专利名称：一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法
技术领域：
本发明涉及一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法。
背景技术：
刺梨为蔷薇科植物缫丝花Rosae roxburghii Tratt. f. normal is Rehd. et ffils. 及单瓣缫丝花Rosae roxburghii Tratt.的果实。9_10月采收，鲜用或晒干。刺梨含有丰富的活性物质，其药理作用广泛。早在很久以前民间就将其果实及根入药，用于消食健脾、 收敛止泻与解暑，随着社会的不断进步，医疗、保健意识逐渐深入人心。而刺梨丰富的营养活性成分、良好的医疗保健作用及其独特的高原、无污染的生存环境等得天独厚的优势，使人们对刺梨倍加宠爱。刺梨作为贵州省少数民族用药，收载于2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中，该标准中，关于刺梨的质量检测项仅有性状及简单的显色反应，缺少特异性的定性、 定量指标，质量检测不够完善，可控性差，难以控制刺梨质量的优劣，严重影响刺梨的合理开发和应用及临床用药的安全有效，因此刺梨质量检测的完善和提高亟待解决。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种刺梨的多指标检测方法；本发明所要解决的另一个技术问题在于提供一种刺梨的炮制方法；刺梨具有很高的营养价值和医疗价值，本发明通过制定能反应其性能特征的质量检测指标，确保其安全性、有效性和稳定性。所述刺梨的多指标检测方法包括理化鉴别、对没食子酸的薄层鉴别，对水分、总灰分及砷和汞的检查，对醇浸出物的测定，对维生素C、总黄酮、总多酚和氨基酸的含量测定方法。所述对没食子酸的薄层鉴别方法为取刺梨粉末，加无水乙醇80-120HZ超声提取1-3次，过滤，滤液蒸干，加水溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取1-3次，合并萃取液，水浴加热蒸干，用甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯 丁酮甲酸水=5-15 0. 5-2 0. 5-2 0. 5_2为展开剂，展开，取出，晾干，喷2 %的 Fecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。具体地说，所述对没食子酸的薄层鉴别方法为精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃�。�2次，合并萃取液，80°C水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液； 再取没食子酸对照品加甲醇，制成ImL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5 μ L，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水= 10 1 1 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷2%的i^ec13-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
所述对维生素C的含量测定方法为照中国药典高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验迪马C18钻石柱4. 6mmX 250mm, 5 μ m ；柱温30°C，以 0. lmol/L磷酸二氢钾甲醇=80-99 20-1为流动相，流速1. OmL/min，检测波长245nm ；对照品溶液的制备称取维生素C对照品，精密称定，加0. 5-5%的偏磷酸，超声使溶解，加水定容，制成每ImL含0. 02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备精密称取刺梨粉末0. 4g，加0. 5-3%偏磷酸50mL，称重，超声提取，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液ImL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法取对照品溶液、供试品溶液，分别进样，测定，即得。具体地说，所述对维生素C的含量测定方法为照中国药典高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验迪马C18钻石柱4. 6mmX250mm,5y m ；柱温30°C，以 0. lmol/L磷酸二氢钾甲醇=97 3为流动相，流速1. OmL/min，检测波长:245nm ；对照品溶液的制备精密称取维生素C对照品12. 5mg,加1 %的偏磷酸5mL，超声 30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇勻，制成每ImL含0. 02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备精密称取刺梨粉末0. 4g，加1 %偏磷酸50mL，称重，超声提取 15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液ImL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10 μ L，测定，即得。所述对总黄酮的含量测定方法为采用三氯化铝比色法测定；对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品，加乙醇溶解，摇勻，制成每ImL含0. 5mg 的溶液，即得；标准曲线的制备精密吸取芦丁对照品溶液0、0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5mL分别置IOmL容量瓶中，各加0. 05-5mol/L的三氯化铝溶液l_5mL，0. 1-lmol/L的NaAC缓冲溶液0. 5-5mL, NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 4_7，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置 10-60min,以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50_85 %乙醇 10-50mL，50-90°C超声提取0. 5_3h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇勻；精密吸取供试品溶液2mL，加0. 05-5mol/L的三氯化铝溶液l_5mL，0. 1-lmol/L的NaAC缓冲溶液0. 5_5mL， NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 4_7，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置10-60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。具体地说，所述对总黄酮的含量测定方法为采用三氯化铝比色法测定；对照品溶液的制备称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇勻，制成每ImL含0. 5mg的溶液，即得；标准曲线的制备精密吸取芦丁对照品溶液0、0. 1,0. 2,0. 3,0.4,0. 5mL分别置 IOmL容量瓶中，各加0. lmol/L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC 缓冲溶液先用HAC调pH = 5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横
9坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65%乙醇20mL，70°C 超声提取lh，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇勻；精密吸取供试品溶液2mL，加0. Imol/ L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。所述对总多酚的含量测定方法为采用Folin-Denis法测定；对照品溶液的制备称取没食子酸对照品，精密称定，加50-80%乙醇溶解制成每 ImL中含没食子酸M μ g，即得；标准曲线的制备精密吸取Mug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、 7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂l-5mL，2_10% N￡i2C032-10mL，水定容至刻度，70°C水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0.2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50-80%乙醇15mL， 100HZ超声提取10-60min，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇勻；精密量取取供试品溶液0. 2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂l-5mL，2_10% Na2C032_10mL，水定容至刻度，70°C水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在 758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。具体地说，所述对总多酚的含量测定方法为采用Folin-Denis法测定；对照品溶液的制备称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加 60%乙醇溶解定容至刻度摇勻；精密量取lmL，置50mL容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度摇勻，即可；标准曲线的制备精密吸取Mug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、 7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL，水定容至刻度，70°C水浴加热 40min,以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60 %乙醇15mL， 100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇勻；精密量取取供试品溶液0. 2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL水定容至刻度，70°C水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。所述对氨基酸的含量测定方法为采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；色谱条件Venusil-AA氨基酸分析柱4.6X250mm，5ym，流速l.OmL，检测波长 2Mnm，柱温40°C，流动相80%乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液，PH = 6. 5，梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80%乙腈；对照品溶液的制备准确量取氨基酸混合标准溶液200 μ L，置离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10-30 μ L，三乙胺乙腈溶液50-200 μ L，异硫氰酸苯酯乙腈溶液 50-200 μ L混勻，室温放置0. 5-3小时，然后加入正己烷200-500 μ L，振摇后放置5_30分钟，取下层溶液，0. 45 μ m针式微孔滤膜滤器过滤，即得；样品溶液的制备精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入2-lOmol/L盐酸 2-10mL,封口，置80-150°C恒温干燥箱中消化水解10-50小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取2-10mL水超声溶解，过滤，取续滤液100-300yL置ImL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10-50 μ L，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各50-200 μ L，混勻，室温放置 0. 5-3小时，然后加正己烷200-500 μ L，振摇后放置5_30分钟，取下层溶液用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。具体地说，所述对氨基酸的含量测定方法为采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；色谱条件=Venusil-AA氨基酸分析柱6 X 250mm，5 μ m)，流速l.OmL，检测波长 254nm,柱温40°C，流动相80 %乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液(PH = 6. 5)梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80%乙腈；对照品溶液的制备准确量取氨基酸混合标准溶液200 μ L，置ImL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20 μ L，三乙胺乙腈溶液100 μ L，异硫氰酸苯酯乙腈溶液ΙΟΟμ L混勻，室温放置1小时，然后加入正己烷400 μ L，振摇后放置10分钟，取下层溶液，0. 