专利名称：：雷公藤药材中雷公藤甲素的含量测定方法
技术领域：
：本发明涉及物质的含量测定，具体地说是一种雷公藤药材中雷公藤甲素的含量测定方法。
背景技术：
：雷公藤(TripterygiumWilfordiiHook,f.)别名断肠草、黄藤、菜虫药，为卫茅科雷公藤属植物，落叶藤状灌木，其具有抗炎、抗菌、免疫调节、抗肿瘤及抗生育等多种药理作用，是国内外首选的免疫抑制剂。大量的药理及临床研究表明，雷公藤甲素(triptolide)是雷公藤最主要的活性成分，也是主要的毒性成分。目前雷公藤药材主要采自野生，质量参差不齐，雷公藤甲素等主要活性成分很不稳定，不同个体间雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差50倍，不同群体雷公藤甲素质量分数最高值与最低值相差10倍，严重影响雷公藤制剂的用药安全和疗效。要实现雷公藤制剂"安全、有效、稳定、可控"，必须从源头上控制雷公藤药材质量。因此为保证雷公藤制剂临床用药的有效性及安全性，建立一个有效的雷公藤药材的质量控制方法显得尤为重要。目前的国内外有关文献中，雷公藤药材中雷公藤甲素的测定方法曾有报道，但经过试验验证其精密度差，回收率低，误差大，不能完全有效地控制产品质量。
发明内容本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种专属性强、精密度好、回收率高、测量结果正确的雷公藤甲素的含量测定方法，可有效控制雷公藤药材的质量，以确保雷公藤制成品的优质原料。为此，本发明采用如下的技术方案雷公藤药材中雷公藤甲素的含量测定方法，采用高效液相色谱法，其操作步骤如下l)对照品溶液的制备取雷公藤甲素对照品加甲醇制成溶液；2)供试品溶液的制备取雷公藤药材粉末(过二号筛)加三氯甲烷，加热回流，放冷，加三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液挥干溶剂，残渣加三氯甲烷分次溶解，置于已处理好的氧化铝柱上，用乙酸乙酯-无水乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使其溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3)分别取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂，磷酸二氢钠溶液-乙腈-甲醇的混合液为流动相，检测波长为218nm，以外标法计算雷公藤甲素的含量。所述的雷公藤甲素的含量测定方法，通过调节氧化铝的含水量改变其吸附活性，吸附剂氧化铝的最佳含水量为8%，此时的吸附活性最强，其制备方法如下取氧化铝105'C烘3小时，放至温热，按重量比滴加纯化水至含水量为8%，滴加的同时摇匀，即得。所述的雷公藤甲素的含量测定方法，所用磷酸二氢钠溶液的浓度为0.05mol/L，用磷酸调PH值至4.0，磷酸二氢钠溶液乙腈甲醇的体积比为60:15:25。所述的雷公藤甲素的含量测定方法，乙酸乙酯与无水乙醇的体积比为1:1。所述的雷公藤甲素的含量测定方法，雷公藤药材中雷公藤甲素的质量百分含量应》0.001%。本发明采用的方法专属性强、精密度好、回收率高、测量结果正确，能有效控制雷公藤药材的质量，确保了雷公藤制成品的优质原料，保证了雷公藤制剂的用药安全和疗效。下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明并不局限于这些实施例。具体实施例方式含量测定所用仪器岛津高效液相色谱仪，LC-10ATvp岛津紫外多波长检测器，SPD-10Avp菲罗门C18柱，5)am、250mmx4.6mm检测波长218nm。色谱条件与系统适用性试验以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以O.05mol/L的磷酸二氢钠溶液(用磷酸调PH值至4.0)-乙腈-甲醇=60:15:25为流动相，待雷公藤甲素出峰后约二分钟，采用梯度洗脱，用甲醇洗脱10分钟，流速为lml/min;检测波长为218nm;理论板数按雷公藤甲素峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品粉末(过二号筛)约5.0g，精密称定，置具圆底烧瓶中，精密加入三氯甲烷50ml，称定重量，加热回流3小时，放冷，加三氯甲垸补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，挥干溶剂，残渣加5ml三氯甲垸分次溶解，置已处理好的氧化铝柱上(内径约0.9cm，100-200目含8%水分中性氧化铝2g，20ml三氯甲垸装柱、预洗)，用乙酸乙酉旨-无水乙醇(l:l)30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20u1，注入液相色谱仪进行测定。线性试验取雷公藤甲素对照品适量，加甲醇分别制成含雷公藤甲素1.416ug/ml、2.832ug/ml、5.664ng/ml、11.328ug/ml、22.656g/ml的溶液，照含量测定项下色谱条件，分别精密吸取20ul注入液相色谱仪，测定雷公藤甲素的峰面积，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标进行线性回归，见表l。表l雷公藤甲素线性回归<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>结果雷公藤甲素在1.416ug/ml~22.656Pg/ml浓度范围内呈良好线性关系。专属性试验取本品含量测定所用试剂缺雷公藤根，根照含量测定方法制备阴性供试品溶液，照含量测定方法测定。