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专利名称：早孕检测试纸条及其检测方法
技术领域：
本发明属于医学检验领域，特别是涉及一种早孕检测试纸条及其检测方法。
背景技术：
多数妇女怀孕6 8周以后可能出现头晕、乏力、嗜睡、唾液分泌增多、食欲不振、恶心呕吐等现象，呕吐多在清晨或空腹时发生。有些孕妇特别喜好吃酸性和生冷食物。上述这些现象称为早孕反应，多在怀孕后12周左右自行消失。少数人的早孕反应比较严重，持续时间也较长。目前市面上大多数早孕检测试纸是采用胶体金方法进行检测的，但均只能告知被检者有或没有怀孕，不能知道大概的怀孕时间。而对于一些意外怀孕的女性在6 8周之 前是没有明显的早孕反应，此时需要一种经济简单的方法知道怀孕多久，以备对自己后期身体健康等起到提示作用。

发明内容
基于此，本发明提供了一种能得知大概怀孕时间的早孕检测试纸条。一种早孕检测试纸条，所述试纸条由样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述标记垫上涂覆有胶体金标记的鼠抗β -HCG单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜包括包被有鼠抗a-HCG单克隆抗体的检测区和包被有抗鼠IgG多克隆抗体的控制区，在所述检测区和控制区之间设置有包被有毒品抗原的对比区，所述标记垫上还涂覆有胶体金标记的所述毒品的抗体。本发明在现有的早孕检测试纸条的基础上，在检测区和控制区之间设置包被有毒品抗原的对比区，并在标记垫上涂覆了胶体金标记的所述毒品的抗体。利用双抗夹心法检测人体尿液中的HCG抗原，如怀孕了，则尿液中含有人体HCG激素，该抗原将与鼠抗β -HCG单克隆抗体及鼠抗a -HCG单克隆抗体结合，并在检测区显色。尿液中含有的人体HCG越多，检测区显色越深。采用竞争抑制法，当尿液标本中没有毒品时，标记的毒品抗体和对比区的毒品抗原结合反应，在对比区显色，而对比区颜色是通过内控控制的(由毒品抗原和毒品抗体的浓度和量所确定)，是固定不变，表示人怀孕6周的显色程度。比较对比区与检测区的颜色深浅，从而实现预测怀孕时间的目的。在其中一些实施例中，所述对比区包被的毒品抗原为DOA抗原。DOA抗原是指滥用药品抗原，范围较广，一般是由滥用药物小分子添加上一个大分子的蛋白构成。一般说的DOA抗原包括了如THC抗原、MET抗原、氯胺酮抗原等滥用药品类别的抗原。在其中一些实施例中，所述对比区包被的毒品抗原为THC抗原、MET抗原或氯胺酮抗原，所述抗原的包被浓度为O. 1-0. 5mg/mlo在其中一个实施例中，所述抗原的包被浓度为O. lmg/ml。在其中一些实施例中，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的毒品的抗体的浓度为
O.5 2ug/ml,涂覆量为 10cm*12cm/ml。
在其中一个实施例中，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的毒品的抗体的浓度为lug/ml,涂覆量为 10cm*12cm/ml。在其中一些实施例中，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的鼠抗β-HCG单克隆抗体的浓度为I. ο-l. 5mg/ml，涂覆量为O. 15-0. 2 μ Ι/cm。所述检测区包被的鼠抗a -HCG单克隆抗体的浓度为I. 0-1. 5mg/ml，包被参数为O. 15-0. 2 μ Ι/cm ;所述控制区包被的抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为I. 0-1. 5mg/ml，包被参数为O. 15-0. 2 μ 1/cm。在其中一个实施例中，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的鼠抗β-HCG单克隆抗体的浓度为I. 2mg/ml，涂覆量为O. 17 μ Ι/cm。所述检测区包被的鼠抗a -HCG单克隆抗体的浓度为I. 2mg/ml，包被参数为O. 17 μ Ι/cm ;所述控制区包被的抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为I. 3mg/ml,包被参数为O. 18 μ 1/cm。在其中一些实施例中，所述检测区与控制区之间的间隔为7. 0mm。