45 μ m针式微孔滤膜滤器过滤，即得；样品溶液的制备精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入6mol/L盐酸4mL，封口，置110°c恒温干燥箱中消化水解22小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取5mL水超声溶解，过滤，取续滤液200 μ L置ImL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20 μ L，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各ΙΟΟμ L，混勻，室温放置1小时，然后加正己烷400 μ L，振摇后放置10分钟，取下层溶液用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。所述氨基酸为天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸，苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸。具体地说，所述刺梨的多指标检测方法为性状本品呈扁球形，直径34cm，表面黄绿色或黄褐色，少数带红晕，被有密刺， 有的具褐色斑点，顶端有宿鄂5瓣，黄褐色，密生细刺；纵剖面观，果肉黄白色，脆；种子多数，着生于鄂筒基部凸起的花托上，卵圆形，浅黄色，骨质，直径0. 15-0. 3cm,气微香，味酸甜，微涩；鲜果汁呈深棕色，味微甜，涩；鉴别(1)取刺梨鲜果汁anl，加碱性酒石酸铜试液，置水浴上加热数分钟后，产生红色沉淀；(2)取刺梨新鲜果汁点于滤纸上，滴加茚三酮试液，100°C烘烤约3-5分钟，产生蓝色；(3)精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤， 滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃�。�2次，合并萃取液，80°C水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成ImL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5 μ L，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水=10 :1:1: 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷
112%的!^cl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点；检查水分照中国药典水分检测法检测，不得过14.0% ；总灰分照中国药典总灰分检测法检测，不得过6. 0% ；砷的测定采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，取样品1. Og精密称定， 于250mL的锥形瓶中，加入硝酸16mL、高氯酸4mL，摇动使样品充分接触酸液，静置过夜；次日置于可调温电热板上，先低温档(低于100V)加热，随着温度的升高，有大量的红棕色气体逸出，当红棕色气体的量减少时可以提高温度继续消化至大量冒白烟，以赶尽HNO3(若消化不完全可以补加硝酸，遵循少量多次的原则，直至消化完全；)当消解液完全蒸干时，取下冷却至室温；小心加入2. 5mL浓盐酸，用超纯水转移至50mL容量瓶中，再加入5mL10%的硫脲，超纯水定容至50mL，摇勻，45°C加热30min并冷却至室温后上机测定；汞的测定采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，准确称取样品0. 3g于聚四氟乙烯塑料内罐中，加入4mL浓硝酸和2mL30%的过氧化氢，置于100°C水浴锅中煮沸 1小时，赶尽NO2 ；取出冷却至室温，加盖并旋紧密封，然后将高压消解罐放在恒温干燥箱内， 升温至140°C后保持恒温池，保证消解完全，将高压消解罐拿出自然冷却到室温，小心打开高压消解罐，将聚四氟乙烯塑料内罐中的消解液用4%的盐酸溶液转移到50mL容量瓶，并用盐酸溶液定容，摇勻，室温下放置30min后上机测定；浸出物醇溶性浸出物照中国药典醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用 70%的乙醇作溶剂，不得少于40. 04% ；含量测定维生素C照中国药典高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验迪马C18钻石柱4. 6mmX 250mm, 5 μ m ；柱温30°C，以 0. lmol/L磷酸二氢钾甲醇=97 3为流动相，流速1. OmL/min，检测波长:245nm ；对照品溶液的制备精密称取维生素C对照品12. 5mg,加1 %的偏磷酸5mL，超声 30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇勻，制成每ImL含0. 02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备精密称取刺梨粉末0. 4g，加1 %偏磷酸50mL，称重，超声提取 15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液ImL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10 μ L，测定，即得；总黄酮采用三氯化铝比色法测定；对照品溶液的制备称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇勻，制成每ImL含0. 5mg的溶液，即得；标准曲线的制备精密吸取芦丁对照品溶液0、0. 1,0. 2,0. 3,0.4,0. 5mL分别置 IOmL容量瓶中，各加0. lmol/L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC 缓冲溶液先用HAC调pH = 5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65%乙醇20mL，70°C 超声提取lh，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇勻；精密吸取供试品溶液2mL，加0. Imol/ L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH =5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量(μ g)， 计算，即得；总多酚采用Folin-Denis法测定；对照品溶液的制备称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加 60%乙醇溶解定容至刻度摇勻；精密量取lmL，置50mL容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度摇勻，即可；(每ImL中含没食子酸Myg)；标准曲线的制备精密吸取Mug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、 7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL，水定容至刻度，70°C水浴加热 40min,以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60 %乙醇15mL， 100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇勻；精密量取取供试品溶液0. 