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专利名称：一种厚朴精制饮片的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及厚朴精制饮片的加工方法，尤其是加工过程中的质量控制方法。
背景技术：
中药现代化是当代中药发展中的一个最热门的研究方向，已成为国内外医药界的一大热点但中药的均一稳定性——即质量控制的问题则是制约中药发展，走向国际市场的瓶颈问题。中药指纹图谱的研究和建立正是为了解决药品质量控制和监督这一关键问题而采取的一种方法。虽然中药指纹图谱的概念和原理已经较为常见，其研究也成为中医药领域的热点课题之一。但是，具体到某种中药中如何具体实施却还是非常困难。原因在于我国地域广阔，药用植物资源极为丰富，目前拥有中草药12807种，其中植物药 11146种，动物药1581种，矿物药80种。由于药材品种繁多，地区用药习惯各异，古代本草记载简单，误传错用和用药演变等因素，导致药材同物异名、同名异物以及正品、非正品都入药的混乱现象非常严重。更为普遍的是，影响中药成分的因素复杂，即使是同一药材，其有效化学成分常因生态环境、采集时间、储存和炮制方法等不同而有差异。这些问题严重影响了中药的质量和用药的安全性与有效性。相应地，要稳定、可靠地进行中药指纹图谱检测，获得标准指纹图谱，进而检测待检样品是极其困难的。提取溶剂的选择、工艺流程、参数的选择等等都是难点技术，也没有先有技术或者标准可供参考。并且传统的中药质量控制方法与现代化学合成药品的质量控制技术有着根本区别。中药一般为复方制剂，中药理论讲究君、臣、佐、使；讲究药物组方配伍；讲究因人而异、 天人合一、辨症施治，方剂中有效成份极为复杂，大部分结构、作用机理尚不清楚。在现有条件下，以单一化学成份分析的观点，不适合中药(天然药物)这一复杂成份分析体系。也就是中药部是混合物所以其实施指纹图谱识别和质量控制的难度又进一步增大。总体来说，中药材生产过程复杂，受多种因素的制约，这些都为其质量可控提出了新的课题。而药材、中成药质量标准现代化是中药现代化的一个重要组成部分。目前为止， 在厚朴精制饮片生产和流通中，还没有一种质量控制手段能够全面、综合地反映出中药产品的质量变异，有效地进行全过程的质量控制。本领域的技术人员也无法由其它重要的指纹图谱和质量控制方法得到厚朴精制饮片的利用指纹图谱进行质量控制的方法，同时又不付出创造性劳动。

发明内容
本发明的目的是提供了一种厚朴精制饮片生产的质量控制方法，以保障厚朴精制饮片的产品质量可靠。为了达到本发明的目的，采用的技术方案是一种厚朴精制饮片的质量控制方法， 包括厚朴精制饮片的制备和检测，检测步骤包括
(1)以厚朴显微特征为对照，显微鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴；(2)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，薄层色谱方法鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分；(3)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量；(4)以厚朴酚、和厚朴酚为参照物，以高效液相指纹图谱的共有峰相对保留时间相对保留峰面积为对照，采用高效液相指纹图谱法测定所含厚朴的道地性。本发明的技术方案中，较现有技术的显著进步在在于不仅检测厚朴的存在与否和含量，并且还进一步检测厚朴的道地性；因为中医药的特殊性，原料道地与否直接影响到药物的功效和性能，这是本领域公认的。但是现有的厚朴产品的质量控制过程中还没有进行道地性检测的技术，也没有相关的技术启示。进一步的改进是所述的显微鉴别方法为取本品，置显微镜下观察，粉末棕色。 纤维甚多，直径15 32 μ m，壁甚厚，有的呈波浪形或一边呈锯齿状，木化，孔沟不明显。石细胞类方形、椭圆形，卵圆形或不规则分枝状，直径11 65 μ m,有时可见层纹。油细胞椭圆形或类圆形，直径50 85 μ m，含黄棕色油状物。进一步的，所述的薄层色谱鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分方法为取过三号筛的本品粉末0. 5g，加甲醇5ml，密塞，振摇30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品，加甲醇制成每Iml各含Img的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲醇(17 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，在 100°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。所述的高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量方法为(1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为^4nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800 ；(2)对照品溶液的制备精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚Myg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取饮片制成粒径小于0. 3毫米的粉末，取该粉末0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8. 5 9. 5 1混合的混合液25ml，摇勻， 密塞，在36 42°C下浸渍16 20小时，精密量取滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度， 摇勻，即得；(4)测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4 μ 1与供试品溶液3 5 μ 1， 注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含厚朴酚(C18H1802)与和厚朴酚 (C18H1802)的总量不得少于1.6%。这样实际上是为了将饮片中的有效成分完全溶解和分散到甲醇溶剂中，然后和标准溶液对照测定单位体积中有效物质的含量。那么，如何使饮片粉末中的有效物质溶解到甲醇溶剂中就成了技术难题，直接影响检测结果的准确性。现有技术中例如申请号是 20091102^360.6中介绍的，就是利用超声设备，进行超声处理半小时来促进物质的溶解。 但是这样的技术方案一方面超声设备成本高，使用维护成本和技术难度较大，不利于产品
