段进行测定。在本文中，申请人已经十分惊讶地发现，来自体液优选血液样本的一方面的淀粉 样β-肽Αβ (1-42)与淀粉样β-肽Αβ (2-40)的精确地特定比例或另一方面淀粉样β-肽Αβ (1-42)与淀粉样β-肽Αβ (2-42)的精确地特定比例，对阿尔茨海默病存在的分析或阿尔茨海默病发生的预知具有非常有意义的结果。因此本发明基本原理集中于体液尤其是基于血液样本的前述特定淀粉样β_肽作为针对阿尔茨海默病或其前期症状预兆的生物标记的神经化学分析，从而以这种方式使对受试者或者患者的阿尔茨海默病的前述报告成为可能。在本发明内容中，同样可能的是能够排除其它痴呆类型从而使鉴别诊断阿尔茨海默病成为可能，因为(以一种完全意外的方式)申请人已经发现在确定样本中的前述淀粉样β_肽的非常特定的比例对阿尔茨海默病或其预兆或早期形式是非常特异的。这被认为是本发明的另一主要优点。根据本发明，前述特定淀粉样肽(即一方面是Αβ (1-42)，和另一方面是Αβ(2-40)或者Αβ (2-42))作为指示的生物标记起作用，由于以它们各自特定浓度而从中得到的相互之间的特定比例对患者或者受试者的阿尔茨海默病的存在是特定的。因此，所述淀粉样β_肽及其在样本中的特定浓度或特定量与阿尔茨海默病相关联。因此，在一定程度上，所述淀粉样β-肽是阿尔茨海默病期间病理过程的指示物。本发明构思是非常有意义的，首先是因为它基于确定的样本中确定的神经化学生物标记的分析，这些生物标记直接与阿尔茨海默病相关联。此外，其次，与在现有技术中使用的方法例如心理测验方法、神经影像方法等等相比，将在下文中详细描述的本发明的用途和方法可以以非常简便和低廉的方式进行操作。在应用上述类型的特定生物标记或者生物指示剂的基础上(除了涉及在受试者或者患者中是否存在阿尔茨海默病或者涉及关于受试者或者患者是否具有一定的概率将罹患阿尔茨海默病的报告之外)，也可能做出关于任何治疗活性物质对阿尔茨海默病的过程有积极效果的治疗程度的进一步报告，这意味着同样可以将生物标记用作任何药物效果的指示物。在本发明构思的基础上，本发明的特征在于能够对阿尔茨海默病或者该疾病的发生概率进行快速且具有意义的分析，另外，对于患者更特别地是对于样本准备，如果有任何压力的话，其仅与低水平的压力相关。因为由本发明所提出的在临床前或者早期临床阶段时测定阿尔茨海默病的可能性，或者由于随后对受试者或者患者生命中任何阿尔茨海默病的发生作出报告的可能性，甚至可能在非常早的阶段，或者为了预防的目的，对可能的阿尔茨海默病作出反应，例如对受试者或者患者的生活方式作出相应的优化，或者对药物进行定向给药，其可以例如改善受试者或者患者的认知能力或者延迟疾病的进展。特别地，下面的肽A β (1-42)是具有42个氨基酸长度的淀粉样β_肽，其第一位置或者氨基端由天冬氨酸形成，而Αβ (2-40)和Aβ (2-42)分别是具有40个氨基酸和42个氨基酸长度的淀粉样β_肽，其各自去除了氨基端。上述特定淀粉样β_肽的结构和命名对本领域技术人员来说是公知的，因此在这一方面不需要进行任何进一步的详述。特别地，本发明内容中使用的术语“定量比值”或者“系数”指的是所述淀粉样β -肽彼此之间的相对浓度或相对量，因此指的是上述淀粉样β -肽的相对定量。相应淀粉样β_肽的浓度或量及由此产生的比值测定可以在本领域技术人员公知的分析方法的基 础上确定或者发现。一种根据本发明测定各自比例的优选方法将在下文中进行详细举例，该方法基于利用随后的蛋白分离和测定方法的免疫沉淀法。在本发明内容中，受试者或者患者通�？梢允侨死嗷蛘叨锷问剑乇鸬厥遣溉槎铩８乇鸬兀苁哉呋蛘呋颊呤侨死�。对于来自受试者或者患者的样本或体液，以非限制的形式，可以包括来自或形成于受试者身体的体液。特别地，该样本或者体液可以是血液、血浆、淋巴液、尿液和/或脑脊液。如在下文中更详细的说明，在本发明内容中，基于应用例如血浆或者血清的血液的体液是特别有利的，尤其是因为在这一基础上(以十分令人惊讶的方式)可能得到特别有意义的结果，并且又简化取样。此外，基于根据本发明的用途或方法，在本发明内容中将分析来自于受试者或者患者的体液样本，所述受试者或者患者可能有脑部功能衰退的症状，特别是患有轻微的脑部功能衰退，优选记忆力衰退，特别是达到轻微的记忆力衰退。此外，特别地，受试者或者患者可能有轻度认知损伤症状(MCI)。特别地，轻度认知损伤(MCI)可能是初期的痴呆或者单独的记忆力损伤。一般而言，在本发明用途或方法中待进一步考虑或检查的受试者或者患者具有认知损伤或认知缺陷，这在年龄和体质相仿的个体中更为显著。更特别地，轻度认知损伤(MCI)的特征在于该症状并不(到目前为止)显著到在受试者或者患者的日常活动中引起持续的损伤。特别地，本发明用途或者方法尤其涉及罹患轻度认知损伤(MCI)的患者或受试者，因为罹患轻度认知损伤的人通常具有更高的后续患阿尔茨海默病的概率。因此，研究显示每年有10%到15%受轻度认知损伤影响的人患上阿尔茨海默病。然而，本发明通常不限于罹患轻度认知损伤(MCI)的受试者或者患者，为此，可以使用本发明用途或方法对阿尔茨海默病是否存在和阿尔茨海默病是否有后续发展的风险的诊断说明。此外，还可以检查那些没有认知损伤特定症状的受试者或者患者或者(更特别地对鉴别诊断)那些至少怀疑有除了阿尔茨海默病以外的痴呆的患者或受试者。对于在本发明的基础上可以被测定或者诊断的阿尔茨海默病的预兆，尤其是阿尔茨海默病临床前或者亚临床阶段。特别地，阿尔茨海默病的临床前预兆可以是初期或前期的阿尔茨海默病，其也被称作AD初期。换言之，在本发明内容中，阿尔茨海默病的预兆可以是初期阿尔茨海默病或可能的阿尔茨海默病。更特别地，初期的阿尔茨海默病可以是利用现有技术确立的诊断方法还不能在这一疾病阶段被诊断为阿尔茨海默病的阿尔茨海默病的预兆。根据本发明，可以在本发明的用途或者方法的基础上测定的阿尔茨海默病预兆也可以是阿尔茨海默病的临床阶段。更特别地，阿尔茨海默病的预兆也可以是阿尔茨海默病早期，它也可以被称作AD早期。更特别地，阿尔茨海默病早期可以是在现有技术已知方法的基础上已经可以临床上诊断的阿尔茨海默病早期阶段。更特别地，阿尔茨海默病预兆可以是患有认知缺陷的阿尔茨海默病晚期阶段，但是其中的认知缺陷还没有发展到给受试者或者患者的日常生活造成严重损害的程度。根据本发明，更特别地考虑以上对于术语“阿尔茨海默型痴呆”的评论，因此在本发明构思的基础上能够对受试者或者患者中的阿尔茨海默型痴呆的存在或进一步发展作出报告，更特别地是在阿尔茨海默型痴呆的相应临床前和/或临床阶段基础上，该阿尔茨 海默型痴呆是在潜在的阿尔茨海默病的基础上和/或由于潜在的阿尔茨海默病而导致的。基于此，本发明的用途或者方法因此甚至可以在能够延迟或减缓阿尔茨海默病进展的早期阶段的初始方法背景下进行，为了由此能够尽可能长时间的维持患者或者受试者的生活质量。在优选的方式中，所述淀粉样β -肽的比例是基于量或者浓度的比例。根据本发明，当(a)AP(1-42)/ α)Αβ (2-40)的比值[即 A β (1-42) /Αβ(2-40)的比值或(a)/ (b)的比值]和/或(a)Ai3 (1-42)/ (ο)Αβ (2-42)的比值[即Αβ (1-42)/A β (2-42)的比值或者(a)/ (c)的比值]，优选(a)AM (1-42)/ α)Αβ(2-40)的比值[即Αβ (1-42)/Aβ (2_42)的比值或者(a) / (c)的比值]形成时，可以在阿尔茨海默病的鉴别或者患阿尔茨海默病风险的测定方面得到特别好的结果。根据本发明同样特别优选的是将受试者或者患者的血液用作测定所述淀粉样β_肽的定量比值的样本。在本文中，将本发明内容中将受试者或者患者的血浆(血浆)或者血清(血清)、优选血浆(血浆)用作样本是特别有利的。换句话说，在本文中令人十分惊讶的是在受试者或患者的血液中、尤其在血浆或血清中存在与阿尔茨海默病相关的特定的所述淀粉样β_肽的比例的显著变化(并且也尤其与疾病的早期阶段相关)。因此，在本文中，本发明是基于申请人十分惊讶的发现(不希望对该理论做任何限制):在阿尔茨海默病过程中(并且甚至也在该疾病的早期阶段)，在某种程度上，整个有机体或者身体中有整体或主要的病理学上的“变化”，这也与血液中的所述淀粉样β_肽的各自浓度的显著变化相关。