2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL水定容至刻度，70°C水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量(μ g)，计算，即得。所述刺梨的炮制方法为先在沸水上蒸Ι-lOmin，取出，间歇式微波干燥 20-60min，干燥时真空度为0. 075MPa，功率800_3000w，即得。刺梨为贵州省民族药材，含有丰富的营养物质，具有多重药理活性，全身是宝，是 “十二五计划”贵州省重点开发项目。但是目前刺梨的检测方法比较简单，只有性状和理化鉴别，难以控制刺梨的真伪和优劣。为此本发明对刺梨的检测方法进行了研究，增加了薄层鉴别项、检查项(水分、总灰分及砷和汞的检查)，浸出物测定、含量测定项等检测指标。薄层鉴别项中增加了对没食子酸的鉴别方法，通过实验筛�。≡褚砸掖嘉崛∪芗粒砸宜嵋阴ポ腿×酱蔚姆椒ㄖ票腹┦云啡芤海灰悦皇匙铀嵛哉眨埘０繁∧の靥澹宜嵋阴ザ⊥姿崴�(10 1 1 1)为展开剂，鉴别刺梨中的没食子酸。检查项中采用药典附录中水分、总灰分、浸出物的测定方法测定刺梨的水分、灰分、浸出物；采用原子荧光法测定刺梨砷和汞的量。刺梨中含有大量的维生素C，刺梨被誉为水果中的“维生素C大王”，维生素C是刺梨中一个非常重要的活性成分，具有抗氧化、延缓衰老等作用。为了保证刺梨的质量，本发明选取维生素C作为刺梨定量指标之一，本发明采用高效液相色谱法测定维生素C的含量。对色谱条件、提取方法、提取溶剂稳定性等进行了系统研究，通过平行性实验、正交试验选取偏磷酸为提取溶剂，超声法为提取方法，采用高效液相色谱法测定，建立了刺梨维生素 C的含量测定方法。此方法避免维生素C受热易降解的影响，稳定性好，节省能源，效率高， 具有较好可行性。总黄酮具有非常广泛的药理活性，备受研究者的青睐，目前，总黄酮的含量测定已成为中药材质量检测建立的一个重要指标。刺梨含多种黄酮类物质，总黄酮含量较高，刺梨总黄酮的含量测定目前多采用紫外分光光度法。本发明采用三氯化铝比色法测定总黄酮的含量，进行了详细，系统的研究。首先对提取方法、提取溶剂、提取温度等进行试验；然后通过排除没食子酸的干扰，调节最适PH值选取最大吸收波长为406nm，建立了刺梨总黄酮的含量测定方法。植物单宁又称植物多酚，主要存在于植物的皮、根、叶、果实中。刺梨味甘而酸涩， 其涩味主要为多酚类物质。多酚作为一大类化学物质，据有较强的药理活性，所以本研究将刺梨多酚含量测定做为刺梨质量检测建立的一个指标。本发明以没食子酸为对照，采用 Folin-Denis法测定刺梨多酚的含量。对显色温度、显色时间、提取溶剂进行考察，建立刺梨多酚含量测定方法，方法简便、快速、重复性好、可用于刺梨多酚的含量测定。刺梨含有氨基酸，包括除色氨酸外其他人体不能自行合成的必需氨基酸，但对刺梨氨基酸含量测方法未见系统报道，本发明采用柱前衍生化法测定刺梨中16种氨基酸的含量，并对其进行方法学考察，16种氨基酸分别为天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸，苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸。此外，由于刺梨鲜果同其它鲜果一样具有保存时间短，易腐烂、霉变的特点，并且在储存过程中重要的营养成分维生素C降低很快，大大降低了刺梨的质量，严重影响了刺梨的应用价值，鉴于上述原因，本发明通过对刺梨的炮制方法进行研究，在考虑尽量不影响其他活性物质的同时，采用蒸制后微波干燥的方法作为刺梨的炮制方法。本发明所述刺梨的炮制方法和检测方法是经过大量的筛选试验得到的最佳方案， 以下实验研究为本发明的优选过程实验例1 对没食子酸的鉴别方法优选实验1实验材料1. 1刺梨样品本实验所用刺梨样品均为干品。1.2试剂、试药无水乙醇(AR)国药集团化学试剂有限公司；乙酸乙酯(AR)国药集团化学试剂有限公司；甲醇(AR)天津富宇化学试剂厂；丁酮(AR)成都金山化学试剂有限公司；甲酸(AR)天津科密欧化学试剂有限公司；氯仿(AR)国药集团化学试剂有限公司；正丁醇 (AR)上海申博化工有限公司；超纯水实验室自制；聚酰胺薄膜青岛海洋生物化工有限公司；没食子酸对照(110831-20030 中国药品生物制品检定所。1. 3 仪器KQ-500DB型超声波清洗仪昆山市超声仪器有限公司；数码相机日本(Canon)； 200g手提式高速万能粉碎机温岭市林大机械有限公司；ACXULAB型万分之一电子天平深圳市朗普电子科技有限公司；DFD700-恒温水浴锅东风电工。2实验方法2. 1对照品溶液的制备取没食子酸对照品加甲醇，制成ImL含2mg的溶液。2. 2供试品溶液的制备精密称取刺梨样品2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取 30min,共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃�。�2次， 合并萃取液，80°C水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，用于鉴别没食子酸。2. 3薄层色谱条件聚酰胺薄膜为固定相，乙酸乙酯丁酮甲酸水 (10 1 1 1)为展开剂，喷2%的狗(13-乙醇试剂，聚酰胺薄膜板上显清晰的蓝紫色斑点。2. 4刺梨的薄层鉴别照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)吸取对照品溶液和供试品溶液5yL，点于聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水 (10 1 1 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷2%的狗(13-乙醇试剂显色，聚酰胺薄膜板上显清晰的蓝紫色斑点。所得薄层色谱图见
图1。2. 5样品测定采用2. 4刺梨的薄层鉴别方法测定3个刺梨样品，色谱图见图2。3 讨论3. 1提取溶剂的选择本实验通过对不同提取溶剂甲醇、乙醇、乙酸乙酯进行选择，结果以乙醇为提取溶剂，乙酸乙酯萃取两次效果最好。3. 2展开剂的选择本实验考察了氯仿-乙酸乙酯-甲酸-水(5 1 1 0.5)， 氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5 1 1 0. 7)，乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水 (2. 5 0. 1 0. 3 2. 3)，乙酸乙酯-甲醇-甲酸-正丁醇(5 2 1 3)氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5:3:3:1)等展开剂，结果以乙酸乙酯丁酮甲酸水 (10 1 1 1)为展开剂，鉴别效果最好。实验例2 刺梨维生素C含量测定方法研究1仪器、试药与样品1. 1仪器CBM_20A型高效液相色谱仪(日本岛津公司)、MartoriusCP22OT型十万分之一天平。1.2试剂甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为化学纯、偏磷酸，醋酸、盐酸、草酸等为分析纯；维生素C对照品(批号100425-200702，含量100.0%)，购于中国药品生物制品检定所。