专利名称：微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及免疫胶体金检测试剂盒，尤其涉及微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒。
背景技术：
蛋白尿指尿蛋白定量检查大于150mg/24h尿或定性试验阳性。白蛋白尿阳性指定量检查白蛋白尿>30mg/24h尿。尿白蛋白排泄率(AER)的正常值<30mg/d(20iig/min);持续的尿白蛋白排泄率介于30-300mg/d(20-200 ii g/min)称为微量白蛋白尿；尿白蛋白排泄率超过300mg/d(200 V- g/min)即为显性蛋白尿。目前广泛应用于临床尿蛋白的检测方法主要有24h尿蛋白定量检查、随机尿样尿液试纸定性检查、随机尿样白蛋白定量及随机尿样或者晨尿白蛋白/肌酐比值(ACR)等。 24h蛋白定量检查被目前认为是检测蛋白尿的金标准，然而其需要准确采集24h尿液标本，不仅耗时长而且影响因素多，患者顺应性差，难以常规检測。尿液试纸定性检查主要包括磺基水杨酸法和加热こ酸法。标本均采集随机尿样，操作简便、结果显示快。前者与清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周蛋白均能发生反应援但有一定的假阳性。后者是经典方法，为蛋白定性确证实验。检测尿蛋白特异性强、干扰因素少，与清蛋白和球蛋白均能反应。试纸定性法主要缺点是检测灵敏度低，因样本的随机性而影响因素多，结果变异大。此外还有一些检测方法是半定量试纸检测，针对常规定量检测阴性的标本,Clinitek微量白蛋白试纸和Micral_2试纸测试可检测微量尿白蛋白，其敏感性和特异性分别为80-97%和33%-80%。尿白蛋白定量检查摇常规检测方法有免疫散射比浊法、免疫透射比浊法和放射免疫法，由于采集随机尿液检测，因此影响因素多，结果变异大。以上内容摘自朱旻霞倪兆慧，2型糖尿病患者微量白蛋白尿的早期检测及治疗新认识，中国中西医结合肾病杂志，2011，12 (2) :180-182。但是总体来说上述方法均不能满足现在临床大量样本或少量样本的快速精确定量測定的要求。
实用新型内容本实用新型的目的是从提高检测准确度出发，提供一种与金标读数仪配套使用的微量尿白蛋白(MAU)胶体金定量检测试剂盒。本实用新型采用了下述技术方案来解决上述技术问题 ー种微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，其中，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察ロ，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗人白蛋白单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的两条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有人白蛋白，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。进ー步的，所述两条检测线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近免疫胶体金纸片端，质控线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近吸水纸端。进ー步的，所述盒盖的加样孔位于所述试剂条的滤样纸之上，部分滤样纸裸露于所述加样孔之中，所述盒盖的观察ロ位于所述试剂条的免疫硝酸纤维素膜之上，所述免疫硝酸纤维素膜上的检测线与质控线完全或部分裸露 于所述观察ロ之中。进ー步的，所述加样孔贯穿盒盖且为方形开ロ。进ー步的，所述观察ロ贯穿盒盖且为方形开ロ。进ー步的，所述盒盖与盒座的边缘相匹配且相互粘合，或者盒盖与盒座上设有对应的卡合或扣合连接部件，并可经所述连接部件相卡合或扣合。所述胶体金标记抗人白蛋白单克隆抗体可采用抗人白蛋白单克隆抗体常规方法标记胶体金获得。微量尿白蛋白(MAU)检测试剂盒(胶体金法)中试剂条的主要生产エ艺过程包括I)胶体金标记抗人白蛋白单克隆抗体用柠檬酸钠还原法制备胶体金，并用制备好的胶体金标记抗人白蛋白单克隆抗体；2)免疫胶体金纸片的制备将胶体金-抗人白蛋白单克隆抗体稀释到一定浓度干燥在玻璃纤维素纸片上；3)免疫硝酸纤维素膜的制备将人白蛋白溶液稀释到适宜浓度，微机自动点膜到硝酸纤维素膜上制|I\、T2线；4)贴膜、切裁、干燥制得半成品将免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸、滤样纸粘贴在粘胶纸上，组成MAU检测试剂卡，将卡片分切成试剂条，干燥后即得。上述MAU胶体金检测试剂盒的工作原理，即是利用高度特异的抗体-抗原特异结合反应及免疫膜层析技术，通过竞争抑制法来定量检测人尿浆中出现的MAU水平。试剂盒纤维膜上的检测线(T1、T2线)包被有人白蛋白，免疫胶体金纸片上包被有抗人白蛋白单克隆抗体胶体金复合物。检测时，被检样品首先与抗人白蛋白单克隆抗体胶体金混合，并沿纤维膜向上层析依次通过T1线、T2线、C线。如果样品中有MAU存在，MAU首先和抗人白蛋白单克隆抗体胶体金结合，形成“尿白蛋白-杭人白蛋白单克隆抗体胶体金复合物”，在层析至检测线时，由于抗体位点被结合而不能与检测线上的尿白蛋白结合，仅在质控线出现ー红色条带。如果样品中没有MAU，抗人白蛋白单克隆抗体层析至检测线时，会与检测线上的人白蛋白结合，而在检测区上呈现1-2条红色条带。在试纸条上的质控区(C线)包被有羊抗人IgG，以指示试剂盒反应系统工作是否正常。