专利名称：十八味人参补气膏质量标准检测方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域。具体涉及十八味人参补气膏质量标准检测方法。
十八味人参补气膏为传统的煎膏剂，由人参、枸杞子、地黄、阿胶、五味子(制)、熟地黄、党参、女贞子(制)、麦芽(炒)、太子参、黄精(制)、谷芽(炒)、黄芪、玉竹、茯苓、当归、制何首乌、陈皮等十八味中药组成，具有补益气血，滋补肝肾的功效。用于身体虚弱，气短乏力，头晕耳鸣，腰膝酸软。方中以制何首乌为臣药，具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨的功效。
原质量标准中只对其中黄芪、陈皮、当归三味药进行了定性鉴别，但没有反映药物内在质量的指标成分的含量测定项，无法在生产中有效的保证产品的内在质量，进而药品疗效得不到保证。
本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，改进十八味人参补气膏原有质量标准，增加了其中制何首乌、五味子、枸杞子、女贞子和人参等五味药的定性鉴别，建立了制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。
本发明提供了十八味人参补气膏质量标准测方法，该方法包括对其中制何首乌、五味子、枸杞子、女贞子和人参的定性鉴别，建立了制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。
本发明提供的制何首乌、五味子、枸杞子、女贞子和人参的定性鉴别包括下列步骤1、制何首乌的薄层鉴别制何首乌含有大黄素，因此采用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提�。匝椋艿玫角逦谋〔闵淄�。取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄素对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺制何首乌的“十八味人参补气膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(30～5∶9～2∶2～0.3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，阴性无干扰。
2、五味子的薄层鉴别取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子醇甲对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺五味子的“十八味人参补气膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，对照品溶液3μl，分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10∶8～2∶1.5～0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，阴性样品无干扰。
3、枸杞子的薄层鉴别取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)30ml，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)20ml溶解后，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次20ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为对照药材溶液。取缺枸杞子的“十八味人参补气膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲酸(20～5)∶(6～1)∶(1.5～0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰。
4、女贞子的薄层鉴别取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺女贞子的“十八味人参补气膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10)∶(8～2)∶(1.5～0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。
5、人参的薄层鉴别取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，弃去溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液用水饱和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨试液50ml洗涤后，再用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗涤二次，每次50ml，弃去溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品，分别加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。取缺人参的“十八味人参补气膏”100g，同法制成阴性样品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(22～8)∶(10～4)∶(5～0.5)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与人参皂苷Re对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。(见图6)本发明对制何首乌含量测定进行了系列试验(1)仪器与试药(2)仪器Agilent--1100液相色谱仪；对照品来源于中国药品生物制品检定所(批号0844-200003，供含量测定用)；样品批号(1)030901 (2)030902 (3)030903试剂甲醇为色谱醇。
(2)色谱条件经过摸索，采用检测波长320nm，流速2.5～0.5ml/min，经试验，确定采用流动相乙腈-水(1～35∶99～65)。色谱柱C18(15cm×5μm)，柱温45～20℃。
(3)供试品制备方法取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(4)提取时间的选择取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，分别(a)振摇、(b)提取(超声处理或热回流或冷浸)5分钟、(c)提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟、(d)提取(超声处理或热回流或冷浸)15分钟、(f)提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液测定，结果见下表选择提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟可将所测成分完全提出。
提取时间
(5)标准曲线取不同浓度的2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液分别进样，以峰面积为纵坐标Y，进样量为横坐标X，做回归得标准曲线，结果表明2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量0.0366～5.49μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系，结果见下表。
标准曲线
(6)精密度试验精密量取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，进样分析，重复测定5次，记录峰面积，结果见下表。
精密度试验
(7)稳定性试验取同一供试品溶液分别在制备好后0小时、4小时、8小时、12小时、16小时注入液相色谱仪，进样测定结果，其峰面积均未见明显变化，说明供试品溶液较稳定，结果见下表。
稳定性试验
(8)重复性试验取样品(批号030901)25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，分别测定，结果见下表。
重复性试验
(9)加样回收率测定取样品(批号030901)15g，置烧杯中，精密称定，精密加入2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品一定量，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，分别测定，结果见下表。
加样回收率
(10)样品测定取样品(批号(1)030901(2)030902(3)030903)25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，分别测定，结果见下表样品测定
(11)阴性样品测定取不含制何首乌的样品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。注入液相色谱仪，进样10μl进行分析。结果对样品测定无干扰。(附色谱图)本发明提供了制何首乌含量测定的方法，该方法包括下列步骤照高效液相色谱法(中国药典2000年版附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用乙腈-水(1～35∶99～65)为流动相；检测波长为320nm。理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于6500～2000。
对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含36μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每g含制何首乌以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计，不得少于0.13mg。
为了考察质量标准提高后《十八味人参补气膏》的稳定性情况，进行了长期稳定性试验1、试验条件将市售包装《十八味人参补气膏》置于室温条件下(25℃±2℃)，相对湿度60％±10％，放置一定时间后进行观察，取样检测，重点考察性状，鉴别，含量，检查，卫生学检查项目。
2、测试结论《十八味人参补气膏》经一年多来产品稳定性试验表明，产品的理化性质和卫生学检查等重点考察项目均符合《十八味人参补气膏》质量标准要求，产品质量较为稳定。
长期稳定性试验批号030101(RT25℃±2℃和RH60％±10％)
长期稳定性试验批号030102 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)
长期稳定性试验批号030103 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)
图1制何首乌薄层色谱图(日光下)1、阴性样品2、样品3、大黄素对照品图2制何首乌薄层色谱图(氨蒸气熏)1、阴性样品2、样品3、大黄素对照品图3五味子薄层色薄层色谱图1、阴性样品2、样品3、五味子醇甲对照品图4枸杞子薄层色谱图1、阴性样品2、样品3、枸杞子对照药材图5女贞子薄层色谱图1、阴性样品2、样品3、齐墩果酸对照品图6人参薄层色谱图1、阴性样品2、样品3、人参皂苷Rg1+人参皂苷Rb14、人参皂苷Re图7制何首乌对照品色谱8制何首乌样品色谱9制何首乌阴性样品色谱图具体实施方式