结果阴性供试品对本品含量测定无干扰。检测限取线性试验项下溶液逐级稀释，信噪比为3:1时检测限为2.832ng。定量限取线性试验项下溶液逐级稀释，信噪比为10:1时检测限为9.44ng。回性率试验取雷公藤根样品约2.0g，置具塞锥形瓶中，分别加入14.7yg/ml的雷公藤甲素对照品溶液(三氯甲烷配制)4.00ml，加三氯甲垸46.00ml，照含量测定方法制备供试品溶液；取雷公藤根样品约2.5g，置具塞锥形瓶中，分别加入14.7iig/ml的雷公藤甲素对照品溶液(三氯甲垸配制)5.00ml，加三氯甲烷45.00ml，照含量测定方法制备供试品溶液；取雷公藤根样品约3.0g，置具塞锥形瓶中，分别加入14.7ug/ml的雷公藤甲素对照品溶液(三氯甲垸配制)6.00ml，加三氯甲垸44.00ml,照含量测定方法制备供试品溶液；取雷公藤甲素对照品0.0125g，加甲醇制成10ug/ml的溶液，为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液照含量测定方法测定，结果见表2。表2雷公藤甲素回收率试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>结果用本法测定雷公藤甲素含量，回收率良好，测量准确。溶液稳定性试验取雷公藤根样品约5.0g，精密加入三氯甲垸50ml，照含量测定方法制备供试品溶液，分别在O、1、2、4、8、24小时测定，结果见表3。表3供试品溶液稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>结果本品供试品溶液在24小时内稳定。精密度试验(重复性试验)取雷公藤根样品约5.0g，6份，精密加入三氯甲烷50ml，照含量测定方法制备供试品溶液；取雷公藤甲素对照品0.0125g,加甲醇制成lOixg/ml的溶液，为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液照含量测定方法测定，.结果见表4。表4重复性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>结果用本法测定雷公藤甲素含量，重复性良好，精密度高。精密度试验(中间精密度试验)取雷公藤根样品约5.0g，6份，精密加入三氯甲垸50ml，照含量测定方法制备供试品溶液；取雷公藤甲素对照品0.0125g，加甲醇制成10ug/ml的溶液，为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液照含量测定方法测定，结果见表5。表5中间精密度试验结果取<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>结果用本法测定雷公藤甲素含量，中间精密度良好。权利要求1、雷公藤药材中雷公藤甲素的含量测定方法，采用高效液相色谱法，其操作步骤如下1)对照品溶液的制备取雷公藤甲素对照品加甲醇制成溶液；2)供试品溶液的制备取雷公藤药材粉末加三氯甲烷，加热回流，放冷，加三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液挥干溶剂，残渣加三氯甲烷分次溶解，置于已处理好的氧化铝柱上，用乙酸乙酯-无水乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使其溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；3)分别取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，磷酸二氢钠溶液-乙腈-甲醇的混合液为流动相，检测波长为218nm，以外标法计算雷公藤甲素的含量。2、根据权利要求l所述的雷公藤甲素的含量测定方法，其特征在于通过调节氧化铝的含水量来改变其吸附活性。3、根据权利要求2所述的雷公藤甲素的含量测定方法，其特征在于氧化铝吸附剂的含水量为8%。4、根据权利要求1或2所述的雷公藤甲素的含量测定方法，其特征在于所用磷酸二氢钠溶液的浓度为0.05mol/L，用磷酸调PH值至4.0，磷酸二氢钠溶液_乙腈-甲醇的体积比为60:15:25。5、根据权利要求4所述的雷公藤甲素的含量测定方法，其特征在于乙酸乙酯与无水乙醇的体积比为1:1。6、根据权利要求5所述的雷公藤甲素的含量测定方法，其特征在于雷公藤药材中雷公藤甲素的质量百分含量应>0.001%。全文摘要本发明公开了一种雷公藤药材中雷公藤甲素的含量测定方法。雷公藤甲素的测定方法曾有报道，但其精密度差，回收率低，误差大，不能完全有效地控制产品质量。本发明采用高效液相色谱法，其操作步骤如下对照品溶液的制备，取雷公藤甲素对照品加甲醇制成溶液；供试品溶液的制备，取雷公藤药材粉末加三氯甲烷，加热回流，放冷，加三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液挥干溶剂，残渣加三氯甲烷分次溶解，置于已处理好的氧化铝柱上，用乙酸乙酯-无水乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使其溶解，摇匀，滤过，取续滤液；分别取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪。本发明能有效控制雷公藤药材的质量，确保了雷公藤制成品的优质原料。文档编号G01N33/15GK101339168SQ20071006990公开日2009年1月7日申请日期2007年7月3日优先权日2007年7月3日发明者刘法千,熊士强,金春晖申请人:浙江得恩德制药有限公司
