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专利名称：一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法，属于药物分析技术领域。
背景技术：
有关物质检查是药品质量控制的重要指标。建立起准确测定杂质的检验方法尤其重要，要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，及其对分析方法的筛选与验证。盐酸美克洛嗪片在美国药典32版有收录。美国药典32版中收载此品种，制剂中有关物质检测方法主要存在以下两个问题I.在流动相比例发生微小改变时，该活性成分保留时间相对变化较大；2.该方法中设置流速为2.0ml/min，样品溶液浓度较大，对仪器，色谱柱损害较大且需要流动相的量很大
发明内容

本发明的目的是提供一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法。本发明盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法是采用高效液相色谱法，其色谱条件为色谱柱为苯基柱，规格为250 mmX 4. 6 mm，5 Mm ;流动相A为甲醇，B为pH 7. 0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0 — 5. Omin, A为80% ；5. 0 — 35. Omin, A由80%变为95% ；35. 0 — 35. Olmin, A 由 95% 变为 80% ;35. 01 — 45. Omin, A 为 80% ;流速 I. 0 ml/min ;检测波长225 nm ;柱温为30°C ;理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000 ；
测定方法本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为60-90%，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，静置取上层液体滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，力口稀释剂溶解制成Iml中含10 ii g盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20 iil，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20% 30%，取供试品溶液20 u 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。本发明中所使用色谱柱可以为通用的苯基柱，优选为型号为Kromasil 100-5Phenyl的色谱柱。本发明中样品溶液配制过程中用到的稀释剂为流动相A和B混合溶液，其中A为60-90%, A的比例优选为80%。本发明所述梯度洗脱中流动相的百分比和稀释剂中的百分比均为常温下的体积比。为证实该方法准确可靠，重复性好，能够用于控制盐酸美克洛嗪片的有关物质，进行如下方法学验证
I.仪器与试药
I.I仪器高效液相色谱仪，Shimadzu LC-20AT ;色谱工作站，Shimadzu LC Solution ;分析天平，梅特勒托利多；PH计，梅特勒托利多。I. 2 试药
盐酸美克洛嗪片，自制，制剂配方为盐酸美克洛嗪50. 0g、微晶纤维素PH102 40. 0g、乳糖FlowlaclOO :320g、预交化淀粉:20g、磷酸氢钙:50g、PEG6000 :7. 5g、硬脂酸镁7. 5g、微粉硅胶5. 0g，工艺采用粉末直接压片法；盐酸美克洛嗪对照品，USP ;甲醇，色谱纯；其它均为分析纯。2.方法
2.I检测波长的选择
经二极管阵列检测器采集光谱图分析，可显示各主要峰在200 400 nm之间吸收光 谱，选择各杂质峰及主峰均有较强吸收的波长作为检测波长。2. 2流动相条件考察
实验中分别以甲醇-磷酸盐缓冲溶液、甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲溶液等不同浓度、不同比例的流动相系统进行等度和梯度洗脱试验，比较上述各条件下的色谱图，选择分离效果最佳、时间尽可能短的流动相条件。2. 3色谱柱的选择
选择十八烧基键合娃胶为填料(LI)的型号为Phenomenex Gemini C18和苯基键合娃胶为填料(Lll)的型号为Kromasil 100-5 Phenyl的色谱柱,按照确定的色谱条件分别进行试验。以主峰与杂质峰及主要杂质间分离状况为指标，考察不同类型的色谱柱对分离效果的影响。2. 4专属性试验
专属性试验
酸破坏取本品细粉适量(约相当于盐酸美克洛嗪约50 mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声IOmin后加lmol/L盐酸10ml，放置80°C水浴中2小时，取出并冷至室温，用lmol/L氢氧化钠溶液中和，加稀释剂至刻度，摇匀，经0. 45 ii m滤膜滤过，取续滤液20 yl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。碱破坏取本品细粉适量(约相当于盐酸美克洛嗪约50mg)，置50ml容量瓶中，力口15ml稀释剂超声IOmin后加lmol/L氢氧化钠10ml，放置60°C水浴中2小时，取出并冷至室温，用lmol/L盐酸溶液中和，加稀释剂至刻度，摇匀，经0. 45 y m滤膜滤过，取续滤液20 U 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。光照破坏取本品细粉适量置扁称量瓶中，于强光(照度45001x±5001x)下照射10天。取细粉适量(约相当于盐酸美克洛嗪约50mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声lOmin，冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0. 45 ii m滤膜滤过，取续滤液20 U 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。高温破坏取本品细粉适量置扁称量瓶中，于60°C烘箱中放置10天。取细粉适量(约相当于盐酸美克洛嗪约50mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声IOmin,冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0. 45 y m滤膜滤过，取续滤液20 Ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。氧化破坏取本品细粉适量(约相当于盐酸美克洛嗪约50mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀释剂超声lOmin，加H2O2 (3%) 10ml，于室温放置24小时，加稀释剂至刻度，摇匀，经
