专利名称：一种中药组合物枸杞消渴制剂的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药组合物的质量检测方法，特别涉及一种中药组合物枸杞消渴制剂的质量检测方法，属于医药技术领域。
背景技术：
枸杞消渴胶囊为金诃藏药股份有限公司独家剂型产品，收载于中成药地方标准上升国家标准部分，标准编号WS-10701(ZD-0701)-2002。具有益气养阴、生津止渴的功效，主要用于气阴两虚所致消渴，II型糖尿病见上述症候者。对II型糖尿病有明显疗效，能有效控制血糖，也能够有效控制糖尿病并发症的发生。枸杞消渴胶囊是以鲜沙棘110g、鲜枸杞子160g、地骨皮125g、山楂50g、山药135g、麦芽65g、黄芪115g为原料药制得的胶囊制剂，其制备方法为鲜沙棘经压汁、浓缩后，冷冻干燥成粉；鲜枸杞子用胶体磨粉碎后冷冻干燥成粉；其余地骨皮等五味，加水煎煮两次，第一次2小时，第二次I. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为I. 05 I. 10 (50°C)的清膏，喷雾干燥成粉，加入沙棘、枸杞冻干粉，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。目前，枸杞消渴胶囊原质量标准只有鉴别项，对枸杞子、山药、黄芪甲苷进行了薄 层色谱定性鉴别，没有任何含量测定指标，不能有效控制该制剂的质量，现有技术中也未发现对枸杞消渴胶囊的其他质量检测方法方面的报道。因此，造成枸杞消渴胶囊制剂的质量检测不够准确可靠，质量标准急需提高。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种中药组合物枸杞消渴制剂的质量检测方法。发明概述本发明对现有的中药组合物枸杞消渴制剂质量标准进行了相应提高，在原标准的基础上增加了制剂中植物多糖的含量测定方法，黄芪甲苷的含量测定方法，进一步确保了该制剂的安全有效、质量可控。术语说明枸杞消渴胶囊是国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药品名称。枸杞消渴制剂包括枸杞消渴胶囊及用枸杞消渴胶囊原料药配方制备的其他制剂。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案一种枸杞消渴制剂的质量检测方法，该枸杞消渴制剂为由原料药鲜沙棘、鲜枸杞子、地骨皮、山楂、山药、麦芽、黄芪按药剂学常规方法制成的各种制剂，其特征是，它包括采用紫外-可见分光光度法对制剂中植物多糖进行含量测定的方法和对采用高效液相色谱法对黄芪中黄芪甲苷进行含量测定的方法。所述植物多糖的含量测定是以无水葡萄糖对照品，制备标准曲线，苯酚-硫酸法处理样品，使用紫外-可见分光光度计在490nm波长下测定吸光度值，从标准曲线上读出样品溶液中含葡萄糖的重量，计算，即得枸杞消渴制剂中植物多糖的含量。所述植物多糖的含量测定具体是
对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品25mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水适量溶解，稀释至刻度，摇匀，即得(每Iml中含无水葡萄糖0. lmg)。标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、I. 0ml，分别置具塞试管中，分别加水补至2. 0ml，各精密加入苯酚溶液1ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，摇匀，室温显色30分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录VA)，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法取中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂粗粉约0. ro. 3g，精密称定，加入80%乙醇100ml，加热回流I小时，趁热滤过，滤渣与滤器用热80%乙醇30ml分次洗涤,弃去80%乙醇液。滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水100ml，加热回流2小时，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置具塞试管中，加水I. 0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入苯酚溶液lml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。所述黄芪甲苷的含量测定是以黄芪甲苷对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比(3(T40) : (70飞0)的乙腈-水为流动相，照高效液相色谱法测定，以外标两点法对数方程计算，即得枸杞消渴胶囊中黄芪甲苷的含量。其中以乙腈-水体积份数比35:65为优选。所述黄芪甲苷的含量测定具体是照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相；流动相体积份数比为3(T40:7(T60 ;蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ；对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. 3 0. 4mg的溶液，即得；供试品溶液的制备中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂研细后，取4 6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇4(T60ml，称定重量，加热回流0. 5 I. 5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，浓缩至干，残渣加20ml水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取五次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液浓缩至干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液10iil、20ia，供试品溶液l(T20iil，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。所述制剂为原料药组成为鲜沙棘110重量份、鲜枸杞子160重量份、地骨皮125重量份、山楂50重量份、山药135重量份、麦芽65重量份、黄芪115重量份的中药组合物，质量检测方法包括
