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专利名称：经由评估蛋白质片段检测并展示毛发损伤的系统和方法
技术领域：
本公开的实施方案涉及通过评估和鉴定提取的蛋白质片段来测量毛发损伤的方法。
背景技术：
由蛋白质损失导致的毛发损伤是一个已知的问题；然而，一般来讲，大多数人未认识到他们的毛发遭受的蛋白质损失量或他们的毛发健康水平。蛋白质损失可由每天的事件和环境因素如紫外线暴露、漂白、着色、烫发、拉直、机械操纵和盐水接触引起。分子水平上的适当的毛发构造是具有健康的外观、光泽和触感的毛发的重要特征。毛发主要由蛋白质组成，并且在它长出头皮后是可再生的。因此，保护毛发的总体蛋白 质完整性的产品是有价值的。因此，在蛋白质和纤维水平上保护毛干对确保毛发具有健康的外观是重要的。鉴定从毛发中提取的蛋白质片段，并将蛋白质片段类型与毛发损伤类型相关联I)使得能够正确鉴定毛发损伤的类型，并且2)可提供设计在使用漂白剂时防止损伤的产品和/或不产生损伤的其它组合物所必需的信息。此外，鉴定特定的毛发疾病类型也是有价值的。患有毛发疾病的个体的毛发对损伤和/或处理的反应不同于正常毛发。因此，基于毛发在蛋白质水平上对特定损伤类型的响应表征何种类型的毛发疾病是可能的。当鉴定出蛋白质片段时，也可产生由蛋白质损失得到的利用可用键的产品，具体地为专用于特定损伤类型的产品。发明概沭本公开一般涉及通过将从毛发中提取的蛋白质片段与毛发损伤类型相关联来检测毛发损伤类型的系统和方法。将毛发损伤类型或来源与标记蛋白质片段相关联的方法包括产生两个相同的毛发样品样品A和样品B;向样品A施用损伤组合物或处理剂(treatment);向样品B施用无损伤组合物或处理剂；使用合适的溶剂样品从样品A和样品B的每个中提取所述不稳定蛋白质(liable protein);用MALDI-MS分析得自样品A和样品B的蛋白质片段样品；比较样品A和样品B的MALDI-MS结果；通过鉴定所述存在于样品A中而不存在于样品B中的独特修饰模式(unique modification pattern)来鉴定所述标记蛋白质片段。用于展示毛发损伤类型或来源的方法，所述方法包括使用合适的溶剂从毛发样品中提取所述不稳定蛋白质；用MALDI-MS分析所述蛋白质片段样品；得到蛋白质片段结果；以及通过比较所述蛋白质片段结果与对于特定损伤的标记蛋白质片段列表来鉴定所述毛发损伤。附图
概沭图I :该图是漂白剂导致的损伤毛发的标记蛋白质片段的MALDI-MS结果与未损伤毛发的蛋白质片段的MALDI-MS结果的比较。发明详沭如本文所用，“毛发”指人或动物来源的角质纤维，例如头发或睫毛。此外，如本文所用，将术语“角质蛋白质”理解为指毛发中存在的那些蛋白质。如本文所用，术语“蛋白质片段”指在角质蛋白质结构损伤后脱离的氨基酸和较大的蛋白质，它们通过静电相互作用、结合基质蛋白质和脂质的弱氢键、或者不包括混入角质蛋白质结构的任何其它力而保持在毛发结构内。如本文所用，“标记蛋白质片段”指已经与特定毛发损伤和/或损伤处理类型相关联的蛋白质片段。如本文所用，“洗脱物”“洗脱”等指经由接触毛发与未添加任何还原剂或萃取剂的水溶液从毛发中移除蛋白质，从而不改变角质蛋白质结构并且不中断或还原毛发样品中存在的化学键，所述化学键不是静电相互作用、结合基质蛋白质和脂质的弱氢键、或者不包括混入角质蛋白质结构的任何其它力。如本文所用，“可洗脱的”指毛发样品中存在的蛋白质片段，其在不加入任何还原剂或萃取剂的情况下可在水溶液中从毛发结构中移除。此外，“可洗脱的”指在基本上由水组成的溶液中可移出毛发结构的蛋白质，所述溶液不中断或还原角质蛋白质结构中存在的 化学键，所述化学键不是静电相互作用、结合基质蛋白质和脂质的弱氢键、或者不包括混入角质蛋白质结构的任何其它力。已经开发了一种方法，该方法利用水溶液从毛发中提取蛋白质片段，不改变角质蛋白质结构，用于检测和展示毛发损伤。在提交于2010年5月17日的专利申请61/345, 321中描述了一种此类方法。在从毛发中提取出蛋白质片段时分析该蛋白质片段。从对该蛋白质片段的分析中，鉴定毛发已经发生的损伤类型是可能的，尤其是测定毛发损伤的来源是可能的。一种此类特异性标记蛋白质片段包括当漂白毛发时产生的那些标记蛋白质片段。可使用基于抗体的检测和/或质谱仪技术测试一种毛发样品，提取蛋白质片段并测试所得蛋白质片段。