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专利名称：一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法
技术领域：
本发明涉及一种原料乳中过氧化氢酶定性检测方法，属于生物工程检测的技术领域。
背景技术：
通过向牛乳中添加过氧化氢可以延长牛乳的保质期，常被不法商贩使用，但含有过氧化氢的牛乳无法通过牛乳的入厂检测，因此不法商贩通过向原料乳或奶粉中掺入过氧化氢酶后，可掩盖掺入的过氧化氢。同时，过氧化氢酶也是对人体不利的物质。目前还没有关于原料乳过氧化氢酶的检测方法，不能很好的控制奶的入厂。

发明内容
本发明的目的是提供一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法，降低测试成本， 简化操作过程，提高测试速度。本发明提供了一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法，包括如下步骤
1)取待测乳样加入过氧化氢溶液，混勻得到混合乳；
2)用现有过氧化氢含量的检测方法测定混合乳中过氧化氢含量；
3)取不低于三级水或复原乳加入与步骤1)中等量的过氧化氢溶液混勻得到对照样，使用步骤2)中的检测方法测定对照样中的过氧化氢含量；
4)按照如下方法判定待测乳中是否含有过氧化氢酶
4. 1)混合乳中检测出过氧化氢量大于等于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中不含有过氧化氢酶；
4. 2)混合乳中检测出过氧化氢量小于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中含有过
氧化氢酶；
4. 3)如果对照样中检测出过氧化氢，则检测中添加的过氧化氢有效，检测结果可信；如果对照样中未检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢无效，检测结果无效，需要更换过氧化氢溶液重新测定。在一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法的再一种示意性的实施方式中，过氧化氢溶液的配制方法如下准确吸取30%过氧化氢0. 35mL，用二级水定容至100mL。在一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法的另一种示意性的实施方式中，待测乳样中加入所述过氧化氢溶液的体积比为50 :1。在一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤 1)和步骤3)中所述混勻方式是漩涡混合30秒。在一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法的又一种示意性的实施方式中，过氧化氢溶液混勻后的混合乳在2分钟内检测。使用一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法，其现象明显、检测灵敏度高、成本低廉、操作方便。
具体实施例方式本领域技术人员可以理解，原料乳中通常情况下不会含有除过氧化氢酶以外的能与过氧化氢反应的物质。实施例1 1)试剂
过氧化氢溶液准确吸取优级纯30%过氧化氢0. 35mL,以二级水定容至100mL。Sigma过氧化氢酶。德国默克过氧化氢试纸条。2)分析步骤
取2. 5 mL待测乳样于试管中，加入50 μ L过氧化氢溶液，漩涡混合30S，得到混合乳，在两分钟内用过氧化氢试纸条检测混合乳中过氧化氢浓度，记录检测结果，同时用二级水代替待测乳样，加入50 μ L过氧化氢溶液，漩涡混合30S，得到对照样，在两分钟内用过氧化氢试纸条检测对照样中过氧化氢浓度，记录检测结果。3)结果判定
混合乳中检测出过氧化氢量大于等于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中不含有过氧化氢酶；
混合乳中检测出过氧化氢量小于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中含有过氧化氢酶。如果对照样中检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢有效，检测结果可信；如果对照样中未检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢无效，检测结果无效，需要重新测定。
实施例2 1)试剂
过氧化氢溶液准确吸取优级纯30%过氧化氢0. 35mL,以二级水定容至100mL。Sigma过氧化氢酶。德国默克过氧化氢试纸条。2)分析步骤
取5. 0 mL待测乳样品于试管中，加入50 μ L过氧化氢溶液，漩涡混合30S，得到混合乳， 在两分钟内用过氧化氢试纸条检测混合乳中过氧化氢浓度，记录检测结果，同时用复原乳代替待测乳样，加入50 μ L过氧化氢溶液，漩涡混合30S，得到对照样，在两分钟内用过氧化氢试纸条检测对照样中过氧化氢浓度，记录检测结果。复原乳为经过检验确定不含有过氧化氢或过氧化氢酶的液态乳品。3)结果判定
