专利名称：一种低温提取植物药中无机阴离子及离子色谱分析方法
技术领域：
本发明涉及一种低温提取植物药中无机阴离子及离子色谱分析方法，属于药物化学提取及分析技术领域。
背景技术：
植物药由于种类繁多且具有明显的疗效与较低的副作用，因此在临床方面的应用具有历史悠久的特点，然而植物药中的复杂有机、无机化学成分尚未阐明，这便是植物药药效物质基础、质量控制及作用药理研究中的主要瓶颈。目前我国植物药的发展仍处于方兴未艾的时期，因此，化学成分的定性定量分析在植物药研究过程中显得及其重要。各种色谱与质谱的联用技术是目前定性定量分析有机化学成分的主流，王广基等人采用高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪对中药复杂体系中化学成分的快速筛选与鉴定(公开号CN 101382525A)对药物中有机成分分析提供了一种快速简便的方法，但对于药物中无机成分中的非金属元素分析鲜有报道。植物药在民间均以口服、水煎煮或直接入药为主，植物药中的无机成分在水溶液中易溶出，药物中无机成分分析以金属元素分析居多，而对阴离子成分研究甚少。无机阴离子对于人体健康的影响及药理作用如何鲜有报道。近年来食品中阴离子的价值及潜在的�：际艿饺嗣堑钠毡楣刈�。常见的无机阴离子F_、Cl' Br' N02_、N03_、PO43' S042_适当摄入对人体是有益的，但摄入过多则会对人体产生�：ψ饔�。因此，对植物药药中的水溶性阴离子进行定性定量分析，为药物中的药效与阴离子的关系、无机阴离子对人体健康及药物品质的影响提供理论性依据，对于保障人类健康、促进植物药市场国际化具有重大意义。传统的化学方法分析测定常见无机阴离子，存在操作繁琐、耗时、检出限高、并且只能分析测定单个阴离子的特点。当前应用较广的连续流动分析仪，仍存在不能同时测定多个离子的不足之处。目前食品安全检测部分阴离子已存在国家标准，但国家标准中测定的阴离子的方法多为传统的化学分析方法，在同时测定多种阴离子方面仍存在不足。离子色谱法具有分析速度快、检测灵敏度高、选择性稳定性好、可同时检测多种离子的特点，已经成为无机阴、阳离子和部分有机离子最主要的分析方法，在食品、农药及水质检验等领域得到了广泛应用。但离子色谱分析中前处理技术是一个关键的步骤，也是目前离子色谱发展过程中的薄弱环节之一。固体样品提取的前处理技术有传统浸提法及新型处理方法如加速溶剂萃取法(ASE)、微波辅助萃取法(MAE)、超临界流体萃取法(SCFE)、超声波提取法 (UAE)等，新型的处理技术虽然具有提取速度快、物耗能耗少等特点，可代替传统方法，但是仍然存在仪器设备的运行成本高，仪器工作噪声大，而且在测定分析中会引入多种杂质成分等的不足，在实际应用中难以普及。因此，目前非常需要一种具有普遍实用性、引入杂质成分小、环保型处理固体样品的新技术，并对其进行准确分析。目前，超低温技术应用在液化天然气、医疗及生物科技等方面，尤其在生物技术保存细胞方面运用极其广泛，如超低温法冻存滇紫草细胞(公开号CN 101343620A)，从人类同种异体细胞提取细胞液中采用超低温萃取技术提取细胞液(公开号CN101380333A)，以及用于保健食品、护肤品、低温设备的开发研究。但利用低温提取植物药中的无机阴离子组分，结合离子色谱法分析同时测定多种阴离子的方法尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有提取分离分析阴离子技术的不足，提供一种低温提取植物药中无机阴离子及离子色谱分析方法。采用液氮与去离子水组合作为提取剂进行提取无机阴离子，并联合离子色谱分析系统实现同时分析测定常见的无机阴离子。所测七种无机阴离子(F_、Cl_、N02_、Br_、N03_、P043_、S042_)在O. 4 12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为I. 20 5· 00μ g/L，精密度为O. 05% 7%，加标回收率为70% 82%。本发明包括以下步骤I、植物药中无机阴离子提取液的制备将植物药样品在低于60°C条件下烘至含水量低于5%，冷却，并用粉碎机粉碎至粒度为2 4mm放入干燥器中备用；称取Ig IOg上述植物药样品置于250mL塑料烧杯中，加入5 30g的液氮(-196°C )进行破碎，待液氮气化完之后，研磨至O. I O. 15mm ;称取O. 5 Ig液氮处理过的植物药样品于IOmL离心管中加入5 6mL去离子水浸提8—15min ;在转速为 2500—3000r/min下离心分离5_8min,得到无机阴离子提取液。