植物多糖的含量测定对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品25mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水适量溶解，稀释至刻度，摇匀，即得(每Iml中含无水葡萄糖0. lmg)。标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、I. 0ml，分别置具塞试管中，分别加水补至2. 0ml，各精密加入苯酚溶液1ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，摇匀，室温显色30分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录VA)，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 测定法取中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂粗粉约0. 2g，精密称定，加入80%乙醇100ml，加热回流I小时，趁热滤过，滤渣与滤器用热80%乙醇30ml分次洗涤，弃去80%乙醇液。滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水100ml，加热回流2小时，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取lml，置具塞试管中，加水I. 0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入苯酚溶液lml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，SP得。本发明中药组合物枸杞消渴胶囊内容物或其制剂中植物多糖含量以葡萄糖(C6H12O6)计不得少于 76mg/g。黄芪甲苷的含量测定照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相；流动相体积份数比为35:65 ;蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ；对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. 35mg的溶液，即得；供试品溶液的制备中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂研细后，取5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，浓缩至干，残渣加20ml水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取五次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液浓缩至干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液10iil、20ia，供试品溶液lOiU，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。本发明中药组合物枸杞消渴胶囊内容物或其制剂中黄芪甲苷(C41H68O14)的含量不得少于0. 5mg/g0所述制剂是指取中药组合物枸杞消渴胶囊原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括丸剂、微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/1。枸杞消渴制剂处方为鲜沙棘、鲜枸杞子、地骨皮、山楂、山药、麦芽、黄芪。其中枸杞为方中主药，枸杞中枸杞多糖能够增强免疫功能、降血脂、保护肝脏、抗氧化，抗衰老、抗肿瘤，为主要成分。黄芪中黄芪多糖具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用。同时沙棘多糖、地骨皮多糖含量均相当丰富，且药理作用明确。故控制该制剂中总多糖的含量，有利于整体药品安全性、有效性及质量均一性的控制。黄芪中黄芪甲苷具有可改善心肺功能，加强心脏收缩力，扩张血管，降低血压，改善皮肤血液循环和营养状况；并能保护肝脏，防止肝糖元减少，对慢性活动性肝炎，有良好作用。黄芪还有诱生干扰素和调动机体免疫功能的作用，能抑制病毒繁殖和肿瘤生长。增强免疫力，增加能量，抗疲劳，使突变，保肝，抑制破骨细胞的作用。控制制剂中黄芪甲苷的含量有利于制剂安全性、有效性及质量均一性的控制。枸杞消渴中含有大量皂苷类物质，其性质相似，不易测定，本法选择黄芪中有效成分黄芪甲苷，经过条件的优�。⒅柿靠刂品椒�。本法使用紫外分光光度法对制剂中多糖类成分进行整体控制，同时使用专属性、重复性强的HPLC法对黄芪甲苷进行了质量控制，从不同角度保证率制剂的质量，使枸杞消 渴的疗效得到保证。中药组合物枸杞消渴胶囊原质量标准只有鉴别项，没有任何含量测定指标，使得枸杞消渴胶囊制剂的质量检测不够准确可靠，质量标准有待提高。本发明对现有的中药组合物枸杞消渴胶囊质量标准进行了相应提高，采用苯酚-硫酸比色法对该制剂中的植物多糖进行了含量测定，采用高效液相色谱法对该制剂中的黄芪甲苷进行了定量检测。本发明在原标准的基础上增加了枸杞消渴胶囊中植物多糖、黄芪甲苷的含量测定方法，确保了该制剂的安全有效、质量可控。同时本法还可用于枸杞消渴胶囊的其他制剂，如枸杞消渴颗粒、枸杞消渴胶囊、枸杞消渴片等。