混合乳中检测出过氧化氢量大于等于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中不含有过氧化氢酶；
混合乳中检测出过氧化氢量小于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中含有过氧化氢酶。
如果对照样中检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢有效，检测结果可信；如果对照样中未检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢无效，检测结果无效，需要重新测定。实施例3
1)试剂
过氧化氢溶液准确吸取优级纯30%过氧化氢0. 5mL，以二级水定容至100mL。Sigma过氧化氢酶。德国默克过氧化氢试纸条。2)分析步骤
取5. O mL待测乳样品于试管中，加入50 μ L过氧化氢溶液，漩涡混合30S，得到混合乳， 在两分钟内用过氧化氢试纸条检测混合乳中过氧化氢浓度，记录检测结果，同时用三级水代替待测乳样，加入50 μ L过氧化氢溶液，漩涡混合30S，得到对照样，在两分钟内用过氧化氢试纸条检测对照样中过氧化氢浓度，记录检测结果。3)结果判定
待测乳中检测出过氧化氢，则所述待测乳中不含有过氧化氢酶或者不含有与过氧化氢反应物质；
待测乳中未检测出过氧化氢，则所述待测乳B中含有过氧化氢酶或者含有与过氧化氢反应物质。如果空白对照中检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢有效，检测结果可信； 如果空白对照中未检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢无效，检测结果无效，需要重新测定。本领域技术人员可以理解，一级水的纯度比二级水和三级水高，不会还有任何与过氧化氢反应的物质，使用一级水制备对照样的实施方式与二级水和三级水相近，在此不再赘述。除了使用试纸条测试外，还可以使用酶联免疫法、液相质谱法等测试方法。本发明的方法具有快速、简便、准确的优点，可以在短时间内检测大量样品，便于企业规模化应用。在本文中，“示意性”表示“充当实例、例子或说明”，不应将在本文中被描述为“示意性”的任何图示、实施方式解释为一种更优选的或更具优点的技术方案。应当理解，虽然本说明书是按照各个实施例描述的，但并非每个实施例仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明， 它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法，包括如下步骤1)取待测乳样加入过氧化氢溶液，混勻得到混合乳；2)用现有过氧化氢含量的检测方法测定所述混合乳中过氧化氢含量；3)取不低于三级水或复原乳加入与步骤1)中等量的所述过氧化氢溶液混勻得到对照样，使用步骤2)中的所述检测方法测定所述对照样中的过氧化氢含量；4)按照如下方法判定所述待测乳中过氧化氢酶是否4. 1)所述混合乳中检测出过氧化氢量大于等于所述对照样检测出的过氧化氢量，则所述待测乳中不含有过氧化氢酶；4. 2)所述混合乳中检测出过氧化氢量小于所述对照样检测出的过氧化氢量，则所述待测乳中含有过氧化氢酶；4. 3)如果所述对照样中检测出过氧化氢，则检测中添加的过氧化氢有效，检测结果可信；如果对照样中未检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢无效，检测结果无效，需要更换过氧化氢溶液重新测定。
2.如权利要求1所述的检测方法，其中所述过氧化氢溶液的配制方法如下准确吸取 30%过氧化氢0. 35mL，用二级水定容至100mL。
3.如权利要求1所述的检测方法，其中所述待测乳样中加入所述过氧化氢溶液的体积比为50 :1ο
4.如权利要求1所述的检测方法，其中所述步骤1)和步骤3)中所述混勻方式是漩涡混合30秒。
5.如权利要求1所述的检测方法，其中加入所述过氧化氢溶液混勻后的所述混合乳在 2分钟内检测。
全文摘要
一种原料乳中过氧化氢酶的定性检测方法包括1)取待测乳样加入过氧化氢溶液，混匀得到混合乳；2)用现有过氧化氢含量的检测方法测定混合乳中过氧化氢含量；3)取不低于三级水或复原乳加入与步骤1)中等量的过氧化氢溶液混匀得到对照样，使用步骤2)中的检测方法测定对照样中的过氧化氢含量；4.1)混合乳中检测出过氧化氢量大于等于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中不含有过氧化氢酶；4.2)混合乳中检测出过氧化氢量小于对照样检测出的过氧化氢量，则待测乳中含有过氧化氢酶；4.3)如果对照样中检测出过氧化氢，则检测中添加的过氧化氢有效，检测结果可信；如果对照样中未检测出过氧化氢，则试验中添加的过氧化氢无效。
文档编号G01N33/50GK102478570SQ201010558719
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月25日 优先权日2010年11月25日
发明者李梅, 王丹慧, 胡彩霞 申请人:内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司