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专利名称：一种辣椒粉hplc指纹图谱的构建方法
技术领域：
本发明涉及一种调味品指纹图谱的构建方法，特别涉及一种辣椒粉HPLC指纹图谱的构建方法。
背景技术：
辣椒粉是红色或红黄色，油润而均匀的粉末，是由红辣椒、黄辣椒、辣椒籽及部分辣椒杆碾细而成的混合物，具有辣椒固有的辣香味。辣椒粉是香精生产中的常用原料之一，其质量控制是香精产品稳定性的指标之一。指纹图谱能够比较全面地反映辣椒粉所含化学成分的种类、数量及相互之间的比例等信息，进而有效地表征其内在质量。本专利申请旨在建立一套基于HPLC数据的辣椒粉指纹图谱分析检测方法，为辣椒粉的质量控制提供科学的依据和指导。

发明内容
本发明的目的是提供一种辣椒粉HPLC指纹图谱的构建方法以及由此方法所得到的辣椒粉标准指纹图谱，通过该标准指纹图谱为辣椒粉的质量控制提供科学的依据和指导。为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种辣椒粉HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤I)、供试品溶液的制备称取5g辣椒粉于50mL带塞试管中，加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 : I (体积比))，加塞摇匀后，于60°C水温下进行超声波提取20min，用滤纸过滤后收集滤液，再加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))，于60°C水温下超声提取lOmin，用滤纸过滤后收集滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发器在70°C浓缩至20mL，而后用甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))定容至50mL,经O. 2 μ m微孔滤膜过滤后进行色谱分析。2)、高效液相色谱条件安捷伦1200型高效液相色谱仪(四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，DAD检测器及ChemStation色谱工作站)色谱柱ZORBAXEclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 μ m) 流动相组成为甲醇冰=65 35 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C，DAD扫描波长280nm，参比波长360nm，进样量10 μ L。在此条件下分析供试品溶液，得到辣椒粉的指纹图谱。一种由上述所述构建方法得到的辣椒粉标准指纹图谱，该标准指纹图谱通过对10批次辣椒粉采用上述方法建立的指纹图谱的分析比较，确定了 2个共有特征峰，其保留时间分别为9. 886min, 15. 219min，这些共有特征峰构成了辣椒粉的指纹特征，可作为辣椒粉的标准指纹图谱。
一种辣椒粉HPLC指纹图谱的分析检测方法，包括如下步骤I)、辣椒粉成分的提取称取5g辣椒粉于50mL带塞试管中，加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 : I (体积比))，加塞摇匀后，于60°C水温下进行超声波提取20min，用滤纸过滤后收集滤液，再加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))，于60°C水温下超声提取lOmin，用滤纸过滤后收集滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发器在70°C浓缩至20mL，而后用甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))定容至50mL,经O. 2 μ m微孔滤膜过滤后，即为待测液，进行色谱分析。2)、高效液相色谱条件·安捷伦1200型高效液相色谱仪(四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，DAD检测器及ChemStation色谱工作站)色谱柱ZORBAXEclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 μ m)流动相组成为甲醇水=65 35 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C，DAD扫描波长280nm，参比波长360nm，进样量10 μ L。在此条件下分析步骤I)制得的待测液，得到辣椒粉的指纹图谱，并与上述得到的辣椒粉标准指纹图谱进行分析比较。本发明所具有的优点和有益效果为本发明制得的辣椒粉标准指纹图谱适用于对辣椒粉质量的鉴别和控制，且辣椒粉的分析检测方法制作简便，色谱条件容易实现，方法的稳定性和重现性都比较好。


图I为某一辣椒粉样品的HPLC色谱图；图2为标准辣椒素类物质色谱图；图3为本发明得到的辣椒粉的标准指纹图谱，图中从左到右分别标出了其共有特征峰I号、2号，通过与标准辣椒素类物质比对，I号峰为辣椒素，2号峰为二氢辣椒素。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。实施例I一种辣椒粉HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤I)、供试品溶液的制备称取5g辣椒粉于50mL带塞试管中，加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 : I (体积比))，加塞摇匀后，于60°C水温下进行超声波提取20min，用滤纸过滤后收集滤液，再加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))，于60°C水温下超声提取lOmin，用滤纸过滤后收集滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发器在70°C浓缩至20mL，而后用甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))定容至50mL,经O. 2 μ m微孔滤膜过滤后，得供试品溶液，进行色谱分析。