在一个实施方案中使用Matrix Assisted LaserDesorptionIonization (“MALDI”)，也称为 MALDI-TOF 质谱仪“MALDI-MS”，来评估蛋白质片段。这种技术是质谱仪中使用的软电离技术。MALDI-MS可用于分析生物分子如肽和蛋白质以及大的有机分子如聚合物。在MALDI中，分析物首先与UV吸收基质如α -氰基-4-羟基肉桂酸(CHCA)共结晶，然后经受脉冲激光(YAG或氮激光)辐射。这引起分析物/基质结晶的蒸发/解吸并产生离子，所述离子被传送到质谱分析仪中进行检测。在MALDI-T0F中，使用了飞行时间质谱分析仪。可以MS模式获取MALDI-T0F数据，从而产生分子量信息(例如肽)，并且可使用MS/MS模式(例如肽序列/结构信息)。典型的MALDI质谱采集需要小于一分钟的时间，因此它可用于快速筛选受关注样品中的分子种类。可通过比较在不同条件下处理的样品(如原始毛发对漂白的毛发样品)中获取的质谱检测改变和分子标记。可在发生或不发生酶消化蛋白质的情况下进行MALDI-MS。然后将蛋白质片段测试结果与已知的标记蛋白质片段库进行比较，以鉴定毛发损伤为何种类型，以及在一些情况下，毛发损伤的初始来源，即漂白。这使得能对损伤进行“指纹识别”;意指如果测试毛发样品并且所述结果包括某些标记蛋白质片段，那么所述毛发样品已经受到特定来源的损伤。用于评估蛋白质片段的附加方法包括但不限于液相色谱法-电喷雾串联质谱，可产生对蛋白质片段的抗体并且可开发出ELISA测定法。此外可使用iTRAQ方法,通过Applied Biosystems,Carlsbad California可用的试剂产生同位素标记与每个赖氨酸侧链和蛋白质片段游离N-末端基团的共价胺键。这使得多个样品可同时通过MALDI MS进行分析。多个样品可同时通过MALDI MS进行分析，以最小化由于测试变异性引起的测试数据的差异。可通过用多种不同组合物或处理剂损伤毛发样品，然后通过比较所得蛋白质片段与未损伤的类似毛发样品进行分析来产生这些标记蛋白质片段的库。可通过MALDI-MS鉴定标记蛋白质片段，因为据信基于毛发遭受的损伤类型将产生相同的标记蛋白质结果。这意味着标记蛋白质片段指示毛发损伤的类型或来源。漂白引起的毛发损伤导致特定的标记蛋白质片段，UV引起的毛发损伤导致特定的标记蛋白质片段等。据信漂白引起的毛发损伤导致蛋白质片段N-末端的+28和+71修饰，所述蛋白质
片段具有以下结构
权利要求
1.一种将毛发损伤类型或来源与标记蛋白质片段相关联的方法，所述方法包括 a)产生两种相同的毛发样品样品A和样品B； b)向样品A施用损伤组合物或处理剂；向样品B施用无损伤组合物或处理剂； c)使用合适的溶剂样品从样品A和样品B的每个中提 取不稳定蛋白质； d)用MALDI-MS分析来自样品A和样品B的蛋白质片段样品； e)比较样品A和样品B的MALDI-MS结果； f)通过鉴定存在于样品A中而不存在于样品B中的独特修饰模式来鉴定所述标记蛋白质片段。
2.如权利要求I所述的方法，其中MALDI-MS在蛋白质的酶消化后进行。
3.如权利要求I所述的方法，其中MALDI-MS在不发生蛋白质的酶消化的情况下进行。
4.一种用于展示毛发损伤类型或来源的方法，所述方法包括 a)使用合适的溶剂从毛发样品中提取不稳定蛋白质； b)用MALDI-MS分析所述蛋白质片段样品；得到蛋白质片段结果； c)通过比较所述蛋白质片段结果与对于特定损伤的标记蛋白质片段列表来鉴定所述毛发损伤。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述MALDI-MS蛋白质片段结果包括对具有以下结构蛋白质片段的N-末端的a+28和+71修饰，所述蛋白质片段
全文摘要
本发明公开了用于展示毛发损伤类型和/或来源的方法的实施方案，该实施方案包括用水溶液从毛发样品中提取蛋白质片段、用MALDI-MS测试法测试所得蛋白质片段、然后比较损伤的样品和未损伤的样品之间的结果或比较损伤的样品和已知的标记蛋白质片段列表之间的结果，以鉴定损伤类型和/或来源。
文档编号G01N33/68GK102893160SQ201180024698
公开日2013年1月23日 申请日期2011年5月17日 优先权日2010年5月17日
发明者M.G.戴维斯, M.J.弗拉格勒, Y.孙, T.乔德哈里 申请人:宝洁公司