5生产现场的推广和使用。同时本领域技术人员一直认为物料粉碎得越细，则其中的有效物质越容易溶解到溶剂中。例如上述的专利中也提供的实施例也证明必须要将药品粉碎到80 目才能实现发明的目的。但是本发明反其道而行之，将物料粉碎到粒径在0. 27-0. 3毫米之间，大致也就是50目左右的细度，或者说能够过三号筛的程度；并利用静置溶解的方式反而取得了更好的技术效果，能够实现准确的目的。同时静置溶解的方式避免了有效物质受热挥发和分解，检测结果更加准确。本发明改变了本领域技术人员的技术偏见，采用特定的粉碎细度指标实现了利用常规的静置溶解的方法，实现了准确可靠检测厚朴饮片中有效物质的含量的目的。进一步的改进是，所述的指纹图谱鉴别道地性的方法为(1)色谱条件和系统适用性试验色谱柱大连依利特公司HypersilBDS C18色谱柱，4. 6Χ200πιπι，5μπι ；流动相甲醇-水(60 40)；流速:lml/min ；柱温室温；检测波长 ^4nm。理论板数按厚朴酚峰计应不低于3500 ；(2)供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，在-10°C冷冻6 10分钟，恢复室温后精密加入甲醇25ml，超声处理(功率250W，频率 40kHz) 30min,滤过，取续滤液，即得；(3)参照物溶液的制备精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚20 yg的溶液，即得；(4)指纹图谱获得分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，记录30分钟的色谱图，即得。以厚朴酚对照品的色谱峰(S峰)的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和峰面积比值。(5)检测方法按上述方法利用道地药材建立标准指纹图谱，然后待检样品的指纹图谱与标准指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，待检品品指纹图谱应与标准指纹图谱相似度大于0. 90可认定待检品为道地产品。


图1是厚朴精制饮片粉末显微特征图；图2是厚朴精制饮片含量测定色谱图，横坐标为单位为时间(min)，纵坐标为电压 (mV)；图3是厚朴精制饮片共有指纹图谱；图4是10批厚朴HPLC指纹图谱匹配结果图。
具体实施例方式下面结合实施例，对本发明进行进一步说明。实施例一高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚24 yg的溶液，即得。
供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8. 5 1混合的混合液25ml，摇勻，密塞，在36°C下浸渍16小时，滤过， 精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4 μ 1与供试品溶液3 5 μ 1，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1. 87%。实施例二高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚Myg的溶液，即得。供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8. 8 1混合的混合液25ml，摇勻，密塞，在38°C下浸渍18小时，滤过， 精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4 μ 1与供试品溶液3 5 μ 1，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1. 94%，所得色谱图如图2所示。实施例三高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚Myg的溶液，即得。供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9. 0 1混合的混合液25ml，摇勻，密塞，在39°C下浸渍20小时，滤过， 精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4 μ 1与供试品溶液3 5 μ 1，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1. 71%。实施例四高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚Myg的溶液，即得。供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9. 3 1混合的混合液25ml，摇勻，密塞，在41 °C下浸渍19小时，滤过， 精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4 μ 1与供试品溶液3 5 μ 1，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1. 84%。实施例五
7
高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚Myg的溶液，即得。供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9. 2 1混合的混合液25ml，摇勻，密塞，在37°C下浸渍17小时，滤过， 精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4 μ 1与供试品溶液3 5 μ 1，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1. 81%。实施例六高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为294nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800。对照品溶液的制备，精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚Myg的溶液，即得。供试品溶液的制备，取样品粉末(过三号筛)0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按9. 5 1混合的混合液25ml，摇勻，密塞，在38°C下浸渍16小时，滤过， 精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4 μ 1与供试品溶液3 5 μ 1，注入液相色谱仪，测定得有效物质含量占精制饮片干品的1. 83%。按照要求精制饮片的有效物质含量按干燥品计算，含厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚 (C18H18O2)的总量不得少于1.6%。实施例一到六的检测结果表明，样品中厚朴酚(C18H18O2) 与和厚朴酚(C18H18O2)的总量实际都不少于1.6%，均符合中国药典2010版厚朴含量测定项下的规定。方法学研究为了考察本发明的新检测方法的可靠性，则对其精密度、稳定性、试验方法的重复性进行考察。精密度试验取与实施例四同批次按同样方法制备的供试品溶液重复进样6次比较含量，结果如表1所示，RSD < 3%，证明该方法精密度较好。表1 对同一供试样品重复6次测试的结果