所有物质的血液或血浆和/或血清可以被用于诊断阿尔茨海默病存在的事实令人更加惊讶的是，到目前为止至关重要的是人们已经假设在该疾病过程中，血液中的淀粉样肽本身没有受到影响，而主要在脑组织本身或与脑相联系或相关的体液中的淀粉样β -肽受到影响，例如脑脊液，并且因此在某种程度上，独立于脑本身的次要的体液的血液，在现有技术中还未被引作淀粉样β-肽变化的关键指示物。作为待分析的样本的血液或者血浆和/或血清的应用的令人十分惊讶的适用性也是基于申请人十分惊讶的发现更特别地也是在阿尔茨海默病的早期，在受该疾病影响的患者体内有特定生理参数的根本“变化”，并且也在受影响的患者血液中以特定的方式反映出来，特别地涉及前述特定淀粉样β-肽的比例。同样地，在本文中令人十分惊讶的尤其是可以使用特定的淀粉样β_肽Αβ(2-40)，因为在许多其它组织或身体组成中并不能以这种方式检测到特定的淀粉样β -肽Αβ (2-40)。也是在这一亮点中，本发明内容中完全出乎意料的是，为了能够对阿尔茨海默病的测定或者患所述疾病概率的测定作出可靠的报告，可以使用血液或者血浆和/或血清中特定的淀粉样β_肽的比例，即，该特定的淀粉样β_肽一方面是Αβ (1-42)以及另一方面是 Αβ (2-40)或者 Αβ (2-42)。另一个优点是可以通过简单的方式获得血液，并且血液取样对患者或者受试者来说是无痛并基本无风险。这被认为是本发明的另一个至关重要的优点。在本发明的优选实施方案中，更特别地，因此提供基于血液或者基于鉴定痴呆的血液检查的神经化学分析或者测定，这在例如本文的相应诊断方法中是可用的(基于血液的神经化学痴呆诊断学(血液-NDD))。因此，本发明构思的特征是，首先，对阿尔茨海默病的测定非常有意义的构思(尽管样本中待分析的淀粉样β -肽的浓度普遍低)以及，其次，给患者提供温和的方式的构思，且适于重复使用，例如为了后续检查的目的等等。对于关于分析样品以测定相关比例的操作，可使用现有技术中已知的大量纯化和分析方法。·当以逆流纯化或者分离步骤、尤其通过免疫沉淀法将淀粉样β_肽(尤其是一方面(a)Ai3 (1-42)和另一方面(b)Ai3 (2-40)和/或(c) Αβ (2-42))从样本中有效地移出或者分离时，可以获得特别好的结果。该纯化可以通过从潜在样本中有效的采集不同类型的淀粉样β-肽进行操作，该淀粉样β-肽包括(a) Αβ (1-42)和(b)Ai3 (2_40)和/或(c)Ai3 (2-42)。这提高了分析精确度。在本文中，在免疫沉淀过程中尤其可能使用至少一个特异于淀粉样β_肽或与之结合的配体，优选至少一个抗体。在这一方面,至少一种配体,优选至少一个抗体,可能特异于(a)AP (1-y)和/或Αβ (2-y)型淀粉样β-肽，其中y是从37到43的整数。在本文中，特别地，变量y表示与其羧基端有关的肽的长度。此外，根据本发明，优选特异于(a) Αβ (1-42)和/或(b)Ai3 (2-40)和/或(c)Αβ (2-42)的配体或者抗体。此外，至少一种配体、优选抗体，可能特异于(a)Ai3 (1_42)和/或(b)A β (2-40)和/或(ο)Αβ (2-42)的氨基端。更特别地，根据本发明，可以使用至少对所述特定淀粉样β-肽Αβ (1-42)、Αβ(2-40)和Αβ (2-42)至少有基本上相同的灵敏度或者特异性的配体或者抗体，与之相关的优点在于在纯化步骤过程中仅需使用单个配体或者抗体类型。然而，此外，也可能使用对待分离或分析的淀粉样β_肽分别有特异性的几种不同类型的配体或者抗体。例如，根据本发明，可能使用1Ε8型抗体。该抗体对淀粉样β_肽特别敏感，所述淀粉样β-肽的氨基酸序列在第I位有天冬氨酸，例如(a)Ai3 (1-42)，或者在第2位有丙氨酸，例如(b)Ai3 (2-40)或者(c)A β (2-42)。1Ε8型抗体例如可以在商业地从德国柏林拜耳先灵制药股份公司购买。更特别地，根据本发明，优选的抗体在EP 1270592Α1中描述，它的全部内容通过引用纳入本文。此外，关于所述样本分析，更特别地是在离析或分离或纯化经过预处理的待测定的淀粉样β_肽后，各个淀粉样β_肽、尤其是一方面的(a) A β (1-42)和另一方面的(b)Αβ (2-40)和/或(c)A0 (2-42)的测定，特别是量或者含量和/或浓度的测定，可以在蛋白分离方法或者免疫检测性蛋白检测方法、尤其是免疫检测性蛋白检测方法，优选为蛋白分离方法和免疫检测性蛋白检测方法组合、尤其是定量免疫检测性蛋白检测方法的基础 上进行。根据本发明，特别地可以以这样一种方式进行对上述纯化方法过程中获得的包括各种淀粉样β-肽的组分相应地进行进一步处理或分析。在本文中，所使用的蛋白分离或者蛋白检测方法可以，例如是凝胶电泳法，尤其是双向凝胶电泳，优选为基于尿素的双向凝胶电泳。此外，所使用的蛋白分离或者蛋白检测方法可以是蛋白印迹法。当所述特定淀粉样β_肽的检测是在双向凝胶电泳尤其基于尿素的双向凝胶电泳与下游蛋白印迹法组合(2D-Ai3 -WIB)的基础上进行时，可以得到特别有利的结果。此外，对于在本发明内容中所使用的蛋白分离或者蛋白检测方法，也可能在免疫检测性蛋白检测法的过程中、尤其是定量免疫检测性蛋白检测方法，优选在蛋白印迹法中，使用至少一种配体、优选抗体，对淀粉样β_肽进行标记，尤其是通过与所述淀粉样β_肽直接结合或者直接作用的第一配体或者第一抗体首先标记步骤的方式。在本文中，至少一种配体、优选抗体应当特异于Aβ (1-y)和Αβ (2-y)形式的淀粉样β -肽,其中y是从37至43中的整数。此外，在免疫检测性蛋白检测方法、尤其是定量免疫检测性蛋白检测方法过程中使用的配体或者抗体，应当特异于(a)A0 (1-42)和/或(b)A0 (2_40)和/或(c)Αβ (2-42)。此外，至少一种配体、优选抗体，应当对(a)Ai3 (1_42)或者(b) Aβ (2-40)和/或(c)A0 (2-42)的氨基端是特异的。对前述淀粉样β_肽，使用至少有基本上相同的灵敏度的配体类型或抗体类型是可能的，这也是免疫检测性蛋白检测方法、尤其是定量免疫检测性蛋白检测方法的例子。例如，可使用上述1Ε8型抗体。此外，也可使用分别对单个的淀粉样β_肽有特异灵敏度的各种类型的配体或者抗体。可以通过使用本领域技术人员已知的相应的第二配体或者第二抗体进行特异性检测，为了检测，可以将酶或者染料、尤其是荧光染料，连接到它们上，所得结合物能够发出可检测且可评价的测量信号。例如，根据参照追踪，可以进行特定淀粉样β -肽的鉴别或分配。基本原理对本领域技术人员来说是众所周知的。对于为了进一步详细说明可在本发明文中使用的所述样本分析方法，特别地可以参考 Maler, J. Μ.发表的科学出版物“Urea basedtwo-dimensional electrophoresisof beta-amyloid peptides in human plasma!Evidence for novel Αβ species”，Proteomics, 2007，7，3815-3820，其全部内容通过引用纳入本文。在用于样本中所述淀粉样β_肽的定量测定的上述引用组合的基础上，基于上游免疫沉淀反应和下游、尤其是定量，免疫检测性蛋白检测方法，确保了对各个淀粉样β -肽定量测定的高精确度。由于本发明文中用于样本中淀粉样β-肽定量测定的方法规则，检测或者记录极低浓度的所述肽类是可能的，并且甚至能检测渺摩尔范围内的数量或含量。在关于受试者或者患者罹患阿尔茨海默病的概率(风险)或者他或她有阿尔茨海默病预兆的测定的样本分析过程中建立起来的对所述淀粉样β-肽特定比例的评价或分类，在本发明文中以这样一种方式进行可能是有利的将两个不同淀粉样β_肽的定量比值，尤其是如上定义的，与相应的参照比值相联系或相比较，或者将其分配给这些参照比值。换言之，从分析的样本获得的淀粉样肽的比例的分类可以在与参考系统或参考数值或参考数值范围比较的基础上进行，如下将描述的相应参考参数，所述参数以统计数据的形式获得，例如将一组受试者或者患者作为参考。