1. 3样品本研究所用刺梨样品，由本课题实验小组人员采集，炮制均经贵阳中医学院江维克教授鉴定。样品预处理将刺梨样品粉碎，过三号筛，密闭，置阴凉、干燥处保存，备用。2溶液的制备2. 1对照品溶液称取维生素C对照品约12. 5mg,精密称定，加1 %的偏磷酸5mL， 超声30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇勻，作为对照品溶液(浓度0. 02mg/mL)。2. 2供试品溶液精密称取刺梨粉末0.4g，加偏磷酸50mL，称重，超声提取 15min,放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液ImL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，供HPLC进样分析。3实验方法与结果3.1供试液提取条件选择首先通过对比试验研究对浸渍、回流、超声等提取方法结果进行比较，结果以超声提取方法效果最好，故在后续的研究中采用超声法。3. 1.1提取溶剂的选择3. 1. 1. 1平行试验比较选择了 7种不同的有机酸作为提取维C的溶剂进行试验， 以确定进一步优化的提取剂。方法称取同一批次样品7份，每份0. 4g置IOOml量瓶中分别加入表1所列提取溶剂50ml，按2. 2方法操作，并测定维C含量，记录结果如表1 表1提取溶剂的选择
15提取溶剂维C结果(％)提取溶剂维C结果(％)M偏磷酸8. 082%偏磷酸+ 草酸8. 128%醋酸7. 442%偏磷酸+8%醋酸7. 211%盐酸5. 73盐酸2ml+8%醋酸7. 55沙0草酸6. 57由表1可知，以2%偏磷酸+2%草酸为提取溶剂测得VC的结果最高，但与以2%偏磷酸为提取溶剂测得的结果相差不大，考虑到操作的简便性，故以偏磷酸作为提取溶剂进行进一步的正交优化。3. 1. 1. 2正交试验优化以偏磷酸为提取溶剂分别对其浓度、用量、提取时间和超声频率进行了四因素三水平的正交设计，建立LJ43)正交试验表，具体设计见表2。表2正交试验因素列表
因素偏磷酸浓度偏磷画I用量提取时间超声频率11%15mL15 min60 HZ水平22%30mL30 min80 HZ33%50mL45 min100 HZ测定方法取刺梨粉0. 2g，精密称定，置具塞平底烧瓶中按表1所在列和水平提�。杓普皇匝�。将提取液过滤，弃去初滤液，取续滤液2ml定容至25ml容量瓶中，微孔滤膜过滤，采用高效液相色谱法进样分析。结果见表3。表3试验方案及结果分析
所在列因素ABCD溶剂浓度溶剂用量提取时间超声频率实验结果试验11. 0%1515607. 3616试验21. 0%3030807. 8056试验31. 0%50451007. 4816试验42. 0%15301006.3173试验52. 0%3045607. 5317试验62. 0%5015807. 932试验73. 0%1545807. 4713试验83. 0%30151007. 4668试验93. 0%5030607. 7687Kl7. 557. 057. 5877. 554K27. 267. 6017. 2977. 736K37. 5697. 7277. 4957. 089极差 (R)0. 3090. 6770. 290. 647主次顺序B >D>A>C优水平A3B3ClD2 试验中R2 > R4 > Rl > R3，四因素的重要性依次为BDAC.通过分析表2得出最佳组合条件为3. 0%偏磷酸50mL，超声频率80HZ提取15min。但与以偏磷酸为提取溶剂测得的结果相近。由于偏磷酸环境污染较严重且价格较高，考虑到减小环境污染及降低成本等原因，采用偏磷酸为提取溶剂。所以确定以偏磷酸50mL、提取时间15min、超声频率80HZ为刺梨VC测定的提取方案。3. 2检测波长的确定精密称取维生素C对照品IOul进样，采用二极管阵列检测器扫描最大吸收波长，最大吸收波长为M5nm。3. 3系统适用性试验迪马C18钻石柱0.6_\250_，5“111)，柱温301，流动相0. lmol/LKH2P04-甲醇(97 3)，流速1. OmL/min,检测器=PDA检测器，色谱工作站 LC-Solution色谱工作站，检测波长245nm，维生素对照品溶液、样品溶液、空白溶液经 0. 45 μ m微孔滤膜过滤后分别进样10 μ L，色谱图见图3、图4、图5。由图可知样品与对照品在相同位置出峰，空白溶液对测定无干扰。3. 4方法学考察3. 4. 1线性关系考察精密吸取2. 1项下的对照品溶液4 μ 1，8 μ 1，10 μ 1，12 μ 1， 16 μ 1，20 μ 1，进样，以峰面积Y为纵坐标，进样量X ( μ g)为横坐标进行线性回归处理，得回归方程为:Y = 2871018. 417χ-18443. 1429，(R2 = 0. 9997)，结果表明 VC 在 79. 24 μ g/ml 396. 2 μ g/ml范围内线性关系良好。3. 4. 2精密度实验精密吸取对照品溶液10 μ 1连续进样6次，记录峰面积，计算 RSD值为0. 773%,试验结果表明，仪器精密度良好。3. 4. 3重复性实验取刺梨粉(过3号筛)0. 2g，共6份，按2. 2方法制备供试品溶液，分别进样，进样量10 μ 1，记录色谱图，按外标一点法计算含量，RSD值为2. 44%，表明此方法重复性较好。3. 4. 4稳定性实验取对照品溶液，分别在0、1、3、5、7、9小时进样10ul，测得峰面积，其RSD值为1.76%，结果表明供试品溶液在9h内稳定性较好。3. 4. 5回收率试验取刺梨粉9份，每份0. 2g，每3份为一组，精密称定，每组分别加入对照品的量为样品含有量的80^^100^^120%,按2. 2项下方法平行制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样10μ 1，记录色谱图并计算含量，平均回收率为94. 69%, RSD% 为2.8%，详见表4。表4回收率试验结果(n = 9)
权利要求
1.一种刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述检测方法包括理化鉴别、对没食子酸的薄层鉴别，对水分、总灰分及砷和汞的检查，对醇浸出物的测定，对维生素C、总黄酮、总多酚和氨基酸的含量测定方法。
2.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对没食子酸的薄层鉴别方法为取刺梨粉末，加无水乙醇80-120HZ超声提取1-3次，过滤，滤液蒸干，加水溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取1-3次，合并萃取液，水浴加热蒸干，用甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇溶解，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水= 5-15 0. 5-2 0. 5-2 0. 5-2为展开剂，展开，取出，晾干，喷2 %的!^ecl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
