专利名称：一种盲椿象卵的染色检测方法
技术领域：
本发明属于植物保护技术领域，具体地说，涉及一种盲椿象卵的染色检测方法。
背景技术：
1997年，我国开始商业化种植Bt棉花，至2008年种植面积已达380万公顷，约占我国棉花总面积的70%。Bt棉花的大面积种植有效控制了棉铃虫Helicoverpa armigera 的危害发生，降低了防治棉铃虫的农药用量。然而，化学农药的减少使用给棉田盲椿象种群增长提供了空间，盲椿象已上升成我国Bt棉花上的主要害虫，并波及了枣树等多种作物。 我国盲椿象种类众多，优势种类包括绿盲蝽Apolygus lucorum (Meyer-Dur.)、中黑盲蝽 Adelphocoris suturalis (Jakovlev)、三点盲虫春 Adelphocoris fasiaticollis (Reuter)、 苜猜盲蝽 Adelphocoris Iineolatus(Goeze)禾口牧草盲蝽 Lygus pratensis (L.)。盲椿象产卵于植物组织之中，仅留卵盖在植物表面，卵盖长不足1cm，颜色较浅，因此即使在体式显微镜下也较难快速、准确地对其进行观察、计数，这使盲椿象卵量调查工作难以开展。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速、准确的盲椿象卵的染色检测方法。为了实现本发明目的，本发明的一种盲椿象卵的染色检测方法，其是将植物材料浸渍于0. 5-2w/v%曙红溶液中1-5分钟后，取出用水冲洗，然后吸干表面水分，肉眼观察或镜检计数。优选地，其是将植物材料浸渍于曙红溶液中2分钟。其中，镜检使用的是显微镜或放大镜。植物组织中盲椿象卵的卵盖部分被染成红色，与植物组织的颜色反差明显，从而观察记录盲椿象卵的数量。所述曙红溶液是以蒸馏水或70% -75%酒精配制的，配制好的曙红溶液保存于 4°C冰箱中。本发明还提供一种盲椿象卵的染色方法，其是将植物材料浸渍于0. 5-2w/v%曙红溶液中1-5分钟后，取出用水冲洗，然后吸干表面水分。盲棒象卵来自于绿盲虫春(Apolygus lucorum)、中黑盲虫春(Adelphocoris suturalis)、三点盲虫春(Adelphocoris fasiaticollis) > 苜猜盲虫春(Adelphocoris lineolatus)禾口 / 或牧草盲蝽(Lygus pratensis)。本发明提供了一种盲椿象卵的染色与镜检方法，为盲椿象卵的快速、准确调查统计，以及相关科学研究和测报调查奠定基�。视谕乒阌τ�。本发明的盲椿象卵的染色检测方法适用于盲椿象的所有寄主植物以及各种植物的组织器官。
图1为不同染色剂对绿盲蝽卵的染色效果，左曙红；中酚红；右藏红。图2为棉花植株不同组织器官上盲椿象卵的曙红溶液染色效果，左叶柄；中苞叶；右叶脉。
具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。实施例各种染色剂对植物组织的染色试验供试染色剂共11种，具体种类及配制方法依次为苯胺蓝、孔雀石绿、藏红T、碱性品红、结晶紫直接用蒸馏水依次配制成浓度为0.1%、0.2%、1.0%、1.0%、9.0%溶液； 苯酚红、曙红Y用75%酒精配制成浓度为0.3%、1%溶液；溴甲酚紫用20%酒精配制成浓度为0. 溶液；考马斯亮兰R250用3. 75%酒精配制成浓度为0. 溶液；溴酚蓝用 0. 003mol/L氢氧化钠溶液配制成浓度为0. 05%溶液；配制后上述溶液均可在4°C下保存备用。而鉻黑T与100倍重的氯化钠进行混合研磨后，直接密封低温保存，使用时加蒸馏水溶解即可。上述试剂均购自北京化工厂。取配制好的染色剂溶液IOmL加入试管中，将产有绿盲蝽卵的豆荚浸入染色剂溶液，3min后将豆荚取出，流水冲洗，再用吸水纸吸干表面水滴。将被染色的豆荚放在生物解剖镜下观察，选择出对绿盲蝽卵着色较深、对植物组织染色较浅的染色剂。从田间采取杂草、牧草、作物、果树等50多种常见的寄主植物，取下各自的茎杆，分别放在养虫盒里供绿盲蝽成虫产卵，24小时内将其取出。把带有卵的茎杆放在经初步筛选的染色剂溶液中染色， 作进一步筛选。对棉花植株上产有绿盲蝽卵的叶片、花、蕾、铃、茎、苞叶等不同器官逐一进行染色，比较不同器官卵的染色效果。对豆荚上绿盲蝽、中黑盲蝽、苜蓿盲蝽、三点盲蝽和牧草盲蝽卵进行染色处理，比较对五种盲椿象卵的染色效果。设置0. 5、1、1. 5、2、2. 5、3、15min七个时间处理，比较不同染色时间下豆荚上盲椿