这可以通过这样的方式完成例如,在现有技术已知的诊断方法、如心理测验、神经化学和/或神经影像方法的基础上，初次检查一组参考受试者的认知衰退或阿尔茨海默 病预兆的存在，任选地可追溯的包括阿尔茨海默病的后续实际发展，并以此作为基础进行有关诊断发现的表型或者归类到具有特定的临床症状或诊断的特定参照组，以及，在这些预先测定或形成的参照组中，也以同样的方式分析样本中淀粉样β_肽的特定比例并且特别地进行统计概括。随后将基于所述受试者或者患者中发现的特定比例与所述参照组中发现的同样类型比例的相互关系或比较,对待检查的受试者或者患者进行分配。例如，在本发明内容中的步骤可以使用定量比值与相应参照比值的比较或相互关系来确定患阿尔茨海默病的概率，和/或确定或诊断有阿尔茨海默病预兆的存在。在本文中，在一方面待检查的受试者或者患者与另一方面的参照组比较的比值的情况下使用的术语“相应地”，尤其是指相同或可比较的比值，即，尤其是指相同的淀粉样β-肽的相应比值。例如，以一种非限制性的方式,受试者的(a)AP (1-42)/ α)Αβ(2-40)的比例可以与参照组的相关测定的比例(a)Ai3 (1-42)/ (b)A^ (2_40)相比较。特别地，参照组测定的比例是一组属于参照组的患者的统计(平均)值或者数值范围。从基于例如可能预先已经确定的众多受试者的统计比例意义上说，测得的参照比例因此尤其是与一组参照受试者或者参照患者有关的测得的数值或数值范围。在本文中，所测定的数值或者数值范围尤其是具有相应标准差的统计学测定的数值范围或者统计平均值，该标准差可能是分类的基础。在本发明内容中，优选在受试者和/或患者的参照组的定量参照比例的基础上进行测定，或将其作为基础进行测定。在本文中，更特别地为了生物统计评价的目的，可以检查受试者参照组的参照受试者或者患者参照组的参照患者的轻度认知损伤(MCI)和/或阿尔茨海默病临床前预兆、尤其是初期的或者前期的阿尔茨海默病(AD初期)，和/或阿尔茨海默病的临床预兆、尤其是早期的阿尔茨海默病(AD早期)的存在与否。此外，在本发明内容中，在选自神经化学方法、神经影像方法、心理测验方法以及至少两种前述方法组合的检查方法的基础上可以进行检查或者评价，优选在所有前述方法组合的基础上。在某种程度上，以这种方式将相应的参照受试者或者参照患者的临床症状分类是可行的。此外,在本发明内容中优选对受试者参照组或者患者参照组的检查或评价在至少一个黄金标准(GS)、尤其选自临床黄金标准、神经化学黄金标准、心理测验黄金标准和至少两个前述黄金标准的组合的基础上进行，优选在所有前述黄金标准组合的基础上。如在本发明内容中使用的术语“黄金标准”(也称作GS)特别地涉及(检查)标准，其通常在特定的检查时间得到认可并且在“最佳实践”的情况下得到对疾病诊断特别有意义的结果。因此黄金标准通常构成实际或重要标准。本发明内容中使用的关于分析参照受试者或者参照患者的黄金标准对本领域技术人员来说是众所周知的。更特别地，对于参照数值的测定或评价可以在包括心理测验、神经化学或者神经影像方法或参数的黄金标准的基础上进行。例如，可以在神经化学方法的基础上进行测定或评价，神经化学方法包括脑脊液(CSF)参数的测定；更特别地，可以测定Αβ (χ-42)/Αβ (χ-40)的比例[Αβ比TGC]，其 中X可以独立地假定为数值I或者2，和/或Αβ (1-42)的含量[Αβ142Ιηη]和/或tau蛋白的总含量和/或磷酸-tau蛋白181的含量。此外，在参照受试者或者参照患者分类的情况下，也可能使用神经影像方法，特别地，该神经影像方法包括脑萎缩检查，优选基于成像方法，优选SPECT (单光子发射体层成像)和/或MRI (核磁共振成像)。此外，根据本发明使用的心理测验方法可以包括基于丽SE (细微精神状态检查)的研究。更特别地，如果使用前述诊断方法不能全面的测定，对于测定或评价，随后发生的阿尔茨海默病可以结合各自参照受试者或者参照患者检查期间的诊断，尤其是在检查期间对阿尔茨海默病临床前预兆存在的评估。基于在参照患者或者参照受试者中进行的检查或者诊断的，因此可能将参照人分配到有相应临床症状的特定分类中，例如分配到包括患有认知损伤(MCI)的患者的组中去，并分配到其参照受试者或者参照患者罹患阿尔茨海默病预兆的至少另一组中。例如，这可以在各自诊断方法评价的基础上进行，例如可能用来确定分等级的数值或者所谓的阈值，这在一定程度上作为用于前述组中的一个组的分配的各自临界值。更特别地，在本发明内容中可以根据在测定或评价的基础上作出的诊断，将参照受试者或者参照患者分成各种参照组。在本文中，各自的参照组(A )和(B )可以形成于(A )没有被诊断出阿尔茨海默病或者没有被诊断出阿尔茨海默病预兆和(B)被诊断出阿尔茨海默病或者被诊断出阿尔茨海默病预兆，尤其是临床前阿尔茨海默病预兆，尤其是初期或者前期阿尔茨海默病(AD初期)，和/或阿尔茨海默病临床预兆，尤其是早期阿尔茨海默病(AD早期)的参照受试者或者参照患者。对于诊断为阿尔茨海默病或者诊断的阿尔茨海默病预兆的组(B)，可能在这一方面作进一步区分例如，有阿尔茨海默病临床前预兆、尤其是初期的或者前期的阿尔茨海默病(AD初期)的参照组(BI)，可能形成另一个有阿尔茨海默病临床预兆、尤其是早期的阿尔茨海默病(AD早期)的参照组(B2)，以及任选的诊断为极晚期的阿尔茨海默病的第三参照组(B3)。
如上所述，两种不同的淀粉样β -肽的定量参照比值(参照系数)，尤其如上所定义的，可以测定来自体液的样本，尤其如上所定义的，来自属于参照组的各自参照受试者或者参照患者并编辑各个参照组。更特别地，为了与来自各个参照组的所述参照患者或者参照受试者相关联的目的所使用的样本同样是血液或者血浆和/或血清。就此而言，在本发明内容中，尤其如上所定义的，该步骤尤其可以是与相应的参照组相关联或者相比较两种不同淀粉样肽的定量比值，或者将其分配到相应的参照组中，为了通过这种方式测定患者或者受试者患阿尔茨海默病的概率，或者为了通过这种方式测定患者或者受试者是否有阿尔茨海默病预兆。换句话说，在本发明内容中，该步骤尤其是测定血液样本或者血清和/或血浆样本中(a)AP (1-42)/ α)Αβ (2-40)的定量比值或者(a) A β (1-42 )/ (ο)Αβ (2-42)的定量比值，并将其与来自相应的参照组的血液样本或者血清或者血衆样本的各自相应的参照数值相关联，尤其是统计参照数值(即，特别地，与已经从各个参照组的大量个体中获得的同样种类的相应比例相关联)，并将其分到相应的参照组中。各个淀粉样β_肽的相应的定量比值的分类或者关联特别地受通过将它们分配到已经对各个参照组进行测定的可比较的数量级范围内影响。将要被比较或者关联的一方面受试者或者患者和另一方面参照组的比例，因此优选同样数量级范围的相应比例，即，当对受试者或者患者测定的数值落入各自的参照组数值范围内时，可以将对受试者或者患者测定的比例分配至相应的参照组比例的数值范围。在该关联的基础上，当对受试者或者患者测定的比例落入没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组(A)相应参照比例的范围内时，例如可能确定受试者或者患者罹患阿尔茨海默病的概率相对较低或者没有患病(即不存在)，或者可以发现受试者和/或患者没有阿尔茨海默病临床前阶段、尤其是初期的和/或前期的阿尔茨海默病(AD初期)，和/或阿尔茨海默病临床预兆、尤其是阿尔茨海默病早期(AD早期)。此外，在本发明内容中，当对受试者或者患者测定的比例落入诊断出阿尔茨海默病或诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组(B)的相应的参照比例的范围内时，可以确定受试者或者患者患阿尔茨海默病的概率升高，或者可以发现受试者或患者有阿尔茨海默病临床前阶段、尤其是初期的和/或前期的阿尔茨海默病(AD初期)，或者有阿尔茨海默病临床预兆、尤其是早期的阿尔茨海默病(AD早期)。在上述报告的基础上，当前述的如上定义的组(B)，被进一步分为亚组(BI)和(Β2)以及任选的(Β3)，S卩，分为患有阿尔茨海默病临床前阶段、尤其是有初期的或者前期的阿尔茨海默病(AD初期)的第一亚组(BI)，以及有阿尔茨海默病临床预兆、尤其有早期的阿尔茨海默病(AD早期)的第二亚组(Β2)时，同样可能进行进一步分配或者细分。一般而言，根据本发明，当基于前述平均值，对受试者或者患者测定的比例与各自参照组的参照比例的统计平均值相差最多40%，尤其最多30%，优选最多25%，更优选最多20%，特别优选最多10%时，可以将对受试者或者患者测定的比例分配至上述参照组中的一个(即，尤其是参照组(A )、( B )或(BI)、( Β2 )或任选的(Β3 ))。同样地，如上所述，当对受试者或者患者测定的比例在对特定参照组统计学上测定的数值范围级别的范围内，或者在对特定参照组测定的统计平均值的计算标准差范围内时，可以确定对受试者或者患者测定的比例为上述参照组中的一个。
