亚星游戏官网-www.yaxin868.com

专利名称：血清中胆固醇的均相化学发光法试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及荧光测试物的使用，具体是一种血清中胆固醇的均相化学发光法 试齐U盒。
背景技术：
血清中胆固醇的测定方法一般可分为化学法、酶法和色谱法3大类。早期测定方 法是萃取法和化学法，美国疾病控制中心总胆固醇的测定方法为Lidberman-Burchard改 良法。血清中胆固醇有两种形式一为游离胆固醇；另一为胆固醇与脂肪酸结合的胆固醇 酯。目前国内几乎所有的临床实验室都用酶法检测血清总胆固醇水平，即包括游离胆固醇 和胆固醇酯之和。一般都包括以下几个基本反应步骤用最合适的胆固醇酯酶(CHE)水解 胆固醇酯生成胆固醇和脂肪酸；水解后的胆固醇和游离胆固醇被胆固醇氧化酶氧化生成 H2O2，在过氧化物酶(POD)的催化下，H2O2，4-氨基安替比林G-AAP)和2，4-二氯酚形成有 色染料(常为醌亚胺类)，这些物质的生成量与样本中的胆固醇含量成正比。最后通过分 光光度法计算出相应的总胆固醇浓度。现有的胆固醇磷酸氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安 替比林和酚法(CH0D-PAP法)一步终点法测定方法检测范围窄、灵敏度低、误差大、操作繁 琐。
发明内容本实用新型就是为了解决广泛应用血清中胆固醇的均相化学发光法的问题，而提 供一种便于各类医疗机构能够普遍应用的血清中胆固醇的均相化学发光法试剂盒。本实用新型是按以下技术方案设计的。一种血清中胆固醇的均相化学发光法试剂盒，包括四方形盒体及与其一侧边弯折 连体的盒盖，而在盒体内一侧边形成有插孔的试剂架上，分别容纳胆固醇定标液瓶，高值胆 固醇质控血清瓶和低值胆固醇质控血清瓶，试剂架侧壁与对应盒壁间垂直形成有分置酶混 合液瓶和发光应用液瓶的隔板。应用本实用新型中试剂，不仅保持了灵敏度更高、线性范围宽、成本低、准确度高， 在反应中，不需要离心或分离步骤，直接进行发光强度测定的优点。而且，便于普及，可用于 全自动测定，也可用于手工测定或半自动测定，适用于大中小各层次的医疗和研究机构使用。

图1是本实用新型结构示意图。图中1.盒体 2.盒盖3.插孔4.试剂架5.胆固醇定标液瓶6.高值胆固醇质控血清瓶[0012]7.低值胆固醇质控血清瓶8.酶混合液瓶9.发光应用液瓶10.隔板。
具体实施方式
一种血清中胆固醇的均相化学发光法试剂盒，包括四方形盒体1及与其一侧边弯 折连体的盒盖2，而在盒体1内一侧边形成有插孔3的试剂架4上，分别容纳胆固醇定标液 瓶5，高值胆固醇质控血清瓶6和低值胆固醇质控血清瓶7，试剂架4侧壁与对应盒壁间垂 直形成有分置酶混合液瓶8和发光应用液瓶9的隔板10。所述血清中胆固醇的均相化学发光法试剂盒，其形成有插孔3的试剂架4和隔板 10是防振瓦楞纸。应用本实用新型中试剂所采用的方法是血清中的胆固醇在胆固醇氧化酶的作用 下，胆固醇氧化酶氧化生成H2O2，在过氧化物酶POD的催化下，H2O2，异鲁米诺产生光子，光子 强度与样本中的胆固醇含量成正比。最后通过与胆固醇标准品比较计算出相应的总胆固醇 浓度。具体反应见化学反应式1 3。
胆固醇酯水解酶
胆固醇酯+ 3H20 ,—胆固醇+3RCOOH(1)
胆固醇氧化酶
胆固醇+ O2 ^ 类固醇酮+H2O2(2)