象卵的染色效果，筛选最佳染色时间。结果表明，苯胺兰和溴甲酚紫对盲椿象卵基本没有染色作用，铬黑和考马斯亮兰的染色效果也较差，藏红、酚红、曙红、碱性品红、结晶紫、孔雀石绿对卵的染色效果比较理想。但碱性品红、结晶紫、孔雀石绿将植物组织同样染色较深，卵和周围组织之间颜色反差不明显；而酚红、曙红、藏红染色后植物组织的着色较浅，卵和周围组织之间颜色反差比较明显(图1)。结果表明，将产有卵的50多种植物的枝条在酚红、曙红、藏红三种染色液中逐一进行染色，结果表明曙红的染色效果最好。曙红的染色效果优于酚红，后者的着色整体偏浅。而藏红对卵周围组织的着色深于曙红，其卵和植物的颜色反差不如曙红。曙红对棉花叶片、花、蕾、铃、茎、苞叶等不同器官上盲椿象卵均有着比较理想的染色效果(图2)。曙红对绿盲蝽、中黑盲蝽、苜蓿盲蝽、三点盲蝽和牧草盲蝽卵的染色效率基本一致，没有明显差别。曙红的染色效果均随着染色时间的延长而不断提高。曙红的最佳染色时间为2min。盲椿象卵盖呈椭圆形(长径为0. 25-0. 40毫米；短径为0. 10-0. 16毫米)，中间有微微的凹陷，染色后卵盖四周一般着色较深，中间颜色偏浅。同时，卵盖或稍微高于植物表面，或与植物表面平齐但与四周植物组织存在明显间隙。通过上述特征，可有效地将盲椿象卵盖与植物组织或其它昆虫区别开来。
本发明提供的盲椿象卵的染色检测方法，盲椿象卵经曙红染色后，一般肉眼就能进行有效识别；在生物显微镜或手持放大镜下，调查计数则更加方便、准确。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
权利要求
1.一种盲椿象卵的染色检测方法，其特征在于，将植物材料浸渍于0. 5-2w/V%曙红溶液中1-5分钟后，取出用水冲洗，然后吸干表面水分，进行检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将植物材料浸渍于曙红溶液中2 分钟。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述曙红溶液是以蒸馏水或 70% -75%酒精配制的。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，检测为肉眼观察或镜检计数。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，镜检使用的是显微镜或放大镜。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，盲椿象卵来自于绿盲蝽 (Apolygus lucorum)、中漂盲虫舂(Adelphocoris suturalis)、三点盲虫舂(Adelphocoris fasiaticollis)、苜猜盲蝽(Adelphocoris lineolatus)禾口 / 或牧草盲蝽(Lygus pratensis)0
7.一种盲椿象卵的染色方法，其特征在于，将植物材料浸渍于0. 5-2w/v%曙红溶液中 1-5分钟后，取出用水冲洗，然后吸干表面水分。
全文摘要
本发明提供了一种盲椿象卵的染色检测方法，其是将植物材料浸渍于0.5-2w/v％曙红溶液中1-5分钟后，取出用水冲洗，然后吸干表面水分，肉眼观察或镜检，植物组织中盲椿象卵的卵盖部分被染成红色，与植物组织的颜色反差明显，从而快速、准确地检测盲椿象卵的数量。该方法简便实用，解决了植物组织中的盲椿象卵难于调查的问题，适于推广应用。
文档编号G01N1/30GK102323201SQ20111014428
公开日2012年1月18日 申请日期2011年5月31日 优先权日2011年5月31日
发明者吴孔明, 张永军, 陆宴辉 申请人:中国农业科学院植物保护研究所
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