根据本发明，在上述分类的基础上，因此可能对关于各受试者或者患者的临床症状或者疾病的预兆性过程出具报告。更特别地，当α)Αβ (2-40)和 / 或(C)AP (2-42)、尤其(b) A β (2-40)的量和/或浓度与没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组的相应的量和/或浓度相比提高，并且因此(a)A0 (1-42)/ (b)A0 (2_40)或者(a)Aβ (1-42)/ (ο)Αβ (2-42)比例同时降低时，在本发明内容中也可能确定受试者和/或患者罹患阿尔茨海默病的概率升高，或者发现受试者和/或患者患有阿尔茨海默病的临床前阶段、尤其有初期的和/或前期的阿尔茨海默病(AD初期)，和/或有阿尔茨海默病临床预兆、尤其有早期的阿尔茨海默病(AD早期)。换句话说，如果前述所述淀粉样β -肽的个体数值同相应的参照组数值相比较增力口，并且如上定义的比例因此降低，罹患阿尔茨海默病或者所述疾�。绕涫乔笆龅牧俅睬昂土俅苍ふ椎姆缦站突嵩黾�。在本发明的实施方案中，因此实际上可能关注所述淀粉样
肽的各个细节。 这是因为在本文中申请人已经惊讶地发现尤其2_y型去除氨基端的淀粉样β-肽、例如所述淀粉样β-肽Αβ (2-40)和Αβ (2-42)的量或者浓度升高，尤其在患有与轻度认知损伤(MCI)相关的早期阿尔茨海默病预兆、尤其是阿尔茨海默病的临床前或者临床预兆的患者血液中。此外，当与没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组的相应参照比例相比较，Αβ (1-42)/Aβ (2-y)(其中y为37到43中的整数、尤其为40或者42的整数)的相对比降低时，和/或当与没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组的相应参照比例相比较，(a)Ai3 (1-42)/ (b)A^ (2-40)和 / 或(a)[email protected] (1-42)/ (c)[email protected] (2-42)，尤其是(a) A β (1-42)/ (b)A^ (2-40)的相对比降低时，在本发明用途的背景下也可能确定受试者和/或患者患阿尔茨海默病的概率升高，和/或认为受试者和/或患者有阿尔茨海默病的临床前阶段、尤其有初期的和/或前期的阿尔茨海默病(AD初期)，和/或阿尔茨海默病临床预兆、尤其有早期的阿尔茨海默病(AD早期)。在该根据本发明的优选实施方案中，因此重点分析各个淀粉样β -肽的前述的特定比例。这是因为，除了上述对个体数值作出的报告外，申请人也已经十分惊讶地发现临床前或者临床阿尔茨海默病、尤其初期的或者前期的阿尔茨海默�。胗绕溲褐械那笆霰壤南灾跎傧喙�。由申请人首先公开的这一相关性，相对于以下背景还是十分令人惊讶的一般而言，在身体其它组分例如脑脊液中相应的痴呆生物标记与在血液中特别发现的前述类型淀粉样β_肽的特定比例没有直接的相关性。特别通过在参照组分类的背景下的特定诊断方法的选择性组合，在本发明的背景下已经有可能显示前述淀粉样β -肽和相应的血液中的特定比例、尤其和特定的阿尔茨海默病初始形态的相关性和关系，以至于在本发明的背景下，这样的关系是使用标准化方法进行并基于对存在阿尔茨海默病或者相应预兆的血液分析的有意义试验的基础上。本发明用途中尤其在血液样本的基础上淀粉样β_肽的特定比例的适用性是更令人惊讶的，这是因为公知常识是例如脑脊液中的特定痴呆生物标记与血液中的特定痴呆生物标记没有特别直接关系。就此而言，还时值得注意的是，与所述血液有关的众多周围细胞系统或者细胞群、例如肝细胞、血小板、单核细胞等等，可以影响所述比例，并且因此实际上通常不可能从脑脊液中的Αβ -肽的特殊形式中得出结论，因为这些比例存在于血液中，或者反之亦然。因此，根据本发明，并不能预见在血液样本分析的基础上，关于前述类型的阿尔茨海默病预兆存在的持久并相对可靠的报告是可能的。本发明应用也可以与另一种分析方法组合进行，例如与Αβ (1-42)/Aβ (1-40)的比例的特定分析的组合，更特别地是在脑脊液中的，并且这使其变得更有意义。本发明还提供了(本发明的第二方面)一种测定受试者和/或患者患阿尔茨海默病(AD)的概率(风险)的方法，其中测定来自受试者和/或患者的体液样本中两种不同淀粉样β_肽(Α-β ;Αβ)的至少一个定量比值(系数)，其中所述淀粉样β_肽选自(a)Ai3(l-42)、(b)Ai3 (2-40)和(c)Ai3 (2-42)并且其中形成(a) / (b)或(b) / (a)，和 / 或
(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值。本发明同样涉及(本发明的重i方面)测定受试者和/或患者罹患阿尔茨海默病(AD)概率(风险)的发明方法，尤其如上所定义的，(a)其中测定来自受试者和/或患者体液样本中的两种不同淀粉样肽(A-β ；Αβ )的至少一个定量比值(系数)，其中淀粉样β-肽选自(a)A0 (1-42)、α)Αβ (2-40)和(c)Ai3 (2-42)并且其中形成(a)/ (b)或(b)/ (a)，和 / 或(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值；(b)其中由此获得的比例与相应参照比例进行比较和/或关联，和/或其中由此获得的比例确定为相应的参照比例；并且(c)其中，在比较和/或关联和/或分类的基础上，随后测定患者和/或受试者患阿尔茨海默病的概率。为了进一步详细说明，而避免不必要的重复，可以参考本发明的其它方面，其应用相应地涉及本发明方法。最后，本发明进一步提供了(本发明的第四方面)一种本发明的试剂盒，尤其用于测定患者和/或受试者患阿尔茨海默病(AD)的概率(风险)和/或尤其用于测定(诊断)他或她有阿尔茨海默病预兆，其中该试剂盒包括用于测定来自受试者和/或患者体液样本中的两种不同淀粉样肽(Α-β ;Αβ)的定量比值(系数)的成分和/或组成，其中为了测定(a)/ (b)或(b)/ (a)、和/或(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值的目的，选择能够定量测定来自组(a)A0 (1-42)、α)Αβ (2-40)和(c)A0 (2-42)的淀粉样β -肽的成分和/或组成。本发明试剂盒的成分或者组成尤其可以是用于纯化、浓缩、分离等待检测的淀粉样β_肽的成分或者组成。也可用于这一方面的是本领域技术人员熟悉的用于蛋白分离的成分或者组成，例如，在已知的免疫检测法或者分离方法，例如凝胶电泳方法的背景下使用的成分或者组成。更特别地，然而该成分或者组成也可以是标记待分析的淀粉样β -肽或者与之相互作用的物质，例如配体或者抗体。就此而言，本发明的试剂盒可以包括至少一种配体、优选抗体，其对淀粉样肽特异和/或与之结合。在这一方面，至少一种配体、优选抗体，可以特异于A β (1-χ)和A β(2-y)型的淀粉样β -肽，其中y是从37到43中的整数。此外，至少一种配体、优选抗体，可以特异于(a)Ai3 (1_42)和/或(b)Aβ (2-40)和 / 或(c)[email protected] (2-42)。此外，至少一种配体、优选抗体，可以特异于(a)Ai3 (1_42)和/或(b)Aβ (2-40)和/或(ο)Αβ (2-42)的氨基端。关于本发明试剂盒的进一步详细说明，可以参考上述关于本发明用途和发明方法的说明，其同样以相应方式应用于本发明的试剂盒。从随后的说明中可以看出本发明的进一步优点、特征、性质和外观是明显的，其连同随后的操作实施例以及附图