在其中一些实施例中，所述检测区与对比区之间的间隔为3. 5mm。本发明还提供了一种早孕检测方法，采用上述试纸条，包括以下步骤将尿液滴加到样品垫上，尿液依次流经标记垫、检测区、对比区、控制区而显色。若检测区、对比区、控制区显色，则表明已怀孕，比较检测区和对比区的颜色，若检测区颜色比对比区颜色深，则怀孕6周以上；若检测区颜色比对比区颜色浅，则怀孕6周以下。若检测区不显色，控制区、对比区显色，则表明未怀孕；若控制区不显色，则表明测试失败。本发明在现有的早孕检测试纸条的基础上，在检测区和控制区之间设置包被有毒品抗原的对比区，并在标记垫上涂覆了胶体金标记的所述毒品的抗体。利用双抗夹心法检测人体尿液中的HCG抗原，从而在检测区显色，采用竞争抑制法检测尿液标本，当标记的毒品抗体和对比区的毒品抗原结合反应时，在对比区显色，而对比区颜色是通过内控控制的，是固定不变，表示人怀孕6周的显色程度。比较对比区与检测区的颜色深浅，颜色较之深，则怀孕6周以上，较之浅则怀孕不足6周，从而实现预测怀孕时间的目的。同时，本发明试纸条在检测怀孕与否以及怀孕周期的同时，可以检测是否有滥用药物，进而可以提示是否适合妊娠，达到避免畸形胎儿的目的。本发明检测方法简单，适于广泛推广。


图I为本发明实施例I的试纸条的结构示意图；附图标记1、样品垫；2、标记垫；3、底板；4、硝酸纤维素膜；5、检测区；6、对比区；
7、控制区；8、吸水纸。
具体实施例方式以下结合附图和具体实施例来详细说明本发明。实施例I 一种早孕检测试纸条如图I所示，为本发明的一种早孕检测试纸条的结构示意图，所述试纸条由样品垫I、标记垫2、硝酸纤维素膜4、吸水纸8顺次搭接粘贴在底板3上构成，所述标记垫2上涂覆有胶体金标记的鼠抗β-HCG单克隆抗体,所述硝酸纤维素膜4包括包被有鼠抗a-HCG单克隆抗体的检测区5和包被有抗鼠IgG多克隆抗体的控制区7，在所述检测区5和控制区7之间还设置有包被有毒品抗原的对比区6，所述标记垫2上还涂覆有胶体金标记的所述毒品的抗体。在该实施例中，所述毒品为THC(大麻)。对比区包被的毒品抗原为THC抗原，抗原的包被浓度为O. lmg/ml，包被参数为O. 15ul/cm。所述标记垫上涂覆的胶体金标记的THC的抗体的浓度为lug/ml，Iml涂布面积为10cm*12cm ;所述标记垫上涂覆的胶体金标记的鼠抗β-HCG单克隆抗体的浓度为I. 2mg/ml，涂覆量为O. 17 μ Ι/cm。所述检测区包被的鼠抗a -HCG单克隆抗体的浓度为I. 2mg/ml,包被参数为O. 17 μ Ι/cm ;所述控制区包被的抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为I. 3mg/ml，包被参数为 O. 18 μ 1/cm。在该实施例中，所述检测区与控制区之间的间隔为7. 0mm。所述检测区与对比区之间的间隔为3. 5mm。该实施例中的试纸条的制备方法如下I、硝酸纤维素膜的制备用包被缓冲液(O. 05M pH9. 6碳酸盐缓冲液，置4°C备用，下同)稀释鼠抗a -HCG单克隆抗体(检测区T线的包被材料)(厂商=ARISTA)，稀释后鼠抗a -HCG单克隆抗体浓度为lmg/ml ;用包被缓冲液稀释THC抗原(对比区的包被材料)(厂商ARISTA)，稀释后的浓度为O. lmg/ml ;用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体(控制区C线的包被材料)(厂商=ARISTA)，稀释后抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为lmg/ml。控制检测线和控制线两线间隔3. 5mm，调试喷膜机，按喷液量(包被参数)为O. 15 μ Ι/cm进行喷膜包被，包被好后，室温晾干二十分钟后转移至50°C烘箱干燥过夜。2、标记垫的制备按常规的标记方法将鼠抗β -HCG单克隆抗体(厂商ARISTA)标记到胶体金上形成金标结合物，均匀地涂覆在无纺布上，胶体金标记的鼠抗β -HCG单克隆抗体的浓度为
I.Omg/ml,涂覆量为O. 15μ 1/cm。37°C干燥房干燥过夜,封袋,置室温密封保存备用。按常规的标记方法将THC抗体标记到胶体金上形成金标结合物,均匀地涂覆在无纺布上,胶体金标记的THC抗体的浓度为I. Oug/ml, Iml涂布面积为10cm*12cm。3、样品垫的制备用样品垫处理液(O.5%卵清蛋白，O. 01% Tween-20，0. 01MPH7. 0PBS，0. 02%叠氮化钠(防腐剂)，置4°C备用)涂布玻璃纤维，涂布参数为lcm2/ml，37°C干燥房干燥过夜，封袋，置室温密封保存备用。4、试纸条的制备把硝酸纤维素膜、吸水纸、标记垫、样品垫粘贴在塑料底板上，组成大板。用切条机将大板切成单条，宽度为4mm。实施例2 —种早孕检测试纸条该实施例的试纸条的结构与实施例I的试纸条结构相同，除了毒品为MET(冰毒)。对比区包被的毒品抗原为MET抗原,抗原的包被浓度为O. 25mg/ml。标记垫上涂覆的胶体金标记的鼠抗β-HCG单克隆抗体的浓度、检测区包被的鼠抗a-HCG单克隆抗体的浓度、控制区包被的抗鼠IgG多克隆抗体的浓度均为I. Omg/ml，涂覆量均为O. 15 μ 1/cm。实施例3 —种早孕检测试纸条该实施例的试纸条的结构与实施例I的试纸条结构相同，除了毒品为氯胺酮。对比区包被的毒品抗原为氯胺酮抗原，抗原的包被浓度为O.5mg/ml。标记垫上涂覆的胶体金标记的鼠抗β-HCG单克隆抗体的浓度、检测区包被的鼠抗a-HCG单克隆抗体的浓度、控制区包被的抗鼠IgG多克隆抗体的浓度均为1.5mg/ml，涂覆量均为O.2μ 1/cm。实施例4利用实施例I的试纸条进行早孕检测包括以下步骤①将尿液滴加到样品垫上，尿液依次流经标记垫、检测区、对比区、控制区而显色。②若检测区、对比区、控制区显色，则表明已怀孕，此时比较检测区和对比区的颜色，若检测区颜色比对比区颜色深，则怀孕6周以上；若检测区颜色比对比区颜色浅，则怀孕6周以下。③若检测区不显色，控制区、对比区显色，则表明未怀孕。④若控制区不显色，则表明测试失败。实施例5实施例I的试纸条的灵敏度、特异性对实施例I的试纸条进行了灵敏度和特异性方面试验，试验结果见表I和表2所