2)、高效液相色谱条件安捷伦1200型高效液相色谱仪(四元泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱，DAD检测器及ChemStation色谱工作站)色谱柱Z0RBAXEclipse XDB-C18 (4· 6 X 150mm，5 μ m)流动相组成为甲醇水=65 35 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C，DAD扫描波长280nm，参比波长360nm，进样量10 μ L。在此条件下分析供试品溶液，得到辣椒粉的指纹图谱。在此条件下，分析某一辣椒粉样品，得HPLC色谱图，如图I所示。按照上述方法对10批次辣椒粉建立指纹图谱，记录色谱图，确定了 2个共有特征峰，其保留时间分别为9. 886min, 15. 219min，这些共有特征峰构成了辣椒粉的指纹特征，可作为辣椒粉的标准指纹图谱，如图3所示，并通过与图2标准辣椒素类物质色谱图对比可知1号峰为辣椒素，2号峰为二氢辣椒素。 其中以2号峰的色谱峰分离度好、强度高，并且为所有批次图的共有峰，因此选择为参照物峰，且在进行稳定性和精密度考察试验时选用2号峰的数据进行计算。方法学考察稳定性试验取同一供试溶液，分别在0、3、6、9、12、15、18、21、24h不同时间点检
测指纹图谱，再用夹角余弦相似度计算样品与Oh样品相似度的RSD值。以评价样品和仪器的稳定性。结果显示相似度RSD值为3. 8%。说明供试溶液与测试仪器在24h内基本稳定，没有明显变化，符合指纹图谱检测的要求。精密度试验取同一供试溶液，连续进样6次，利用夹角余弦相似度计算，将后5次进样的图谱分别与第I次进样图谱进行相似度计算，得出后5个样品相似度的RSD值，用以评价该方法的精密度。结果显示其相似度RSD值为2. 6%。说明实验的总体精密度良好，符合指纹图谱检测的要求。
权利要求
1.一种辣椒粉HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于包括如下步骤 1)、供试品溶液的制备 称取5g辣椒粉于50mL带塞试管中，加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))，加塞摇匀后，于60°C水温下进行超声波提取20min，用滤纸过滤后收集滤液，再加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 : I (体积比))，于60°C水温下超声提取lOmin，用滤纸过滤后收集滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发器在70°C浓缩至20mL，而后用甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 : I (体积比))定容至50mL，经0. 2 y m微孔滤膜过滤后进行色谱分析； 2)、高效液相色谱条件 安捷伦1200型高效液相色谱仪色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 y m) 流动相组成为甲醇水=65 35 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C，DAD扫描波长280nm,参比波长360nm，进样量IOyL; 在此条件下分析供试品溶液，得到辣椒粉的指纹图谱。
2.一种由上述所述构建方法得到的辣椒粉标准指纹图谱，其特征在于该标准指纹图谱通过对10批次辣椒粉采用上述方法建立的指纹图谱的分析比较，确定了 2个共有特征峰，其保留时间分别为9. 886min, 15. 219min，这些共有特征峰构成了辣椒粉的指纹特征，可作为辣椒粉的标准指纹图谱。
3.一种辣椒粉HPLC指纹图谱的分析检测方法，其特征在于包括如下步骤 1)、辣椒粉成分的提取 称取5g辣椒粉于50mL带塞试管中，加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))，加塞摇匀后，于60°C水温下进行超声波提取20min，用滤纸过滤后收集滤液，再加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))，于60°C水温下超声提取lOmin，用滤纸过滤后收集滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发器在70°C浓缩至20mL，而后用甲醇和四氢呋喃混合液(甲醇四氢呋喃=1 1(体积比))定容至50mL，经0. 2 y m微孔滤膜过滤后，即为待测液，进行色谱分析； 2)、高效液相色谱条件 安捷伦1200型高效液相色谱仪色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18 (4. 6 X 150mm，5 y m) 流动相组成为甲醇水=65 35 (体积比)，流速I. OmL/min,柱温30°C，DAD扫描波长280nm,参比波长360nm，进样量IOyL; 在此条件下分析步骤I)制得的待测液，得到辣椒粉的指纹图谱，并与权利要求2得到的辣椒粉标准指纹图谱进行分析比较。
全文摘要
本发明涉及一种辣椒粉HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤1)、供试品溶液的制备称取5g辣椒粉于50mL带塞试管中，加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液，加塞摇匀后，于60℃水温下进行超声波提取20min，用滤纸过滤后收集滤液，再加入25mL甲醇和四氢呋喃混合液，于60℃水温下超声提取10min，用滤纸过滤后收集滤液，合并两次滤液，用旋转蒸发器在70℃浓缩至20mL，而后用甲醇和四氢呋喃混合液定容至50mL，经0.2μm微孔滤膜过滤后进行色谱分析，得到辣椒粉的指纹图谱。本发明制得的辣椒粉标准指纹图谱适用于对辣椒粉质量的鉴别和控制，且辣椒粉的分析检测方法制作简便，色谱条件容易实现，方法的稳定性和重现性都比较好。
文档编号G01N30/12GK102759595SQ201210260468
公开日2012年10月31日 申请日期2012年7月26日 优先权日2012年7月26日
发明者刘娜 申请人:天津春发生物科技集团有限公司