一起详细地描述本发明构思。
关于样本分析，为了检查来自早期或者初期的阿尔茨海默病(eiAD，n=21)和对照受试者(Con,n=21)的受试者(n=42)的EDTA血楽:中络合的β -淀粉样蛋白标记,本发明的焦点尤其集中于具有渺摩尔灵敏度的用于氨基端选择性免疫沉淀法的方法或者步骤，尤其是基于尿素的二维蛋白免疫印迹(2D-Ai3-WIB)。更特别地，本发明涉及血液中特定Αβ-肽比例(Α β-蛋白系数)的鉴别，这些在eiAD和Con患者之间表现出非常显著的差异。更特别地，Αβ (2-y)种类形成的提高与eiAD患者中Αβ (1_42)有关。令人惊讶地，所提到的效果在临床前阶段(AD初期)特别明显，例如根据患者脑脊液的痴呆生物标记种类，在有前期的阿尔茨海默病的轻度认知损伤(MCI)患者中特别明显。因此，根据本发明可以通过体液、优选血液的分析使用Αβ (1-42)与特定Αβ(2-y)种类的特定 Αβ-肽比例，尤其 Αβ (1-42)/Αβ (2-40)和 Αβ (1_42)/Αβ (2-42)比例，用于早期和/或初期阿尔茨海默病的神经化学诊断(例如与Aβ (1-42)/Αβ (1-40)比例组合)。更特别地，这使基于血液的或者基于血液检查的初期(临床前/前期的)阿尔茨海默病(AD)的神经化学痴呆诊断成为可能。因此本发明也使得对于二级预防治疗的新的定向策略成为可能，尤其对于高风险患者。就此而言，作为发明的证据，为了检查包括早期或者初期的阿尔茨海默病(eiAD，n=21)和疾病对照组(Con，n=21)病例的受试者(n=42)的EDTA血浆中络合的β-淀粉样蛋白标记，申请人已经进行了具有渺摩尔灵敏度的基于尿素的二维蛋白免疫印迹(2D-Ai3 -WIB)的氨基端选择性免疫沉淀法。罹患阿尔茨海默病患者的临床表型由CSF-NDD以及在大部分例子中由神经影像方法(MRI/SPECT)所支持。对于生物统计学评价，根据临床黄金标准、神经化学黄金标准、组合心理测验(MMSE)和神经化学参数(CSF痴呆生物标记)的黄金标准(GS)以及神经化学参数(CSF痴呆生物标记)和神经影像过程参数(SPECT)，将患者分级或分类。为了完成对患者的客观分类，使用生物标记促进的黄金标准(神经化学GS ;组合的神经化学GS和SPECTGS)，从而完成早期或者初期阿尔茨海默病临床支持表型的交叉验证。Αβ -免疫反应性肽的血液标记的2D-Ab_WIB分析显示出18个区域(点)的稳定类型，已经参考A β -标准肽混合物对其进行定量化。生物统计学分析显示出各个单独的A β免疫反应区在eiAD和Con患者组之间没有显著的差异。仅有对应Αβ (1_42)的区域4显示出特定疾病差异的趋势。特定Αβ-肽的比例在eiAD和Con患者之间显示出高度显著差异。最初通过Αβ (1-42)(区域4)与其它Αβ-肽种类的比来测定这一效果，所述其它Αβ-肽种类的第一个氨基酸的氨基端被去除，在这一例子中是天冬氨酸(Αβ (2-χ)种类)。因此，Αβ (1-42)与 Αβ 种类(2-42)(区域 14)、(2-40)(区域 15)、(2-39)(区域 16)、(2-38)(区域17)和(2-37)(区域18)的总和的比例使eiAD和Con组之间显著区别，然而这并不是其它Αβ (l-χ)种类(例如Αβ (1_40))与Αβ (2_χ)种类总和或者个别Aβ (2_χ)种类的比例。在Αβ (1-x)肽的组中，仅仅Αβ (1-42)(区域4)与Αβ (1-40)(区域5)的比例有eiAD和Con患者组的统计学上的显著区别。精确的数据分析显示Αβ (1_42)与Αβ(2-χ)种类总和的比的改善的诊断表现首先通过A β (1-42)与Αβ (2-40)的比(区域4/15的比例)、然后由Αβ (1-42)与Αβ (2-42)的比(区域4/14的比例)所解释。Αβ (1-42)/Αβ (2-40)的比例(区域4/15比例)的诊断精确度明显优于Αβ (1-42)/Αβ (1_40)的比例(区域4/5)，该Αβ (1-42)/Αβ (1-40)的比例(区域4/5)现在作为用于识别痴呆、尤其是阿尔茨海默病的基于血液的神经化学诊断方法的黄金标准。
此外，相关分析得出结论:Αβ (1-42)与去除氨基端的Aβ (2_χ)种类的比例、尤 其是 Αβ (1-42)/Αβ (2-40)(区域 4/15 的比例)，比 A β (1_42)/Αβ (1-40)比例与用于痴呆的CSF生物标记更相关。A β (1-42)/Αβ (2-40)比例(区域4/15的比例)与tau蛋白(总tau蛋白)总含量的关系是最强的。此外，观察到Αβ (1-42)/Αβ (2_40)比例(区域4/15的比例)与常规脑灌流SPECT分析(99mTc SPECT)的显著相关性，然而对于A β(1-42)/Αβ (1-40)比例(区域4/5的比例)，不能观察到所述相关性。此外，Αβ (1-42)/Αβ (2-40)比例(区域4/15的比例)比Αβ (1_42)/Αβ (1_40)比例与证实为阿尔茨海默病风险因子的ApoE-e4基因型更相关。其次，Αβ (1_42)/Αβ (2-40)(区域4/15的比例)比Αβ (1-42)/Αβ (1-40)比例与患者年龄更显著相关。在年龄和总tau蛋白之间也观察到显著的相关性，这已经从文献中获知。因为eiAD和Con患者组年龄不同，不能排除一些观察到的现象可以首先通过年龄而不是疾病相关的差异来解释。然而年龄，是已知的阿尔茨海默病最大的风险因素，并且总tau蛋白最近已经被鉴定为预测MCI患者中初期的阿尔茨海默病表现最佳的个体CSF生物标记。这一效果也不依赖于MCI患者的年龄。此外，另一个当前的脑灌流SPECT研究显示，在阿尔茨海默病早期和MCI发生时，在识别痴呆的CSF生物标记中(磷酸-tau蛋白、总tau蛋白、A β(1-42))中，除Αβ (1-42)外的总tau蛋白和磷酸_tau蛋白与灌流的局部破坏(左顶叶皮层)有显著的关联性。令人意外的是，申请人可以观察到在患前期的阿尔茨海默病(初期的阿尔茨海默病)的MCI患者血液中A β (1-42)/Αβ (2-40)比例(区域4/15比例)的显著减少，阿尔茨海默病通过CSF生物标记来指示。对于血液中的A β (1-42)/Αβ (1-40)比例(区域4/5的比例)不能观察到这一发现。从来自人类阿尔茨海默病各种类的不同疾病阶段的脑组织的β-淀粉样斑块的生物化学分析中得到的指示清楚地表明去除氨基端的A β -肽种类的形成在阿尔茨海默病的分子发病机制中是非常早期的事件。因此，在临床前阶段(初期的阿尔茨海默病)与Αβ (1-42)有关的Αβ (2-χ)种类的升高的形成可以被特定的标记，例如在有前期的MCI阿尔茨海默病的MCI患者中。在这一关系中，与作为将要被分析的样本的血液或者血浆和/或血清有关的Αβ-肽的量或者含量的表现是这样的其中发现的Αβ-肽的量或者含量与CSF Αβ-肽没有显著的关联，即Αβ -肽血液分析不能被认为是一种“稀释的”CSF分析。此外，血液中Αβ-肽的量或者含量以更复杂的方式依赖于除CSF类型外的因素，因为多数的周围细胞系统或者细胞群(肝细胞、血小板、单核细胞等)有助于或者影响该类型。相应地，从对已经被鉴定为对于血液或者血液检查作为识别痴呆的CSF生物标记的Αβ -肽的研究中转移或者概括发现或关系是不可能也是不正当的。例如(不同于血液)在CSF样品中没有发现同样高浓度的Αβ (2-40)(相对于Αβ (1-42)或者Αβ-肽的总含量)的指示。区域4/5、4/14和4/15的比例的比较ROC分析(图5)清楚地表明区域4/5、4/14和4/15的比例的组合应用具有提高的诊断价值在适度敏感性(例如70到80%)的情况下，区域4/15的比例显示出增强的特异性，然而，在高敏感性(90到100%)的情况下，区域4/5和4/14的比例给出更好的结果。为了通过临床或者神经化学黄金标准对患者进行分类，使用逻辑回归分析(Statistical Package of Social Sciences, SPSS,第 17 版)时,上述结果变得特别清楚(没有示出精确的分析)。当使用所有的三个比例时，通过临床或者神经化学黄金标准对81%或者85. 7%的患者进行准确地分类。如果仅使用区域4/5的比例，则通过临床或者神经化学黄金标准仅有66. 7%或者61. 9%的患者被准确的分类。
