专利名称：一种污水急性生物毒性的检测方法
技术领域：
本发明属于环境水体的检测方法领域，具体涉及一种污水急性生物毒性的检测方法。
背景技术：
污水急性生物毒性检测方法主要有鱼类急性毒性实验、水蚤类毒性实验、藻类毒性实验、微生物毒性实验等。其中，微生物毒性实验多采用发光细菌法，因其检测时间短、费用低，对实验条件和试验场地要求也较低，已得到广泛的应用。然而，对天然水样直接进行发光细菌毒性试验常会因水体中存在一些可刺激发光细菌发光、生长的“非毒性”共存物质，而导致检测结果不稳定，重现性差。例如对NH3-N或 PO4-P含量高的水体，由于其可刺激细菌发光或可作为细菌营养物质的作用掩盖了多种有机污染物的毒性，可能会低估一些物质的毒性，进而导致试验结果误差较大，重复性差。除此之外，现有的方法对于检测过程中样品和菌种的具体用量没有明确规定，导致了检测结果存在不确定性，难以精确定量表述。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种污水急性生物毒性的检测方法，该方法通过对污水样品进行萃取和浓缩处理，排除无机成分的干扰，从而能利用淡水发光细菌——青海弧菌Q67进行定量检测，保证检测结果准确、稳定、重现性好。为实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案
一种污水急性生物毒性的检测方法，其特征在于，所述方法按下列步骤进行 步骤一，样品处理
按照标准取样方法采取污水样，并对样品进行如下处理
(1)依次将7mL的二氯甲烷、7 mL的甲醇、7 mL的纯水通过C18固相萃取小柱对柱子进行润湿活化；
(2)取500mL经0.45 Mm滤膜过滤后的污水样上柱，使污水样连续通过C18固相萃取小柱，并调节真空泵使流出液流速为3mL/min ；
(3)待污水样全部流出柱后用5mL纯水过洗柱子，接着继续真空抽气干燥15 min，而后将C18固相萃取小柱放入离心机中离心；
(4)用二氯甲烷洗脱柱子，收集洗脱液，并将所得洗脱液用高纯氮气吹干，然后用5mL 体积分数为0. 5%的二甲基亚砜溶解所得吹干物，得到浓缩样品溶液；
(5)将浓缩样品溶液用0.9%的生理盐水配制成一系列浓度梯度的待检测样品溶液； 步骤二，青海弧菌Q67菌悬液的制备
(1)将青海弧菌Q67菌种转接到50mL液体培养基中，22°C条件下，培养10 12 h ；
(2)将得到的菌体培养液在12000rmp条件下离心10 min后弃去上清液，接着对沉淀的菌体细胞进行3次洗涤即用10 mL质量分数为0. 9%的生理盐水重悬、12000 rmp离
4心10 min，然后将经洗涤的菌体细胞用10 mL 0. 9%的生理盐水重悬，得到青海弧菌Q67菌悬液；
步骤三，污水样急性生物毒性的检测
对步骤一中所得到的每个待检测样品溶液进行如下检测
(1)在1.5 mL样品检测管中加入100 μ 待检测样品溶液，并取100 μ 0. 9%的生理盐水加入1. 5 mL对照检测管中作为空白对照样，其中样品及空白对照样均有；Γ5个平行样；
(2)上述各检测管中分别加入100μ 青海弧菌Q67菌悬液，且各检测管之间加菌悬液的时间间隔为15 s ；
(3)菌悬液加入完900s后，采用发光细菌检测仪，按照加青海弧菌Q67菌悬液的检测管的顺序，依次对各样品及对照样进行发光强度检测，读取其相对发光值；
步骤四，结果计算
权利要求
1.一种污水急性生物毒性的检测方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行步骤一，样品处理按照标准取样方法采取污水样，并对样品进行如下处理(1)依次将7mL的二氯甲烷、7mL的甲醇、7mL的纯水通过C18固相萃取小柱对柱子进行润湿活化；(2)取500mL经0.45 Mm滤膜过滤后的污水样上柱，使污水样连续通过C18固相萃取小柱，并调节真空泵使流出液流速为3mL/min ；(3)待污水样全部流出柱后用5mL纯水过洗柱子，接着继续真空抽气干燥15 min，而后将C18固相萃取小柱放入离心机中离心；(4)用二氯甲烷洗脱柱子，收集洗脱液，并将所得洗脱液用高纯氮气吹干，然后用5mL 体积分数为0. 5%的二甲基亚砜溶解所得吹干物，得到浓缩样品溶液；(5)将浓缩样品溶液用0.9%的生理盐水配制成系列浓度梯度的待检测样品溶液；步骤二，青海弧菌Q67菌悬液的制备(1)将青海弧菌Q67菌种转接到50mL液体培养基中，22°C条件下，培养10 12 h ；(2)将得到的菌体培养液在12000rmp条件下离心10 min后弃去上清液，接着对沉淀的菌体细胞进行3次洗涤即用10 mL 0.9%的生理盐水重悬、12000 rmp离心10 min，然后将经洗涤的菌体细胞用10 mL 0. 9%的生理盐水重悬，得到青海弧菌Q67菌悬液；步骤三，污水样急性生物毒性的检测对步骤一中所得到的每个待检测样品溶液进行如下检测(1)在1.5mL样品检测管中加入100 PL待检测样品溶液，并取100 μ 0.9%的生理盐水加入1. 5 mL对照检测管中作为空白对照样，其中样品及空白对照样均有3飞个平行样；(2)上述各检测管中分别加入100μ 青海弧菌Q67菌悬液，且各检测管之间加菌悬液的时间间隔为15 s ；(3)菌悬液加入完900s后，采用发光细菌检测仪，按照加青海弧菌Q67菌悬液的检测管的顺序，依次对各样品及对照样进行发光强度检测，读取其相对发光值；步骤四，结果计算(1)计算出对照样的相对发光值平均值忍和不同浓度待检测样品的相对发光值平均值/，按(式Α)计算出不同浓度待检测样品对发光细菌的相对抑制率万；￡(03) = IizixiOOS (式 Α)1 r.(2)以待检测样品的浓度为纵坐标，以不同浓度待检测样品的相对抑制率A为横坐标作定量标准曲线，并从该曲线上读取出相对抑制率为50%时所对应的浓度，即半数发光抑制率浓度EC5tl，EC50值越大，毒性越�。�(3)用(式B)计算总影响指数πι5(ι，并以此来反映污水样品的生物毒性，πι5(ι值越大， 毒性越大；ΠΙ5;(0O)=-J-XIOOo,(式B)。IiC
2.如权利要求1所述的污水急性生物毒性的检测方法，其特征在于，步骤二中所述的液体培养基中各成分相对于蒸馏水质量的质量分数为胰胨0. 5%、酵母膏0. 5%、甘油 0. 3%, MgCl2 0. 32%、KBr 0. 02%、CaSO4 0. 01%、NaCl 0. 4%, KCl 0. 4%, pH 为 8. 5 士0. 5。
全文摘要
本发明属于环境水体的检测方法领域，具体涉及一种污水急性生物毒性的检测方法。该方法通过对污水样品中的有机物进行萃取和浓缩，排除无机物的干扰后，运用淡水发光细菌——青海弧菌Q67进行检测，建立了准确检测污水水样急性生态毒性的方法。本方法最终结果准确、稳定、重现性好，是对现有方法的有效改进。
文档编号G01N21/00GK102175606SQ20111002129
公开日2011年9月7日 申请日期2011年1月19日 优先权日2011年1月19日
发明者刘永军, 张爱宁, 王晓昌, 马晓妍 申请人:西安建筑科技大学
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