图I是葡萄糖线性关系图；图2是黄芪甲苷对照品溶液高效液相色谱图；图3是黄芪对照药材溶液高效液相色谱图；图4是中药组合物秦皮接骨胶囊黄芪供试品溶液高效液相色谱图；图5是中药组合物秦皮接骨胶囊缺黄芪阴性对照溶液高效液相色谱图；图6是黄芪甲苷线性关系图。其中，图2、图3、图4、图5的横坐标是时间，单位分钟(Minutes);纵坐标是电压，单位伏特(Volts)。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作详细的阐述，但不限于这些具体记载的实施例。所检测的中药组合物枸杞消渴胶囊为青海金诃藏药药业股份有限公司产售。实验例I :植物多糖的含量测定实验I.仪器、试药和供试样品仪器岛津UV-2450紫外-可见分光光度计；岛津AuW220D电子天平。对照品无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所)，批号110833-200503。样品枸杞消渴胶囊(青海金诃藏药药业股份有限公司)，批号20110301、20110302、20110303。2.对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品25mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水适量溶解，稀释至刻度，摇勻，即得(每Iml中含无水葡萄糖0. lmg)。
3.检测波长的选择称取对照品溶液1ml，分别经苯酚-硫酸体系显色后，用紫外-可见分光光度计在400nnT600nm作全波长扫描，确定最大吸收波长。根据紫外吸收图谱可知，对照品溶液经苯酹-硫酸体系显色后，在400nnT600nm波长范围内扫描,最大吸收在490nm,故选定490nm为检测波长。4.标准曲线的制备和线性关系的考察精密量取对照品溶液(104.08 u g/ml) 0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、I. Oml，分别
置具塞试管中，分别加水补至2. 0ml，各精密加入苯酚溶液lml，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，摇匀，室温显色30分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录VA)，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程A=O. 0205C+0. 0093，相关系数R=O. 9998。结果表明，葡萄糖在2.60iig/mfl3.01iig/ml范围内，吸光度(A)与对照品浓度(C)线性关系良好。结果见图I和表I。表I多糖测定线性关系考察结果
......1￥,4S照晶浓度 C(JIgZnil) iilt A
~I2.6020.062
25.2040.118
37,8060.16
410.4080.223
513.0100.2765.样品溶液测定取中药组合物枸杞消渴胶囊内容物粗粉约0. 2g，精密称定，加入80%乙醇100ml，加热回流I小时，趁热滤过，滤渣与滤器用热80%乙醇30ml分次洗涤，弃去80%乙醇液。滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水100ml，加热回流2小时，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置具塞试管中，加水I. 0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入苯酚溶液lml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量(mg)，计算，即得。6.精密度试验精密量取葡萄糖对照品溶液0. 5ml6份，分别加水补至2. 0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入苯酚溶液lml”起，依法测定吸光度。测定结果，RSD=O. 96%(n=6)。结果表明，仪器精密度良好。见表2。表2多糖测定精密度试验结果
权利要求
1.一种枸杞消渴制剂的质量检测方法，该枸杞消渴制剂为由原料药鲜沙棘、鲜枸杞子、地骨皮、山楂、山药、麦芽、黄芪按药剂学常规方法制成的各种制剂，其特征是，它包括采用紫外-可见分光光度法对制剂中植物多糖进行含量测定的方法和采用高效液相色谱法对黄芪中黄芪甲苷进行含量测定的方法。
2.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述植物多糖的含量测定是以无水葡萄糖对照品，制备标准曲线，苯酚-硫酸法处理样品，使用紫外-可见分光光度计在490nm波长下测定吸光度值，从标准曲线上读出样品溶液中含葡萄糖的重量，计算，即得枸杞消渴制剂中植物多糖的含量。
3.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述植物多糖的含量测定具体是 对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品25mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水适量溶解，稀释至刻度，摇匀，即得； 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、I. 0ml，分别置具塞试管中，分别加水补至2. Oml,各精密加入苯酹溶液Iml,摇勻，迅速精密加入硫酸5ml,摇匀，室温显色30分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线； 测定法取中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂粗粉约0. ro. 3g，精密称定，加入80%乙醇100ml，加热回流I小时，趁热滤过，滤渣与滤器用热80%乙醇30ml分次洗涤，弃去80%乙醇液；滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水100ml，加热回流2小时，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取lml，置具塞试管中，加水I. 0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入苯酚溶液Iml ”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量，计算，即得。
4.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述黄芪甲苷的含量测定是以黄芪甲苷对照品为对照，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积份数比(3(T40) : (70^60)的乙腈-水为流动相，照高效液相色谱法测定，以外标两点法对数方程计算，即得枸杞消渴胶囊中黄芪甲苷的含量。