具体实施例方式I.方法I. I患者同期组群和临床表型·
检查42个受试者的EDTA血楽:中的络合的β -淀粉样蛋白标记。所有的患者在德国埃朗根/纽伦堡大学的精神病系招募。已经将研究人群分级或者划分为21个患早期或者初期的阿尔茨海默病(eiAD ;D_代码_1 = I)的患者和21个对照患者(Con ;D_代码_1=0)。该对照病例中包括有不同的神经精神性疾�。ㄆ渌沾舻幕颊�。用于识别痴呆的基于CSF的神经化学诊断方法对于研究中的所有患者都是有效的。用于42个患者表型的临床黄金标准(临床GS)、预分析的样本处理和用于痴呆识别的CSF支持的神经化学诊断方法(CSF-NDD)由德国痴呆症协作网的国际诊断指南(www. kompetenznet-demenzen. de ；Kornhuber 等“Early anddifferential diagnosis of dementia and mild cognitiveimpairment:design andcohort baseline characteristics of the German dementiaCompetenceNetworkDement. Geriatr. Cogn. Disord. , 2009, 27, 404-417 ；ffiltfang 等“Consensus paper of the WFSBP Task Force on Biological Markers ofDementia:therole of CSF and blood analysis in the early and differential diagnosis ofdementia”，World J. Biol. Psychiatry,2005,6,69-84 ；Lewczuk 等“The GermanCompetence Net Dementias:standardoperating procedures for the neurochemicaldementia diagnostics.，，，J. Neural Transm. , 2006, 113, 1075-80 ;Lewczuk 和Wiltfang: “Neurochemical dementia diagnostics:State of the art and researchperspectives. ”Proteomics 2008,8,1292-301)指导。此外，为了进一步证实阿尔茨海默病的诊断，在研究中优先包括的有早期/初期阿尔茨海默病(eiAD)的患者是那些由神经影像方法(SPECT和/或cMRI)证明罹患阿尔茨海默病诊断的患者。神经影像表明存在其它痴呆(例如血管性痴呆或者额颞痴呆)的eiAD患者并不包括在这一研究中。为了确保对常规神经影像方法的数据的实质上标准化的解释，使用以下划分标准-I. 5T (tesla) MRI或者99mTc SPECT分数“3” :额颞顶骨瓣萎缩，额颞顶骨瓣灌流不足，将症状分类为典型的阿尔茨海默病、没有显著损害、没有肿瘤；-分数“2”:其它脑萎缩，广义萎缩，损害显著，表明有肿瘤；-分数“I ” :其它病理检查发现；-分数“O”:没有病理检查发现。MRI和SPECT神经影像方法分别对39和37个患者是有效的。此外，研究中优选包括的eiAD患者是那些临床诊断由阿尔茨海默病的CSF痴呆生物标记典型类型所支持的患 者(Αβ (1-42),Aβ 42/Αβ 40比例降低；总tau蛋白，磷酸-tau蛋白181升高)。相反地，排除有CSF-NDD类型的阿尔茨海默病的对照病例。对于患者，当他们已经表现出指示阿尔茨海默病的CSF痴呆生物标记类型和指示轻微认知损伤的认知缺陷类型时，发现存在初期阿尔茨海默病的风险。除了临床黄金标准之外，使用用于识别痴呆的基于CSF生物标记的神经化学黄金标准。神经化学黄金标准考虑由所有四个识别痴呆的CSF生物标记(总tau蛋白、磷酸-tau蛋白181、Αβ (1-42)和Αβ (1-40))提供定量数据。为了获得NDD分数(顺序标度)和衍生的对分NDD代码，使用该数据。为了获得或者证明识别痴呆和认知代码的神经化学诊断方法(NDD_Cog-代码)，该NDD代码与细微精神状态检查(MMSE )的结果组合。所有代码基于他们的分子和/或认知生物标记数据，确保患者的表型是客观的(NDD_代码；n=42)或者基本上客观的(NDD_Cog代码；n=38)。由于已经使用CSF生物标记的定性评价以支持临床黄金标准(参见上文)，所以在临床和神经化学黄金标准之间达成高度一致。对NDD代码和NDD_Cog代码的定义在下文中进行详细解释。最后，为了获得NDD_SPECT分数(范围-1到+5 ;n=37)，对NDD分数(范围-1到+2)和SPECT分数(范围0到3)进行组合。NDD_SPECT分数相当于NDD和SPECT分数的总和。I. 2分子表型和神经化学黄金标准NDD分数的衍牛阿尔茨海默病早期(AD)的临床诊断的不准确是显著的。根据支持解剖的研究，甚至在中期到晚期阶段的阿尔茨海默病的精度最高为85至90%。由于阿尔茨海默病早期阶段的临床综合征仍是非常不同的，所以在这种情况下的临床诊断精确度将不会超过85%。有来自一些大型国际多中心研究的荟萃分析和来自支持解剖的研究的大量证据证明脑脊液(CSF)中的用于痴呆的特定生物标记信号极力支持早期甚至初期的(临床前)阿尔茨海默病的正确诊断。这解释了为什么用于识别痴呆的CSF支持的神经化学诊断方法(CSF-NDD)在2010被引入用于早期痴呆的改进诊断的德国神经精神S3指南。CSF-NDD的临床关联性由大量文献证据所指出(Hansson等,Associationbetween CSFbiomarkers and incipient Alzheimer’ s disease in patients withmildcognitive impairment:a follow-up study.，，，Lancet Neurol. , 2006, 5, 228-234 ;Engelborghs等,Neuropsychological and behavioural correlatesof CSF biomarkersin dementia.，，，Neurochem. Int. , 2006, 48, 286-295 ;Engelborghs 等“No associationof CSF biomarkers with AP0Eepsilon4, plaque and tangle burden in definiteAlzheimer’ s disease. ” Brain, 2007,130, 2320-2326)。由于此处描述的研究中检查的患者同期组群主要由患早期或初期的(临床前/前期的)阿尔茨海默病的患者组成，来自用于痴呆的CSF生物标记信号的信息被用作客观诊断分级或者划分患者组的判断基础(神经化学黄金标准)，其独立于常规的临床阶段。这通过神经化学痴呆代码(NDD代码)的建立或确立来实现，其依次从痴呆的平均神经化学诊断分数(平均NDD分数)获得。NDD分数是基于来自脑脊液(CSF)中的下列四个用于痴呆症的生物标记的信息-A β - A β (χ-42)与Αβ (χ_40)的比例(Αβ比TGC)。为了该测定，使用两种来自苏黎世的基因公司的ELISA测试，其并不特定地测量A β (1-42)和A β (1_40)肽，但也测量其去除氨基端的种类； -Aβ (1-42) (Αβ 142Ιηη):来自 INN0GENETICS，Gent 的 ELISA 测试，特定地测量Αβ (1-42)；-总tau 蛋白(来自 INN0GENETICS 的 ELISA 测量)；-磷酸-tau蛋白 181 (来自 INN0GENETICS 的 ELISA 测量)。