3.根据权利要求2所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对没食子酸的薄层鉴别方法为精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤， 滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃�。�2次，合并萃取液，80°C水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成ImL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5 μ L，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水=10 :1:1: 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷 2%的!^cl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点。
4.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对维生素C的含量测定方法为照中国药典高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验迪马Cw钻石柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι;柱温30°C，以 0. lmol/L磷酸二氢钾甲醇=80-99 20-1为流动相，流速1. OmL/min，检测波长245nm ；对照品溶液的制备称取维生素C对照品，精密称定，加0. 5-5%的偏磷酸，超声使溶解，加水定容，制成每ImL含0. 02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备精密称取刺梨粉末0. 4g，加0. 5-3%偏磷酸50mL，称重，超声提取， 放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液ImL至25mL容量瓶中，水定容至刻度，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法取对照品溶液、供试品溶液，分别进样，测定，即得。
5.根据权利要求4所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对维生素C的含量测定方法为照中国药典高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验迪马Cw钻石柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι;柱温30°C，以 0. lmol/L磷酸二氢钾甲醇=97 3为流动相，流速1. OmL/min，检测波长:245nm ；对照品溶液的制备精密称取维生素C对照品12. 5mg,加1 %的偏磷酸5mL，超声30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇勻，制成每ImL含0. 02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备精密称取刺梨粉末0. 4g，加偏磷酸50mL，称重，超声提取15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液ImL至25mL容量瓶中， 水定容至刻度，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10 μ L，测定，即得。
6.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对总黄酮的含量测定方法为采用三氯化铝比色法测定；对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品，加乙醇溶解，摇勻，制成每ImL含0. 5mg的溶液，即得；标准曲线的制备精密吸取芦丁对照品溶液0、0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5mL分别置IOmL容量瓶中，各加0. 05-5mol/L的三氯化铝溶液l_5mL，0. 1-lmol/L的NaAC缓冲溶液0. 5_5mL， NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 4_7，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置10-60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标， 浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50-85 %乙醇10_50mL， 50-90°C超声提取0. 5-3h，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇勻；精密吸取供试品溶液 2mL，加 0. 05-5mol/L 的三氯化铝溶液 l_5mL，0. 1-lmol/L 的 NaAC 缓冲溶液 0. 5_5mL，NaAC 缓冲溶液先用HAC调pH = 4-7，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置10-60min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。
7.根据权利要求6所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对总黄酮的含量测定方法为采用三氯化铝比色法测定；对照品溶液的制备称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇勻，制成每ImL含0. 5mg的溶液，即得；标准曲线的制备精密吸取芦丁对照品溶液0、0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5mL分别置IOmL容量瓶中，各加0. lmol/L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标， 绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65%乙醇20mL，70°C超声提取lh，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇勻；精密吸取供试品溶液2mL，加0. lmol/L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法， 在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。