取ImL提取液于IOmL容量瓶中用去离子水定容至刻度线，取5mL该定容后溶液经O. 22 μ m滤膜过滤得待分析的提取液。2、无机阴离子组分的同时测定分析(I)离子色谱分析仪测试条件离子色谱仪分离柱250mmX4mm，保护柱50mmX4mm，自动再生抑制器电流24mA ;色谱柱柱温30°C，温控电导检测器池温35°C。本发明中所设定的分析参数进样量为25 μ L，流速为I. 5mL/min，淋洗液为浓度 2. 8mmol/L的碳酸氢钠与浓度为3. 5mmol/L的碳酸钠的混合液。取ImL提取液在上述所设定的分析参数下按照附图2中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。即淋洗瓶I中的淋洗液通过泵2输送至进样阀3中与待分析的提取液一起输送至保护柱4和分离柱5中，对不同的阴离子进行分离，通过大抑制器降低背景导电， 提高灵敏度，并用检测池7，检测器8对阴离子进行检测。⑵结果在上述离子色谱分析仪测试条件下，通过检测提取液中的阴离子，并对其进行加标回收率实验，所测七种无机阴离子(F' Cl' NO2' Br' NO3' PO43' SO42O在O. 4 12mg/L 范围内具有良好的线性关系，检出限为I. 20 5. 00μ g/L，精密度为O. 05% 7%，加标回收率为70% 82%。与目前现有的离子色谱样品前处理技术相比，本发明具有以下优势本方法是采用液氮与去离子水组合作为提取剂进行提取无机阴离子，这种方法既排除了传统提取方法的弊端又保留了目前常用提取方法的优点，具有提取速度快且提取完全，提取剂用量少，试剂环保，操作简便等特点，是一种高效处理样品的理想方法。低温提取的离子色谱分析方法为分析天然药物中的阴离子提供了一种新的提取分析方法，为制定量标准提供理论依据，对保障我国人类健康具有现实意义。本方法对植物药的种类没有严格的限制，因此适用范围广。
图I :植物药中无机阴离子的提取流程2 :无机阴离子的离子色谱分析流程图，图2中I为淋洗液，2为泵，3为进样阀， 4为保护柱,5为分离柱,6为抑制器,7为检测池,8为检测器。
具体实施方案实施例I :金丝梅植物药中无机阴离子的提取分析I、无机阴离子提取液的制备将金丝梅样品置于50_60°C烘箱中烘至含水量为3%，冷却，并用粉碎机粉碎至粒度为2-4mm放入干燥器中备用；称取5g上述植物药样品置于250mL塑料烧杯中，加入15g的液氮进行破碎，待液氮气化完之后，研磨至O. 1-0. 12mm ;称取O. 5g液氮处理过的植物药样品于IOmL离心管加入6mL去离子水浸提IOmin,在转速为3000r/min下离心分离5min,得到提取液,取提取液 ImL于IOmL容量瓶中用去离子水稀释至10mL，取5mL该容量后溶液经O. 22 μ m滤膜过滤得待分析的提取液。2、离子色谱分析(I)离子色谱分析仪测试条件Dionex ICS1500离子色谱仪(美国戴安公司)，Chromeleon6. O色谱工作站， IonPacASH 分离柱(250mmX4mm), IonPac AG14 保护柱(50mmX4mm), ASRS-300 自动再生抑制器(电流24mA);色谱柱柱温30°C，DS6温控电导检测器(检测温度35°C )。本发明中所设定的分析参数进样量25 μ L，流速I. 5mL/min,淋洗液为2. 8mmol/L 碳酸氢钠与3. 5mmol/L碳酸钠的混合液。取ImL提取液在上述所设定的分析参数下按照附图2中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。(2)测定结果在上述离子色谱分析仪测试条件下，通过检测提取液中的阴离子，并对其进行加标回收率实验，所测七种无机阴离子(F' Cl' NO2' Br' NO3' PO43' SO42O在O. 4 12mg/L 范围内具有良好的线性关系，检出限为I. 20 5. 00 μ g/L,精密度为3% 6%，加标回收率为 75%。实施例2 :竹叶兰植物药中无机阴离子的提取分析I、无机阴离子提取液的制备将竹叶兰样品置于烘至含水量为4%，冷却，并用粉碎机粉碎至粒度为2-4_放入干燥器中备用。称取IOg上述植物药样品置于250mL塑料烧杯中，加入30g的液氮进行破碎，待液氮气化完之后，研磨至O. 1-0. 