用于痴呆的CSF生物标记信息对所有患者是有效的,但不是对所有患者的所有生物标记有效(总 tau 蛋白n=42, A β 142Inn :n=42,磷酸-tau 蛋白η=29,Αβ 比 TGC:n=20)。以任选或自由选择的方式将有高标准浓度范围内的痴呆CSF生物标记的患者确定为“-I”的NDD得分。相反，接近于阈值、阈值之上和远超阈值的CSF痴呆生物标记的病理学数值的患者分别被确定为和“2”的NDD分数。因为并不是所有四个生物标记都对每个个体患者的痴呆识别有效，所以计算出一个平均NDD分数(平均NDD分数)，S卩，Σ分数/η。-I和+2的平均NDD分数分别对应于初期或者明显的临床阿尔茨海默病的最小和最大风险。为了获得对分NDD代码，使用顺序的平均NDD分数获得〈I的平均NDD分数对应低风险的初期或者明显的临床阿尔茨海默病(NDD代码=0)，然而> I的平均NDD分数对应高风险的初期或者明显的临床阿尔茨海默病(NDD代码=1)。定义NDD分数分类范围的阈值取自文献或者来自我们自己的实验室工作(例如Αβ 比 TGC):总 tau 蛋白=350pg/ml ;憐酸-tau 蛋白 181=60pg/ml ；Αβ 142Inn=530pg/ml ；Αβ比TGC=O. 09。定义不同NDD分数数值的识别痴呆CSF生物标记的浓度范围在表I中概括。表I :证明NDD分数的CSF痴呆生物标记数值
参数参数范围(pg/ml): 分数
磷酸TAU蛋白181 0-50~
磷酸TAU蛋白181 >50和〈60O
权利要求
1.来自受试者和/或患者体液的样本中的两种不同淀粉样β-肽(Α-β;Ab)的至少一个定量比值(系数)用于测定他或她患阿尔茨海默病(AD)的概率(风险)和/或测定(诊断)他或她罹患阿尔茨海默病预兆的用途，其中淀粉样肽选自(a)Ab (l-42)、(b)Ab (2-40)和(c)Ab (2-42)，并且其中形成(a)/ (b)或者(b)/ (a)、和 / 或(a)/ (c)或者(c)/ (a)的定量比值。
2.如权利要求I所述的用途，其中受试者和/或患者具有大脑功能衰退症状，特别是轻度大脑功能衰退症状，优选记忆力衰退，特别是轻度记忆力衰退，和/或其中受试者和/或患者具有轻度认知损伤(MCI)的症状。
3.如权利要求I或者2所述的用途，其中阿尔茨海默病预兆是阿尔茨海默病的临床前阶段和/或其中阿尔茨海默病预兆是初期的和/或前期的阿尔茨海默病(AD初期)。
4.如前述任意一项权利要求所述的用途，其中阿尔茨海默病预兆为阿尔茨海默病的临床阶段和/或其中阿尔茨海默病的预兆为早期的阿尔茨海默病(AD早期)。
5.如前述任一项权利要求所述的用途，其中比例为依赖量和/或浓度的比例。
6.如前述任一项权利要求所述的用途，其中形成 (a) Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)的比例[即，Ab (1-42)/Ab (2-40)的比例或者(a) /(b)的比例]和/或 (a) Ab (1-42)/ (C)Ab (2-42)的比例[即，Ab (1-42)/Ab (2-42)的比例或者(a)/ (c)的比例]，优选地 (a)Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)的比例[即，Ab (1-42)/Ab (2-42)的比例或者(a)/ (c)的比例]。
7.如前述任一项权利要求所述的用途，其中将来自受试者和/或患者的血液用作样本。
8.如前述任一项权利要求所述的用途，其中将来自于受试者和/或患者的血浆(血浆)和/或血清(血清)，优选血浆(血浆)，用作样品。
9.如前述任一项权利要求所述的用途，其中将淀粉样β_肽，尤其一方面的(a)Ab(1-42)和另一方面的(b)Ab (2-40)和/或(C)Ab (2_42)，从样品中移出和/或分离，尤其通过免疫沉淀法。
10.如权利要求9所述的用途，其中使用对淀粉样β_肽特异和/或与之结合的至少一种配体、优选抗体，尤其其中至少一种配体、优选抗体，对Ab (Ι-y)和Ab (2_y)形式的的淀粉样β -肽特异，其中y是37到43中的整数，和/或尤其其中至少一种配体、优选抗体对(a)Ab (1-42)和/或(b)Ab (2-40)和/或(c) Ab (2_42)特异，和/或尤其其中至少一种配体、优选抗体对(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2-40)和/或(C)Ab (2_42)的氨基端特异。
11.如前述任一项权利要求所述的用途，其中各淀粉样β_肽，尤其一方面的(a)Ab(1-42)和另一方面的(b) Ab (2-40)和/或(c) Ab (2_42)的测定，尤其量和/或含量和/或浓度的测定，是在蛋白分离方法和/或定量免疫检测性蛋白检测方法，尤其定量免疫检测性蛋白检测方法的基础上，优选在蛋白分离方法和/或定量免疫检测性蛋白检测方法组合，尤其定量免疫检测性蛋白检测方法的基础上进行。
12.如权利要求11所述的用途，其中使用的蛋白分离方法为凝胶电泳方法，尤其双向凝胶电泳，优选基于尿素的双向凝胶电泳，和/或其中使用的蛋白检测方法为蛋白质印迹法，和/或其中检测是在特别的基于尿素的双向凝胶电泳与下游蛋白质印迹法(2D-Ab-WIB)组合的基础上进行的。
13.如权利要求11或12所述的用途，其中免疫检测性蛋白检测方法，尤其定量免疫检测性蛋白检测方法，优选蛋白质印迹法，包括使用至少一种配体、优选抗体用于淀粉样β-肽(第一配体和/或第一抗体)的标记，尤其其中至少一种配体、优选抗体，对Ab (1-y)和Ab (2-y)形式的淀粉样β-肽特异，其中y为37到43中的整数，和/或尤其其中至少一种配体、优选抗体，对(a)Ab (1-42)和/或(b)Ab (2-40)和/或(C)Ab (2_42)特异，和/或尤其其中至少一种配体、优选抗体，对(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2-40)和/或(c)Ab (2-42)的氨基端特异。
14.如前述任一项权利要求所述的用途,其中尤其如权利要求1、5和6中任一项所定义的两种不同淀粉样β -肽的定量比值，与相应的参照比例相关联和/或比较和/或将其确定为这些参照比例。
15.如权利要求14所述的用途，其中定量比值与相应的参照比例的比较和/或关联被用于测定罹患阿尔茨海默病的概率和/或测定和/或诊断阿尔茨海默病预兆的存在。
16.如权利要求14或15所述的用途，其中定量参照比例是在受试者参照组和/或患者参照组的基础上和/或基于受试者参照组和/或患者参照组进行测定的。
17.如权利要求16所述的用途，其中更特别地为了生物统计评价轻度认知损伤(MCI)和/或阿尔茨海默病临床前预兆、尤其初期的或者前期的阿尔茨海默病(AD初期)，和/或阿尔茨海默病的临床预兆、尤其早期的阿尔茨海默病(AD早期)的存在或者不存在的目的，检查参照受试者组和/或参照患者组的参照受试者和/或参照患者。
18.如权利要求17所述的用途，其中检查和/或评价在选自神经化学方法、神经影像方法、心理测验方法以及至少两种前述方法组合的组的检查方法的基础上，优选在所有前述方法组合的基础上进行。
19.如权利要求17或18所述的用途，其中检查和/或评价在至少一个黄金标准，尤其在选自临床黄金标准、神经化学黄金标准、心理测验黄金标准和至少两个前述标准组合的组的基础上，优选在所有前述标准组合的基础上进行。
20.如权利要求17至19任一项所述的用途，其中检查和/或评价是在包括心理测验、神经化学和/或神经影像方法和/或参数的黄金标准的基础上进行的。
21.如权利要求17至20任一项所述的用途，其中神经化学方法包括脑脊液(CSF)参数的测定，更特别地，其中测定Ab (x-42)/Ab (x-40)的比例[Ab比TGC]，尤其其中X可以独立地假定为I或2的数值，Ab (1-42)的含量[Abl42Inn]，tau蛋白的总含量和/或磷酸-tau蛋白181的含量。