8.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对总多酚的含量测定方法为采用Folin-Denis法测定；对照品溶液的制备称取没食子酸对照品，精密称定，加50-80%乙醇溶解制成每ImL 中含没食子酸M μ g，即得；标准曲线的制备精密吸取Mug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL 置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂l-5mL，2-10% N￡i2C032-10mL，水定容至刻度，70°C水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加50-80%乙醇15mL，100HZ 超声提取10-60min，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇勻；精密量取取供试品溶液0. 2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂l-5mL，2_10% N￡i2C032-10mL，水定容至刻度，70°C水浴加热20-100min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm 处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。
9.根据权利要求8所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对总多酚的含量测定方法为采用Folin-Denis法测定；对照品溶液的制备称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加60%乙醇溶解定容至刻度摇勻；精密量取lmL，置50mL容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度摇勻，即可；标准曲线的制备精密吸取Mug/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL 置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL，水定容至刻度，70°C水浴加热40min， 以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60%乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇勻；精密量取取供试品溶液0. 2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL水定容至刻度， 70°C水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。
10.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对氨基酸的含量测定方法为采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；色谱条件VenusiI-AA氨基酸分析柱4. 6 X 250mm，5 μ m，流速1. OmL，检测波长254nm， 柱温40°C，流动相80 %乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液，PH = 6. 5，梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc 缓冲液，B泵80%乙腈；对照品溶液的制备准确量取氨基酸混合标准溶液200yL，置离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液10-30 μ L，三乙胺乙腈溶液50-200 μ L，异硫氰酸苯酯乙腈溶液50-200 μ L 混勻，室温放置0. 5-3小时，然后加入正己烷200-500 μ L，振摇后放置5_30分钟，取下层溶液，0. 45 μ m针式微孔滤膜滤器过滤，即得；样品溶液的制备精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入2-lOmol/L盐酸2-10mL，封口，置80-150°C恒温干燥箱中消化水解10-50小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取2-10mL 水超声溶解，过滤，取续滤液100-300 μ L置ImL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液 10-50 μ L，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各50-200 μ L，混勻，室温放置0. 5-3小时， 然后加正己烷200-500 μ L，振摇后放置5-30分钟，取下层溶液用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。
11.根据权利要求10所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述对氨基酸的含量测定方法为采用反相高效液相色谱-柱前衍生化法测定；色谱条件=Venusil-AA氨基酸分析柱6 X 250mm, 5 μ m)，流速1. OmL,检测波长 254nm,柱温40°C，流动相80%乙腈-醋酸钠-HAc缓冲液(PH = 6. 5)梯度洗脱，A泵醋酸钠-HAc缓冲液，B泵80%乙腈；对照品溶液的制备准确量取氨基酸混合标准溶液200 μ L，置ImL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20 μ L，三乙胺乙腈溶液100 μ L，异硫氰酸苯酯乙腈溶液100 μ L混勻，室温放置1小时，然后加入正己烷400 μ L，振摇后放置10分钟，取下层溶液，0. 45 μ m针式微孔滤膜滤器过滤，即得；样品溶液的制备精密称取刺梨样品置水解管中，精密加入6mol/L盐酸^iL,封口，置 110°C恒温干燥箱中消化水解22小时，旋转蒸发仪蒸干溶剂，精密量取5mL水超声溶解，过滤，取续滤液200 μ L置ImL离心管中，精密加入正亮氨酸内标溶液20 μ L，三乙胺乙腈，异硫氰酸苯酯乙腈溶液各IOOyL,混勻，室温放置1小时，然后加正己烷400yL，振摇后放置10 分钟，取下层溶液用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法将氨基酸混合标准溶液与样品溶液分别上机测定，即得。
12.根据权利要求10或11所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述氨基酸为天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸，苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸。
