专利名称：一种胃蛋白酶原ii时间分辨荧光免疫检测试剂盒的制作方法
技术领域：
一种胃蛋白酶原M时间分辨荧光免疫检测试剂盒技术领域[0001]本实用新型涉及定量检测血清(血浆)中胃蛋白酶原II含量的时间分辨荧光免疫 分析(TRFIA)试剂盒，属于体外试剂诊断技术领域。
背景技术：
[0002]胃蛋白酶原II (简称PG II)来源于全胃腺和远端十二指肠Brunner氏腺，胃粘膜合 成的PGII约为总量的25%，PG II大部分进入消化道，少量进入血液循环，因此被称为“反映 胃部状态和功能的指针”。[0003]国内外临床研究指出，PG II与胃底粘膜病变的相关性较大，其升高与胃底腺管萎 缩、肠上皮化生或假幽门腺化生、异型增生有关。测定PG II含量有助检测出十二指肠溃疡、 萎缩性胃炎、胃炎、胃癌等其他消化道疾�。┝俅布觳夂吞寮焐覆樾枨�。在人群胃病筛查 中，每个人做胃镜是不现实的，可通过非侵入性血清PG检测将浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃 溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等高危人群筛查出来，再进行胃镜检查是一种切实可行的方案。[0004]采用时间分辨荧光测量技术，以稀土离子为示踪材料，组建的PGII的TRFIIA试剂 盒具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染等优点，是目 前PGII检测方法中最灵敏、测量范围最宽的方法之一，非常有利于大规模的普查筛选及患 者病程检测。实用新型内容[0005]本实用新型的目的是提供一种新型的PGII的时间分辨荧光免疫检测试剂盒，运 用稀土离子的荧光放大效应，，达到灵敏度高、特异性好、量程范围宽的目的。该试剂盒能够 实现快速、简便的检测。[0006]本实用新型的技术方案一种胃蛋白酶原II时间分辨荧光免疫检测试剂盒，该试 剂盒的盒体(7)内设有包被有PG II单克隆抗体的微孔板，即抗体反应板I块(1);PG II标 准品6瓶(2);Eu标抗PG II单克隆抗体(3)、缓冲液I瓶(4)、增强液I瓶(5)、浓缩洗板液I 瓶(6)；[0007]抗体反应板I块(I)放置于盒体(7)内的右前部，PG II标准品6瓶(2)放置于盒 体(7)内的右后部，为6只竖放的相邻放置的小瓶；盒体(7)内的左后部放置I只竖放的Eu 标抗PG II单克隆抗体(3)小瓶，盒体(7)内的左前部从前向后依次放置横向的缓冲液I瓶(4)、浓缩洗板液I瓶(6)、增强液I瓶(5)，此种放置方式使试剂盒体积紧凑，并使用方便；[0008]抗体反应板(I)为抗PG II单克隆抗体包被，可拆卸96孔板；Eu标抗PG II单克隆 抗体(3)为Eu标记的另一株与包被抗体成对的抗PG II单克隆抗体；PG II标准品(2)为不 同浓度的PG II抗原冻干品一套。[0009]另附操作说明书。每个试剂盒的试剂足够96次测定，检测时包被抗体与Eu标记 另一株抗体与样本中的抗原构成夹心复合物，加入增强液后，样品荧光计数与样品PGII含 量成正相关，根据标准曲线即获得相应PGII浓度，操作简便。[0010]本实用新型的有益效果一、灵敏度高，可达0.02ng/mL;二、量程宽，血清(浆)样本不需要稀释，样品浓度值介于0-50ng/mL的都能准确检测；三、检测时间短，2小时完成。
[0011]图1本实用新型的结构示意图。图中1、包被有PGII单克隆抗体的微孔板，即抗体反应板I块(96T) ;2、PGII标准品(0-50ng/mL，6瓶)；3、Eu标抗PGII单克隆抗体(另一株，与包被抗体成对)1X0. 5mL/瓶(用时I 50稀释)；4、缓冲液:一瓶，50mL ;5、增强液一瓶，30mL ;6、浓缩洗板液一瓶，40mL ;7、盒体。
具体实施方式