22.如权利要求17至21任一项所述的用途，其中神经影像方法尤其包括脑萎缩研究，优选基于成像方法，优选SPECT (单光子发射体层成像)和/或MRI (核磁共振成像)。
23.如权利要求17至22任一项所述的用途，其中心理测验方法包括基于MMSE(细微精神状态检查)的研究。
24.如权利要求17至23任一项所述的用途，其中根据在测定和/或评价的基础上进行的诊断将参照受试者和/或参照患者划分至各种参照组，尤其其中各自的参照组形成于参照受试者和/或参照患者(A)没有被诊断出阿尔茨海默病和/或没有被诊断出阿尔茨海默病的预兆和(B)被诊断出阿尔茨海默病和/或有被诊断出阿尔茨海默病预兆，尤其有阿尔茨海默病的临床前预兆、尤其为初期的和/或前期的阿尔茨海默病(AD初期)，和/或有阿尔茨海默病的临床预兆、尤其为早期的阿尔茨海默病(AD早期)。
25.如权利要求17至24任一项所述的用途，其中两种不同淀粉样β-肽(Α-β；Αβ )的定量参照比例(参照系数)，尤其如权利要求1、5和6中任一项所定义的，由体液样本测定，尤其如权利要求7或8所定义的，来自属于参照组的各自参照受试者和/或参照患者并编辑各个参照组。
26.如权利要求17至25任一项所述的用途，其中为了通过这种方式测定患者和/或者受试者患阿尔茨海默病的概率和/或为了通过这种方式测定患者或者受试者是否有阿尔茨海默病预兆，将两种不同淀粉样β_肽的定量比值，尤其如权利要求1、5和6中任一项所定义的，与相应的参照组相关联和/或相比较和/或将其确定为相应的参照组。
27.如权利要求17至26任一项所述的用途，其中当测定的受试者和/或患者的比例落入参照组(A)没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的相应参照比例范围内时，确定受试者和/或患者患阿尔茨海默病的概率相对低或者没有，和/或其中发现受试者和/或患者没有阿尔茨海默病的临床前阶段、尤其初期的和/或前期的阿尔茨海默�。�/或阿尔茨海默病的临床预兆、尤其早期的阿尔茨海默病(AD早期)。
28.如权利要求17至27任一项所述的用途，其中当测定的受试者或者患者的比例落入参照组(B)诊断出阿尔茨海默病和/或诊断出阿尔茨海默病预兆的相应参照比例的范围内时，确定受试者和/或患者患阿尔茨海默病概率升高，和/或其中发现受试者和/或患者有阿尔茨海默病临床前阶段、尤其初期的和/或前期的阿尔茨海默�。�/或阿尔茨海默病临床预兆、尤其早期的阿尔茨海默病(AD早期)。
29.如前述任意一项权利要求所述的用途，其中当(b)Ab(2-40)和/或(C)Ab (2-42),尤其(b)Ab(2-40)的量和/或浓度与没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组的相应量和/或浓度相比提高，并且因此(a)Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)和/或(a) Ab (1-42)/ (C)Ab (2_42)的比例降低时，确定受试者和/或患者患阿尔茨海默病的概率升高，和/或其中发现受试者和/或患者有阿尔茨海默病临床前阶段、尤其初期的和/或前期的阿尔茨海默�。�/或阿尔茨海默病的临床预兆、尤其早期的阿尔茨海默病(AD早期)。
30.如前述任意一项权利要求所述的用途，其中当与没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组的相应参照比例相比较，Ab (1-42)/Ab (2-y)(其中y为37到43、尤其40或者42中的整数)的相对比降低时，和/或当与没有诊断出阿尔茨海默病和/或没有诊断出阿尔茨海默病预兆的参照组的相应参照比例相比较，(a) Ab(1-42)/ (b)Ab (2-40)和 / 或(a)Ab (1-42)/ (C)Ab (2-42)，尤其(a)Ab (1-42)/ (b)Ab (2-40)的相对比降低时，确定受试者和/或患者患阿尔茨海默病的概率升高，和/或其中发现受试者和/或患者有阿尔茨海默病的临床前阶段、尤其有初期的和/或前期的阿尔茨海默�。�/或有阿尔茨海默病临床预兆、尤其有早期的阿尔茨海默病(AD早期)。
31.一种测定受试者和/或患者患阿尔茨海默病(AD)的概率(风险)的方法，其中测定来自受试者和/或患者的体液样本中的两种不同淀粉样β -肽(A-b ；Ab)的至少一个定量比值(系数)，其中淀粉样β_肽选自(a) Ab (l-42)、(b)Ab (2-40)和(c)Ab (2-42)，并且其中形成(a)/ (b)或(b)/ (a),和/或(a)/ (c)或(c)/ (a)的定量比值。
32.一种测定受试者和/或患者患阿尔茨海默病(AD)概率(风险)的方法，尤其如权利要求31所述， (a)其中测定来自受试者和/或患者体液样本中的两种不同淀粉样β-肽(Α-β；Ab)的至少一个定量比值(系数)，其中淀粉样β-肽选自(a) Ab (1-42)、(b) Ab (2-40)和(c)Ab (2-42)，并且其中形成(a) / (b)或(b)/ (a)，和/或(a) / (c)或(c)/ (a)的定量比值； (b)其中由此获得的比例与相应参照比例进行比较和/或关联，和/或其中由此获得的比例被确定为相应参照比例；并且 (c)其中，在比较和/或关联和/或分类的基础上，然后测定患者和/或受试者患阿尔茨海默病的概率。
33.如权利要求31或32所述的方法，特征在于具有一个或多个权利要求I至30的特征。
34.一种试剂盒，尤其用于测定患者和/或受试者患阿尔茨海默病(AD)的概率(风险)和/或尤其用于测定(诊断)他或她有阿尔茨海默病预兆，其中所述试剂盒包括用于测定来自受试者和/或患者体液样本中的两种不同淀粉样β_肽(Α-β ;Ab)的定量比值(系数)的成分和/或组成，其中为了测定(a)/ (b)或者(b)/ (a)，和/或(a)/ (c)或者(c)/ (a)的定量比值，选择能够定量测定来自(a) Ab (1-42)、(b) Ab (2-40)和(C)Ab (2_42)组的淀粉样β-肽的成分和/或组成。
35.如权利要求34所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括至少一种配体、优选抗体，其对淀粉样β -肽特异和/或与之结合，尤其其中至少一种配体、优选抗体，对Ab (1-χ)和Ab(2-y)形式的淀粉样β -肽特异，其中y是37到43中的整数，和/或尤其其中至少一种配体、优选抗体，对(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2-40)和/或(c) Ab (2_42)特异，和/或尤其其中至少一种配体、优选抗体，对(a) Ab (1-42)和/或(b) Ab (2_40)和/或(c) Ab(2-42)的氨基端特异。
36.如权利要求34或35所述的试剂盒，特征在于具有一个或多个权利要求I至33的特征。
全文摘要
本发明涉及受试受试者和/或患者的体液样本中的彼此不同的两种淀粉样β-肽(Aβ；Ab)的至少一个定量比值(系数)的用途，用以测定所述受试受试者和/或患者患阿尔茨海默病(MorbusAlzheimer，AD)的概率(风险)和/或测定(诊断)有阿尔茨海默病的早期阶段，其中淀粉样β-肽选自(a)Ab(1-42)、(b)Ab(2-40)和(c)Ab(2-42)，并且其中形成(a)/(b)或者(b)/(a)，和/或(a)/(c)或者(c)/(a)的定量比值。本发明还涉及用于这一点的相应方法和试剂盒。
文档编号G01N33/68GK102933966SQ201180028676
公开日2013年2月13日 申请日期2011年4月7日 优先权日2010年4月9日
发明者赫尔曼·埃塞尔曼, 特哈·W·格罗梅, 约翰内斯·科恩胡贝尔, 彼得·莱夫丘克, 胡安·曼努埃尔·马勒, 延斯·维尔特范 申请人:杜伊斯堡-艾森大学, 埃尔朗根-纽伦堡弗里德里希·亚历山大大学, 中央精神卫生研究所, 埃尔朗根大学附属医院
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