15mm ;称取Ig液氮处理过的植物药样品于IOmL离心管加入 6mL去离子水浸提IOmin,在转速为3000r/min下离心5min,取上清液ImL于IOmL容量瓶中用去离子水稀释至刻度，取5mL该溶液通过碳十八固相萃取小柱净化，再经O. 22 μ m滤膜过滤得待分析的提取液。2、离子色谱分析(I)离子色谱分析仪测试条件Dionex ICS1500离子色谱仪(美国戴安公司)，Chromeleon6. O色谱工作站， IonPacASH 分离柱(250mmX4mm), IonPac AG14 保护柱(50mmX4mm), ASRS-300 自动再生抑制器(电流24mA);色谱柱柱温30°C，DS6温控电导检测器(池温35°C )。本发明中所设定的分析参数进样量(25yL)，流速(1.5mL/min)，淋洗液 (2. 8mmol/L 碳酸氢钠，3. 5mmol/L 碳酸钠)。取ImL提取液在上述所设定的分析参数下按照附图2中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。(2)测定结果在上述离子色谱分析仪测试条件下，通过检测提取液中的阴离子，并对其进行加标回收率实验，所测七种无机阴离子(F' Cl' NO2' Br' NO3' PO43' SO42O在O. 4 12mg/L 范围内具有良好的线性关系，检出限为I. 20 5. 00 μ g/L,精密度为2% 7%，加标回收率为 81%。
权利要求
1.一种低温提取植物药中无机阴离子及离子色谱分析方法，其特征在于其包括以下步骤D、植物药中无机阴离子提取液的制备将植物药样品在低于60°C条件下烘至含水量低于5%，冷却，并用粉碎机粉碎至粒度为2 4mm放入干燥器中备用；称取Ig IOg上述植物药样品置于250mL塑料烧杯中，加入_196°C的液氮5 30g进行破碎，待液氮气化完之后，研磨至0. I 0. 15mm ;称取0. 5 Ig液氮处理过的植物药样品于IOmL离心管中加入5 6mL去离子水浸提8—15min ;在转速为2500—3000r/min下离心分离5-8min，得到无机阴离子提取液；取ImL提取液于IOmL容量瓶中用去离子水定容至10mL，取5mL该定容后溶液经0. 22 y m滤膜过滤得待分析的提取液；2)、无机阴离子组分的同时测定分析(1)、离子色谱分析仪测试条件离子色谱仪分离柱250mmX 4mm，保护柱50mmX 4mm，自动再生抑制器电流24mA，色谱柱柱温30°C，温控电导检测器池温35°C ;进样量为25ii L，流速为I. 5mL/min，淋洗液为浓度2.8mmol/L的碳酸氢钠与浓度为3. 5mmol/L的碳酸钠的混合液；(2)、测试流程淋洗瓶⑴中的淋洗液通过泵⑵输送至进样阀(3)中与ImL待分析的提取液一起输送至保护柱(4)和分离柱(5)中，对不同的阴离子进行分离，通过抑制器(6) 降低背景导电，提高灵敏度，并用检测池(7)，检测器(8)对阴离子进行检测。
2.根据权利要求I所述的低温提取植物药中无机阴离子及离子色谱分析方法，其特征在于所述植物药为金丝梅和竹叶兰。
3.根据权利要求I所述的低温提取植物药中无机阴离子及离子色谱分析方法，其特征在于所述离子色谱仪为美国戴安公司离子色谱仪。
全文摘要
本发明涉及一种低温提取植物药中无机阴离子及离子色谱分析方法。以植物药为原料，采用液氮与去离子水组合作为提取剂进行提取无机阴离子，并联合离子色谱分析系统实现同时分析测定常见的无机阴离子。所测七种无机阴离子(F-、Cl-、NO2-、Br-、NO3-、PO43-、SO42-)在0.4～12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为1.20～5.00μg/L，精密度为0.05％～7％，加标回收率为70％～82％。为制定量标准提供理论依据，对保障人类健康具有现实意义。本方法对植物药的种类没有严格的限制，因此适用范围广。
文档编号G01N30/06GK102590417SQ20121002049
公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月30日 优先权日2012年1月30日
发明者张英杰, 杨敏, 杨树科, 桂花, 王红斌, 谭伟, 郭俊明, 马林转 申请人:云南民族大学
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