5.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述黄芪甲苷的含量测定具体是 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相；流动相体积份数比为3(T40:7(T60 ;蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ； 对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. 3^0. 4mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂研细后，取4 6g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇4(T60ml，称定重量，加热回流0. 5 1.5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，浓缩至干，残渣加20ml水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取五次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液浓缩至干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液10iil、20ia，供试品溶液l(T20iil，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
6.如权利要求I所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂为原料药组成为鲜沙棘110重量份、鲜枸杞子160重量份、地骨皮125重量份、山楂50重量份、山药135重量份、麦芽65重量份、黄芪115重量份的中药组合物，其质量检测方法是 植物多糖的含量测定 对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品25mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水适量溶解，稀释至刻度，摇匀，即得； 标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 2ml,0. 4ml,0. 6ml,0. 8ml、l. 0ml，分别置具塞试管中，分别加水补至2. Oml,各精密加入苯酹溶液Iml,摇勻，迅速精密加入硫酸5ml,摇匀，室温显色30分钟，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在490nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线； 测定法取中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂粗粉约0. 2g，精密称定，加入80%乙醇100ml，加热回流I小时，趁热滤过，滤渣与滤器用热80 %乙醇30ml分次洗涤，弃去80%乙醇液；滤渣连同滤纸置烧瓶中，加水100ml，加热回流2小时，趁热滤过，用少量热水洗涤滤器，合并滤液与洗液，放冷，移至250ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取lml，置具塞试管中，加水I. 0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“各精密加入苯酚溶液lml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量，计算，即得； 黄芪甲苷的含量测定 照高效液相色谱法测定； 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相；流动相体积份数比为35:65 ;蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000 ； 对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含0. 35mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备中药组合物枸杞消渴制剂内容物或其制剂研细后，取5g，精密称定，置具塞的锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流I小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml，浓缩至干，残渣加20ml水微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取五次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液浓缩至干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得； 测定法分别精密吸取对照品溶液10iil、20ia，供试品溶液10 iil，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
7.如权利要求1-6任一项所述的质量检测方法，其特征是，所述制剂是指取中药组合物枸杞消渴胶囊原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括丸剂、微丸、滴丸、片剂、胶囊、颗粒、饮片或分散片。
全文摘要
本发明公开了一种中药组合物枸杞消渴制剂的质量检测方法。本发明对现有的中药组合物枸杞消渴胶囊质量标准进行了相应提高，它包括采用紫外-可见分光光度法对制剂中植物多糖进行含量测定的方法和对采用高效液相色谱法对黄芪中黄芪甲苷进行含量测定的方法。该质量检测方法在原质量标准定性鉴别的基础上，增加了枸杞消渴制剂中植物多糖、黄芪甲苷的含量测定方法，使枸杞消渴制剂的质量检测更加准确可靠，确保了该制剂的安全有效、质量可控。
文档编号G01N30/02GK102749299SQ201210243460
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月13日 优先权日2012年7月13日
发明者任松鹏, 刘玉芹, 孙泰俊, 孙绪丁, 李丽 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司
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