[0012]实施例1 :PGII TRFIA样品测定[0013](I)试剂的准备[0014]a、冻干品使用前将冻干品平衡至室温,用ImL蒸馏水溶解。[0015]b、将所需数量的抗体反应板条使用前平衡至室温。[0016]C、洗涤液将浓缩洗板液用蒸馏水1: 25倍稀释，作为工作洗涤液。[0017]d、Eu-标抗PGII单克隆抗体的稀释在应用前I小时内根据样品量以缓冲液1: 50倍稀释。[0018](2)试验步骤a、取抗体反应板，从第一孔开始，每孔依次加入50 μ L的参考标准品(共6个标准点，建议做复孔以保证标准曲线的可靠性)。在参考标准品后依次加入50 μ L样品(建议采用双孔测量)。[0020]C、加完参考标准品及样本之后，每孔再加入150 μ L缓冲液，25°C振荡孵育I小时， 工作洗涤液冲洗4次。[0021]d、每孔依次加入已用缓冲液1: 50倍稀释的Eu标抗PGII单克隆抗体200 μ L， 25°C振荡孵育I小时，工作洗涤液冲洗6次。[0022]e、每孔加增强液200 μ L, 25°C振荡孵育5分钟后测量。[0023]f、待测试运行结束后，退出样本，收回所用试剂于2l°C放置。所用抗体反应板条取出后弃去，请勿重复使用。[0024]结果处理根据已知PGII浓度的系列参考标准品的相应发光强度可得到标准曲线，通过双对数数学模型回归处理得到回归直线，未知样品的PGII浓度可以通过其相应发光强度从回归直线上反算出来(表I)。[0025]表I[0026]PGII标准点样品PGII 浓度(ng/ml)O51020305011.2荧光值(cps)135222532465859385813912023232249578[0027]本实用新型所述实施例是指导性的，非限定性的，只是帮助理解本实用新型，因此本实用新型并不限于具体实施方式
中所述的实施例，凡是由本领域技术人员根据本实用新型的技术方案得出的其他具体实施方式
，同样属于本实用新型保护的范围。
权利要求1. 一种胃蛋白酶原II时间分辨荧光免疫检测试剂盒，其特征在于试剂盒的盒体(7)内设有包被有PG II单克隆抗体的微孔板，即抗体反应板I块(I); PG II标准品6瓶(2);Eu标抗PG II单克隆抗体(3)、缓冲液I瓶(4)、增强液I瓶(5)、浓缩洗板液I瓶(6);抗体反应板I块(I)放置于盒体(7)内的右前部，PG II标准品6瓶(2)放置于盒体(7)内的右后部，为6只竖放的相邻放置的小瓶；盒体(7)内的左后部放置I只竖放的Eu标抗PG II单克隆抗体(3)小瓶，盒体(7)内的左前部从前向后依次放置横向的缓冲液I瓶(4)、浓缩洗板液I瓶(6)、增强液I瓶(5)，此种放置方式使试剂盒体积紧凑，并使用方便；抗体反应板(I)为抗PG II单克隆抗体包被，可拆卸96孔板；Eu标抗PG II单克隆抗体(3)为Eu标记的另一株与包被抗体成对的抗PG II单克隆抗体；PG II标准品(2)为不同浓度的PG II抗原冻干品一套。
专利摘要一种胃蛋白酶原II时间分辨荧光免疫检测试剂盒，属于体外试剂诊断技术领域。本实用新型基于双抗夹心方法，利用了抗原抗体特异性免疫反应，定量检测血清(浆)中PGII含量。试剂盒内组成包括抗PGII单克隆抗体包被板，PGII参考标准品，Eu标抗PGII单克隆抗体，缓冲液，增强液，浓缩洗板液。利用标记物的荧光和高效价的单克隆抗体，达到血清不需要稀释直接反应检测减轻工作量的目的；同时获得宽的测量范围，便于临床使用。本实用新型的积极意义在于试剂盒灵敏度高、特异性好、测量范围宽、操作简单，利于大规模推广应用，有广阔的市场前景。
文档编号G01N33/577GK202854147SQ201220219688
公开日2013年4月3日 申请日期2012年5月16日 优先权日2012年5月16日
发明者张珏, 黄飚, 周彬, 张艺, 王柯, 朱岚 申请人:江苏省原子医学研究所, 无锡市江原实业技贸总公司
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