/Jn ο表I实施例I的试纸条的灵敏度试验
权利要求
1.一种早孕检测试纸条，所述试纸条由样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，其特征在于，所述标记垫上涂覆有胶体金标记的鼠抗β -HCG单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜包括包被有鼠抗a -HCG单克隆抗体的检测区和包被有抗鼠IgG多克隆抗体的控制区，在所述检测区和控制区之间设置有包被有毒品抗原的对比区，所述标记垫上还涂覆有胶体金标记的所述毒品的抗体。
2.根据权利要求I所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述对比区包被的毒品抗原为DOA抗原,所述抗原的包被浓度为O. 1-0. 5mg/mL·
3.根据权利要求2所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述DOA抗原为THC抗原、MET抗原或氯胺酮抗原，所述抗原的包被浓度为O. lmg/ml。
4.根据权利要求I所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的毒品的抗体的浓度为O. 5 2ug/ml,涂覆量为10cm*12cm/ml。
5.根据权利要求4所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的毒品的抗体的浓度为lug/ml,涂覆量为10cm*12cm/ml。
6.根据权利要求I所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的鼠抗β -HCG单克隆抗体的浓度为I. 0-1. 5mg/ml，涂覆量为O. 15-0. 2 μ Ι/cm ;所述检测区包被的鼠抗a -HCG单克隆抗体的浓度为I. 0-1. 5mg/ml，包被参数为O. 15-0. 2 μ 1/cm ；所述控制区包被的抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为I. 0-1. 5mg/ml，包被参数为O. 15-0. 2 μ I/cm。
7.根据权利要求6所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述标记垫上涂覆的胶体金标记的鼠抗β -HCG单克隆抗体的浓度为I. 2mg/ml，涂覆量为O. 17 μ 1/cm ;所述检测区包被的鼠抗a -HCG单克隆抗体的浓度为I. 2mg/ml，包被参数为O. 17 μ Ι/cm ;所述控制区包被的抗鼠IgG多克隆抗体的浓度为I. 3mg/ml，包被参数为O. 18 μ 1/cm。
8.根据权利要求1-7任一项所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述检测区与控制区之间的间隔为7. 0mm。
9.根据权利要求1-7任一项所述的早孕检测试纸条，其特征在于，所述检测区与对比区之间的间隔为3. 5mm。
10.一种早孕检测方法，其特征在于，采用权利要求1-9任一项所述的试纸条，包括以下步骤将尿液滴加到样品垫上4-5min后，比较检测区和对比区的颜色，若检测区颜色比对比区颜色深，则怀孕6周以上；若检测区颜色比对比区颜色浅，则怀孕6周以下。
全文摘要
本发明公开了一种早孕检测试纸条及其检测方法，所述试纸条由样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸顺次搭接粘贴在底板上构成，所述标记垫上涂覆有胶体金标记的鼠抗β-HCG单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜包括包被有鼠抗α-HCG单克隆抗体的检测区和包被有抗鼠IgG多克隆抗体的控制区，在所述检测区和控制区之间设置有包被有毒品抗原的对比区，所述标记垫上还涂覆有胶体金标记的所述毒品的抗体。本发明在现有的早孕检测试纸条的基础上，通过在检测区和控制区之间设置对比区，从而根据对比区与检测区的颜色深浅比较，来实现预测怀孕时间的目的。检测方法简单，适于广泛推广。
文档编号G01N33/577GK102879576SQ201210408690
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月23日 优先权日2012年10月23日
发明者王继华, 张亮, 唐时幸, 郭诗静 申请人:广州万孚生物技术股份有限公司