0.45 um滤膜滤过，取续滤液20 ill，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。高湿破坏取本品细粉适量(约相当于盐酸美克洛嗪约50mg)置50ml容量瓶中，于湿度为75%±5%的环境中放置10天。加15ml稀释剂超声lOmin，冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0. 45 ii m滤膜滤过，取续滤液20 ill，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。辅料干扰试验取按处方配比不含盐酸美克洛嗪的细粉适量(约相当于盐酸美克洛嗪约50mg)，置50ml容量瓶中，加适量稀释剂超声lOmin，冷至室温后加稀释剂至刻度，摇匀，经0. 45 ii m滤膜滤过，取续滤液20 ill，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。2. 5检测限
取对照品溶液，采用逐级稀释法，依次进样。当信噪比(S/N)约为3时，此对应的盐酸美克洛嗪的量为检测限。 2. 6溶液稳定性试验
依法配制的供试品溶液和对照品溶液，在O、2、4、6、8、12、24h时测定，分别计算相对标准偏差，考察其稳定性。2. 7重复性
取同一批盐酸美克洛嗪片制备6份供试品溶液，分别进样测定并记录色谱图及峰面积，计算相对标准偏差。2. 8耐用性试验
缓冲盐的PH值变化将缓冲盐溶液的pH分别调为6. 8,7. 0,7. 2，依法测定同一溶液。柱温变化将柱温分别设置为28°C、30°C、32°C，依法测定同一溶液。流速变化将流速分别设置为0. 9ml/min、l. Oml/min、l. lml/min,依法测定同一溶液。2. 9样品测定
取本品依法测定有关物质，记录色谱图。2. 10与美国药典方法对比试验
分别采用美国药典描述的方法和本发明提供的方法，测定同一溶液(以酸破坏、碱破坏、氧化破坏后盐酸美克洛嗪样品溶液为例)记录色谱图。3.结果
3. I经二极管阵列检测器采集紫外-可见光谱图分析，杂质峰在225 nm均有较强吸收，故检测波长选为225 nm。参见图I-图9。3. 2根据不同流动相条件下色谱图分析，确定甲醇-磷酸盐缓冲溶液为流动相的梯度洗脱条件。不同流动相的色谱图见

图10-图14。3. 3以主峰与杂质峰及主要杂质间分离状况为指标，根据不同类型的色谱柱对分离效果，选择Kromasil 100-5 Phenyl色谱柱。色谱图见图14-图15。 3.4酸破坏、碱破坏、氧化破坏、高温破坏、光照破坏、高湿破坏、辅料干扰试验色谱图见图16-图22。破坏性试验图谱表明，本方法可有效分离盐酸美克洛嗪的各种杂质，且辅料没有干扰。3. 5当信噪比(S/N)约为3时，盐酸美克洛嗪的最低检出限为0. 65ng，色谱图见图23。3. 6溶液稳定性结果见表1，可见样品溶液和对照溶液在24h内的稳定。表I溶液稳定性实验结果
权利要求
1.一种盐酸美克洛嗪片有关物质的测定方法，该方法采用高效液相色谱法，其特征在于所述高效液相色谱法的色谱条件为色谱柱为苯基柱，规格为250 mmX4. 6 mm, 5 Mm ；流动相A为甲醇，B为pH7. 0的磷酸氢二铵溶液；梯度洗脱程序为0 — 5. Omin, A为80% ；5.0 — 35. Omin, A 由 80% 变为 95% ；35. 0 — 35. Olmin, A 由 95% 变为 80% ；35. 01 — 45. Omin,A为80% ;流速I. Oml/min ;检测波长225 nm ;柱温为30°C ;理论板数以盐酸美克洛嗪计应不低于2000 ； 测定方法本品10片，研细，取相当于盐酸美克洛嗪50mg的粉末，精密称定，置50ml容量瓶中，以流动相A和B混合溶液为稀释剂，其中A为60-90%，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，静置取上层液体滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密称取盐酸美克洛嗪对照品，加稀释剂溶解制成Iml中含IOii g盐酸美克洛嗪的溶液，作为对照溶液；取对照溶液20 iil，注入高效液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分峰高为记录仪满量程的20% 30 %，取供试品溶液20 ill，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中主峰峰面积的一半，各杂质峰面积之和不得大于对照溶液中主峰峰面积。
2.根据权利要求I所述的测定方法，其特征在于色谱柱为Kromasil100-5苯基色谱柱。
3.根据权利要求I或2任一项所述的测定方法，其特征在于所述稀释剂为流动相A和B混合溶液，其中A为80%。
全文摘要
本发明提供了一种测定盐酸美克洛嗪片有关物质的稳定性指示性分析方法。盐酸美克洛嗪为第一代哌嗪类抗组胺剂，适用于晕动症引起恶心、呕吐、头晕的治疗和预防并对前庭疾病引起的眩晕也有效。本发明采用高效液相色谱法对盐酸美克洛嗪片有关物质进行测定，可用于盐酸美克洛嗪片的质量控制。
文档编号G01N30/02GK102778514SQ20111012021
公开日2012年11月14日 申请日期2011年5月11日 优先权日2011年5月11日
发明者张梅华, 杨超, 郝褔, 马静 申请人:北京以岭生物工程技术有限公司