13.根据权利要求1所述刺梨的多指标检测方法，其特征在于所述刺梨的检测方法为性状本品呈扁球形，直径34cm，表面黄绿色或黄褐色，少数带红晕，被有密刺，有的具褐色斑点，顶端有宿鄂5瓣，黄褐色，密生细刺；纵剖面观，果肉黄白色，脆；种子多数，着生于鄂筒基部凸起的花托上，卵圆形，浅黄色，骨质，直径0. 15-0. 3cm,气微香，味酸甜，微涩；鲜果汁呈深棕色，味微甜，涩；鉴别(1)取刺梨鲜果汁anl，加碱性酒石酸铜试液，置水浴上加热数分钟后，产生红色沉淀；(2)取刺梨新鲜果汁点于滤纸上，滴加茚三酮试液，100°C烘烤约3-5分钟，产生蓝色；(3)精密称取刺梨粉末2g，加30mL无水乙醇100HZ超声提取30min，共2次，过滤，滤液蒸干，加水20mL溶解，过滤，滤液用乙酸乙酯20mL萃�。�2次，合并萃取液，80°C水浴加热蒸干，2mL甲醇溶解，作为供试品溶液；再取没食子酸对照品加甲醇，制成ImL含2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述溶液5 μ L，点于同一聚酰胺薄膜板上，以乙酸乙酯丁酮甲酸水=10 :1:1: 1为展开剂，展开，取出，晾干，喷 2%的!^cl3-乙醇试剂显色，在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点；检查水分照中国药典水分检测法检测，不得过14. 0% ；总灰分照中国药典总灰分检测法检测，不得过6.0% ；砷的测定采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号蹄，取样品1. Og精密称定，于 250mL的锥形瓶中，加入硝酸16mL、高氯酸4mL，摇动使样品充分接触酸液，静置过夜；次日置于可调温电热板上，先低于100V加热，随着温度的升高，有大量的红棕色气体逸出，当红棕色气体的量减少时可以提高温度继续消化至大量冒白烟，以赶尽HNO3,直至消化完全；当消解液完全蒸干时，取下冷却至室温；小心加入2. 5mL浓盐酸，用超纯水转移至50mL容量瓶中，再加入5mL10%的硫脲，超纯水定容至50mL，摇勻，45°C加热30min并冷却至室温后上机测定；汞的测定采用原子荧光法测定，取刺梨，粉碎，过3号筛，准确称取样品0. 3g于聚四氟乙烯塑料内罐中，加入4mL浓硝酸和2mL30%的过氧化氢，置于100°C水浴锅中煮沸1小时， 赶尽NO2 ；取出冷却至室温，加盖并旋紧密封，然后将高压消解罐放在恒温干燥箱内，升温至 140°C后保持恒温3h，保证消解完全，将高压消解罐拿出自然冷却到室温，小心打开高压消解罐，将聚四氟乙烯塑料内罐中的消解液用4%的盐酸溶液转移到50mL容量瓶，并用盐酸溶液定容，摇勻，室温下放置30min后上机测定；浸出物醇溶性浸出物照中国药典醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用70% 的乙醇作溶剂，不得少于40. 04% ；含量测定维生素C照中国药典高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验迪马Cw钻石柱4. 6πιπιΧ250πιπι，5μπι;柱温30°C，以 0. lmol/L磷酸二氢钾甲醇=97 3为流动相，流速1. OmL/min，检测波长:245nm ；对照品溶液的制备精密称取维生素C对照品12. 5mg,加1 %的偏磷酸5mL，超声30秒溶解，加水定容至50ml容量瓶中，摇勻，制成每ImL含0. 02mg的溶液，即得；供试品溶液的制备精密称取刺梨粉末0. 4g，加偏磷酸50mL，称重，超声提取15分钟，放冷至室温，补足减失重量，过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液ImL至25mL容量瓶中， 水定容至刻度，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得；测定法取对照品溶液、供试品溶液，分别进样10 μ L，测定，即得； 总黄酮采用三氯化铝比色法测定；对照品溶液的制备称取芦丁对照品25mg，置50mL容量瓶中，精密称定，加乙醇溶解定容至刻度，摇勻，制成每ImL含0. 5mg的溶液，即得；标准曲线的制备精密吸取芦丁对照品溶液0、0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5mL分别置IOmL容量瓶中，各加0. lmol/L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法，在406nm波长下测吸光度；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标， 绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 5g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加65%乙醇20mL，70°C超声提取lh，过滤，滤液定容至25mL容量瓶中，摇勻；精密吸取供试品溶液2mL，加0. lmol/L的三氯化铝溶液2mL，0. 2mol/L的NaAC缓冲溶液lmL，NaAC缓冲溶液先用HAC调pH = 5. 1，用乙醇定容至刻度，摇勻，室温静置30min，以相应试剂为空白，照中国药典紫外分光光度法， 在406nm波长下测吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得；总多酚采用Folin-Denis法测定；对照品溶液的制备称取没食子酸对照品60mg精密称定，置50mL容量瓶中，加60%乙醇溶解定容至刻度摇勻；精密量取lmL，置50mL容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度摇勻，即可；标准曲线的制备精密吸取2^gmg/mL的没食子酸对照溶液2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、 7mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL水定容至刻度，70°C水浴加热 40min,以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；测定法称取刺梨粉0. 2g，置25mL平底烧瓶中，精密称定，加60%乙醇15mL，100HZ超声提取30min，共1次，过滤，合并滤液，至50mL容量瓶中，水定容至刻度，摇勻；精密量取取供试品溶液0. 2mL置25mL容量瓶中，加磷钼酸显色剂3mL，7% Na2C035mL水定容至刻度，70°C水浴加热40min，以相应试剂作空白，照中国药典紫外分光光度法，在758nm处测定吸光度值，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的重量μ g，计算，即得。
14. 一种刺梨的炮制方法，其特征在于所述炮制方法为先在沸水上蒸Ι-lOmin，取出，间歇式微波干燥20-60min，干燥时真空度为0. 075MPa，功率800-3000w，即得。
全文摘要
本发明公开了一种刺梨的炮制方法及多指标检测方法；刺梨为贵州省民族药材，含有丰富的营养物质，具有多重药理活性，全身是宝，但是目前刺梨的检测方法比较简单，难以控制刺梨的质量，本发明通过制定能反应其性能特征的控制指标，所提供的检测方法简便、快速、重现性及稳定性好；所提供的炮制方法有助于保存刺梨中维生素C等有效成分。
文档编号G01N21/33GK102353745SQ201110249078
公开日2012年2月15日 申请日期2011年8月26日 优先权日2011年8月26日
发明者江帆, 潘丽丽, 蔡晓静, 黄俊学 申请人:贵州师范大学
专业数控铣床产品供应商
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