实例一十八味人参补气膏检验批号030901鉴别(1)制何首乌薄层取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液(溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液备用)，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗涤，溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸(30～5∶9～2∶2～0.3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(2)五味子薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液，另取五味子醇甲对照品，加溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液3μl，分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10∶8～2∶1.5～0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)枸杞子薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液。另取枸杞子对照药材1g，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)30ml，提取(超声处理或热回流或冷浸)20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)20ml溶解后，用溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次20ml，合并溶剂(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲酸(20～5)∶(6～1)∶(1.5～0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)女贞子薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10)∶(8～2)∶(1.5～0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(5)人参鉴别取鉴别(1)项下的备用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，用水饱和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨试液50ml洗涤后，再用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗涤二次，每次50ml，弃去溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作为供试品溶液，另取人参皂苷Re对照品，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(22～8)∶(10～4)∶(5～0.5)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(6)制何首乌含量测定照高效液相色谱法(中国药典2000年版附录VID)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用乙腈-水(1～35∶99～65)为流动相；检测波长为320nm，理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于6500～2000对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含36μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
计算 制何首乌含量 结果 本品每g含制何首乌(以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计)0.170mg。
实例二批号030902按030901批检测，检测结果(1)五项鉴别均呈阳性，(2)每g含制何首乌(以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计)0.15mg。
实例三批号030903按030901批检测，检测结果(1)五项鉴别均呈阳性，(2)每g含制何首乌(以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)计)0.17mg。
权利要求
1.一种十八味人参补气膏质量标准检测方法，其特征在于该检测方法包括增加其中的制何首乌、五味子、枸杞子、女贞子和人参五味药的定性鉴别，建立了制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。
2.根据权利要求1所述的一种十八味人参补气膏质量标准检测方法，其特征在于其中所述的制何首乌、五味子、枸杞了、女贞子和人参的定性鉴别包括下列步骤鉴别(1)制何首乌薄层取本品100g，置锥形瓶中，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿200ml，摇匀，提取用超声处理、热回流或冷浸20分钟，放冷后，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿80ml使溶解，用溶剂醋酸乙酯、氯仿或乙醚提取二次，每次50ml，合并溶剂备用，用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿50ml洗涤，溶剂蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取大黄素对照品，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸30～5∶9～2∶2～0.3的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；(2)五味子薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液，另取五味子醇甲对照品，加溶剂醋酸乙酯、氯仿或乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液3μl，分别点于同一高效硅胶GF254薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸40～10∶8～2∶1.5～0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(3)枸杞子薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液，另取枸杞子对照药材1g，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿30ml，提取用超声处理、热回流或冷浸20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿20ml溶解后，用溶剂醋酸乙酯、氯仿或乙醚提取二次，每次20ml，合并溶剂蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮-甲酸20～5∶6～1∶1.5～0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)女贞子薄层鉴别取鉴别(1)项下的供试品溶液，另取齐墩果酸对照品，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸40～10∶8～2∶1.5～0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；(5)人参鉴别取鉴别(1)项下的备用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液，用水饱和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨试液50ml洗涤后，再用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿洗涤二次，每次50ml，弃去溶剂，蒸干，残渣加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液，另取人参皂苷Re对照品，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水22～8∶10～4∶5～0.510℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1所述的一种十八味人参补气膏质量标准检测方法，其特征在于其中所述的制何首乌中2、3、5、4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定包括下列步骤照高效液相色谱法测定(1)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，用乙腈-水1～35∶99～65为流动相；检测波长为320nm，理论塔板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不低于6500～2000；(2)对照品溶液的制备精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含36μg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取本品25g，置烧杯中，精密称定，加25ml溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿搅拌使溶解，转移至50ml量瓶中，用溶剂甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反复洗涤烧杯，洗液并入同一量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，摇匀，提取(超声处理或热回流或冷浸)10分钟，放冷后，加溶剂(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，本品每g含制何首乌以2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷C20H22O9计，不得少于0.13mg。
全文摘要
本发明属于中药技术领域。本发明公开了中药十八味人参补气膏质量标准检测方法。本发明改进了原有质量标准，进加了其中制何首乌、五味子、枸杞子、女贞子和人参等五味药的定性鉴别，建立了制何首乌中2、3、5、4’－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的含量测定。本发明的方法提高了质量标准，有利于产品稳定性和工业化生产的质量控制。
文档编号G01N33/15GK1743843SQ200410089328
公开日2006年3月8日 申请日期2004年12月9日 优先权日2004年12月9日
发明者徐福莺, 邵宝平, 谢松, 沈绣红 申请人:上海雷允上药业有限公司
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