权利要求
1.一种厚朴精制饮片的质量控制方法，包括厚朴精制饮片的制备和检测，检测步骤包括(1)以厚朴显微特征为对照，显微鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴；(2)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，薄层色谱方法鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分；(3)以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量；(4)以厚朴酚、和厚朴酚为参照物，以高效液相指纹图谱的共有峰相对保留时间相对保留峰面积为对照，采用高效液相指纹图谱法测定其道地性。
2.根据权利要求1所述质量控制方法，其特征在于所述的显微鉴别方法为取本品， 置显微镜下观察，粉末棕色。纤维甚多，直径15 32 μ m，壁甚厚，有的呈波浪形或一边呈锯齿状，木化，孔沟不明显。石细胞类方形、椭圆形，卵圆形或不规则分枝状，直径11 65 μ m， 有时可见层纹。油细胞椭圆形或类圆形，直径50 85 μ m，含黄棕色油状物。
3.根据权利要求1所述质量控制方法，其特征在于所述的薄层色谱鉴别厚朴精制饮片中是否含厚朴有效成分方法为取过三号筛的本品粉末0. 5g，加甲醇5ml，密塞，振摇30 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液，另取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品，加甲醇制成每Iml 各含Img的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲醇(17 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，在100°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述质量控制方法，其特征在于所述的高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量方法为(1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水 (78 22)为流动相；检测波长为^4nm。理论板数按厚朴酚峰计算应不低于3800 ；(2)对照品溶液的制备精密称取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚Myg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇与乙醇按8. 5 9. 5 1混合的混合液25ml，摇勻，密塞，在36 42°C下浸渍 16 20小时，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得；(4)测定法分别精密吸取上述两种对照品溶液各4μ1与供试品溶液3 5μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计算，含厚朴酚(C18H18(^)与和厚朴酚(C18H1802) 的总量不得少于1.6%。
5.根据权利要求1所述质量控制方法，其特征在于所述的指纹图谱鉴别道地性的方法为(1)色谱条件和系统适用性试验色谱柱大连依利特公司HypersilBDSCw色谱柱， 4. 6X200mm，5ym;流动相甲醇-水(60 40)；流速lml/min ；柱温室温；检测波长 ^4nm。理论板数按厚朴酚峰计应不低于3500 ；(2)供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 在-10°C冷冻6 10分钟，恢复室温后精密加入甲醇25ml，超声处理(功率250W，频率 40kHz) 30min,滤过，取续滤液，即得；(3)参照物溶液的制备精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每 Iml含厚朴酚40 μ g、和厚朴酚20 μ g的溶液，即得；(4)指纹图谱获得分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，记录30分钟的色谱图，即得；以厚朴酚对照品的色谱峰(S峰)的相对保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和峰面积比值。(5)检测方法按上述方法利用道地药材建立标准指纹图谱，然后待检样品的指纹图谱与标准指纹图谱经计算机模拟相似度计算软件计算，待检品品指纹图谱应与标准指纹图谱相似度大于0. 90可认定待检品为道地产品。
6.根据权利要求5所述质量控制方法，其特征在于所述的标准指纹图谱的技术参数为共有峰的相对保留时间为峰1 (0. 1638 0. 1680)，峰2 (0. 2588 0. 2645)，峰 3 (0. 3052 0. 3099)，峰 4 (0. 4283 0. 4330)，峰 5 (0. 4701 0. 4892)，峰 S (1. 000)，峰 7(1. 4708 1. 4761)；共有指纹峰的相对保留面积为峰1 (0. 3773 0. 4132)，峰2 (1. 1776 1. 3647)，峰 S (1. 000)，峰 7 (1. 4046 1. 4274)。
全文摘要
本发明涉及厚朴精制饮片的质量控制方法；包括以厚朴酚、和厚朴酚对照品为对照，高效液相色谱法测定厚朴精制饮片的含量；以厚朴酚、和厚朴酚为参照物，以高效液相指纹图谱的共有峰相对保留时间相对保留峰面积为对照，采用高效液相指纹图谱法测定所含厚朴的道地性；不仅检测厚朴的存在与否和含量，并且还进一步检测厚朴的道地性；因为中医药的特殊性，原料道地与否直接影响到药物的功效和性能，这是本领域公认的。故本发明的质量控制方法可以保证厚朴精制饮片的质量更加稳定可靠。
文档编号G01N30/02GK102520112SQ20111042460
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月16日 优先权日2011年12月16日
发明者曾凡明 申请人:重庆天生药业有限公司