质控线的出现与MAU的存在无关。质控区色带的出现表明①样品加入量充足；②样品在纸条上运行正常。本实用新型试剂盒的使用方法为I.将试剂盒放置在水平台面上。2.用加样吸管吸取样品，然后滴3滴(约120ul)样品到试剂盒的加样孔中。每检测ー份不同的样品注意要使用不同的吸管。3.观察结果在滴加样品后3-8分钟判读結果，显色稳定后插入金标读数仪插槽内进行定量检测。[0030]检测结果的定性判断方法阳性在结果观察窗口内出现一条色带，即质控线(C线)位置出现一条红色线条，表示样品中有MAU存在。阴性在结果观察窗ロ的质控线(C线)位置出现一条红色线条，检测线(1\、T2线)出现一条或两条线条，表示样品无MAU存在。无效质控线(C线)不出现。任何情况下，C线均应形成，表示加样和操作正确。C线未出现表明测试结果是不确定的，应重做。本实用新型提供的微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒敏感性高、特异性强、操作简便省吋，检测结果准确、稳定，适合定性及定量检测样本中的微量尿白蛋白。
图I :MAU胶体金定量检测试剂盒示意图图2:去盒盖的MAU胶体金定量检测试剂盒示意图图3:MAU胶体金定量检测试剂盒的试剂条侧视示意图
具体实施方式
如图1-3所示微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，包括盒座I、盒盖2和试剂条3，其中，试剂条3固定于盒座I中部且位于盒座I与盒盖2之间，盒盖上设有加样孔12与观察ロ 13。试剂条3包括底层与上层，底层为塑料薄片4，上层依次头尾相接排列有滤样纸5、免疫胶体金纸片6、免疫硝酸纤维素膜7和吸水纸8，免疫胶体金纸片6上包被有胶体金标记抗人白蛋白单克隆抗体，免疫硝酸纤维素膜7上设有平行的两条检测线9、10和一条质控线11，检测线9、10上包被有人白蛋白，质控线11上包被有羊抗鼠IgG。进ー步的，所述两条检测线9、10靠近免疫硝酸纤维素膜7的近免疫胶体金纸片端，质控线11靠近免疫硝酸纤维素膜7的近吸水纸端。进ー步的，盒盖的加样孔12位于试剂条的滤样纸5之上，部分滤样纸裸露于加样孔12之中，盒盖的观察ロ 13位于试剂条的免疫硝酸纤维素膜7之上，免疫硝酸纤维素膜上的检测线9、10与质控线11完全或部分裸露于观察ロ 13之中。进ー步的，加样孔12贯穿盒盖且为方形开ロ。进ー步的，观察ロ 13贯穿盒盖且为方形开ロ。进ー步的，盒盖2与盒座I的边缘相匹配且相互粘合。
权利要求1.ー种微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察ロ，其特征在于，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记抗人白蛋白单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的两条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有人白蛋白，所述质控线上包被有羊抗鼠IgG。
2.如权利要求I所述微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述两条检测线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近免疫胶体金纸片端，质控线靠近所述免疫硝酸纤维素膜的近吸水纸端。
3.如权利要求2所述微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述盒盖的加样孔位于所述试剂条的滤样纸之上,部分滤样纸裸露于所述加样孔之中，所述盒盖的观察ロ位于所述试剂条的免疫硝酸纤维素膜之上，所述免疫硝酸纤维素膜上的检测线与质控线完全或部分裸露于所述观察ロ之中。
4.如权利要求3所述微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述加样孔贯穿盒盖且为方形开ロ。
5.如权利要求3所述微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，其特征在干，所述观察ロ贯穿盒盖且为方形开ロ。
6.如权利要求I所述微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒，其特征在于，所述盒盖与盒座的边缘相匹配且相互粘合，或者盒盖与盒座上设有对应的卡合或扣合连接部件，并经所述连接部件相卡合或扣合。
专利摘要本实用新型涉及一种微量尿白蛋白(MAU)胶体金定量检测试剂盒，包括盒座、盒盖和试剂条，所述试剂条固定于所述盒座中部且位于所述盒座与所述盒盖之间，所述盒盖上设有加样孔与观察口，其中，所述试剂条包括底层与上层，所述底层为塑料薄片，所述上层依次头尾相接排列有滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记人白蛋白单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有平行的两条检测线和一条质控线，所述检测线上包被有人白蛋白，所述质控线上包被有羊抗人IgG。本实用新型的微量尿白蛋白胶体金定量检测试剂盒适合定性及定量检测样本中的微量尿白蛋白。
文档编号G01N33/68GK202512121SQ20122006646
公开日2012年10月31日 申请日期2012年2月27日 优先权日2012年2月27日
发明者张国华 申请人:上�？瓷锛际跤邢薰�
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