H2O2+异鲁米诺POD · 氧化鲁米诺+ H2O+光子(3)应用鲁米诺-过氧化物酶的化学发光反应进行血清胆固醇分析，灵敏度高达 10_18mol，可在20分钟内快速检测出结果，便于完全实现自动化，有效期高达一年以上，无放 射性和致畸物质，便于环保而受到普遍欢迎，是目前发展最迅速的检测技术。 例如，胆固醇在胆固醇氧化酶的催化下生成H2A，在过氧化物酶POD的催化下，H2A 和异鲁米诺生成氧化异鲁米诺和水，同时放出光子而发光，血清中胆固醇浓度越高，发出的 光信号就越强，用已知浓度的胆固醇与测出的光信号作剂量-反应曲线；未知样品的胆固 醇含量可从该曲线推算出来。未知浓度的胆固醇可从该曲线推算出来；所述的化学发光物 为异鲁米诺，这便是本发明的化学发光测定方法，该方法可用于测定血清中胆固醇含量。1.试剂组成每升Tris-HCl 缓冲液内含 Tris 150mmol (pH7. 6) ,2,4- 二氯酚 3. O mmol、胆酸钠 4. 2mmol、Triton X-IOO 0. 12g、ATP 1. 2mmol、胆固醇氧化酶 1200U、POD 1200U、4_ 氨基安 替比林 1. 6mmol、Proclin-300 防腐剂 200 μ 1。发光液:100mlTris buffer 含鲁米诺:0. Olmol/L(0. 178g)，Trisbuffer 配方 0. lmol/L 6. 07gTris 溶于 500ml 水，用盐酸调 pH = 8. 8。仪器MPC_1单光子化学发光免疫分析仪。2.测定方法样品混合酶液发光液=1:5:5。温度37°C温浴5min，，测定 RLU值，以胆固醇定标液定标，测定标本时和高、低质控液同时测定，当高、低质控液测定值
4均在此范围时，其测定数据可靠。作出剂量-反应曲线，根据样品的发光强度RLU值从该曲线求出血清胆固醇三酯 的浓度。或直接由公式求出胆固醇三酯的浓度=(样品RLU值/标准RLU值)X标准浓度。上述方法灵敏度更高、线性范围宽，监测范围为2. 0 X 10- . OXlO-3,成本低、准确 度高，测定的光信号，可一个一个光子计数，因此精密度和准确度高于比色法；在反应中，不 需要离心或分离步骤，直接进行发光强度测定。所述的酶混合液瓶8预装有100毫升胆固醇试剂酶混合液；所述发光应用液9预 装有IOOml的异鲁米诺发光应用液；胆固醇定标液瓶5，高值胆固醇质控血清瓶6和低值胆固醇质控血清瓶7分别预装 2ml试剂，备用。盒体1内附加实验操作说明书(未图示)。
权利要求1.一种血清中胆固醇的均相化学发光法试剂盒，包括四方形盒体(1)及与其一侧边弯 折连体的盒盖O)，其特征在于盒体⑴内一侧边形成有插孔⑶的试剂架⑷上，分别容 纳胆固醇定标液瓶(5)，高值胆固醇质控血清瓶(6)和低值胆固醇质控血清瓶(7)，试剂架 ⑷侧壁与对应盒壁间垂直形成有分置酶混合液瓶⑶和发光应用液瓶(9)的隔板(10)。
2.根据权利要求1所述血清中胆固醇的均相化学发光法试剂盒，其特征在于形成有 插孔⑶的试剂架⑷和隔板(10)是防振瓦楞纸。
专利摘要本实用新型涉及一种血清中胆固醇的化学发光测定方法试剂盒，属于荧光测试物的使用。本实用新型包括方形盒体及与其一侧边弯折连体的盒盖，而在盒体一侧长边内形成有插孔的试剂架上分别容纳胆固醇定标液瓶，高值胆固醇质控血清瓶和低值胆固醇质控血清瓶，试剂架旁侧形成有卧置酶混合液瓶和发光应用液瓶的空间。应用异鲁米诺-过氧化物酶的化学发光反应进行血清胆固醇分析方法设计的本实用新型，不仅保持了灵敏度更高、线性范围宽、成本低、准确度高的优点，而且，便于普及，可用于全自动测定，也可用于手工测定或半自动测定，适用于大中小各层次的医疗和研究机构使用。
文档编号G01N21/76GK201903503SQ201020614278
公开日2011年7月20日 申请日期2010年11月19日 优先权日2010年11月19日
发明者孙辉, 彭学静 申请人:沃克(天津)生物科技有限公司