专利名称：：艾迪制剂中人参皂苷含量测定方法
技术领域：
：本发明涉及艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，属于对药品进行质量控制的
技术领域：
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背景技术：
：癌症是严重威胁人类健康的一大类疾病，艾迪注射制剂主要由斑蝥、人参、黄芪和刺五加组成，具有清热解毒、消瘀散结的作用，主要用于原发性肝癌，肺癌，直肠癌，恶性淋巴瘤，妇科恶性肿瘤等疾病。其中"艾迪注射液"刊登在中药部颁标准第20册。但是随着社会的发展，对于药品的质量控制的要求越来越高，而且对于寻找快捷方便可控的检测方法的需求也越来越迫切，本发明人经过研究发现，现有艾迪制剂质量控制标准中，对人参中人参皂苷的含量测定采用的紫外分光光度法准确度不高、分辨率低，有杂质吸收峰、对实验结果有影响；同时原方法中人参中的有效成分是以人参皂苷Re计，但是随着研究进展，己知人参中起作用的有效成分包含人参皂苷Rgl、Re和Rbl等。因此，采用原方法对人参含量测定的分析和测定不够准确和细化，故现有质量控制方法不能有效控制艾迪注射制剂的质量，从而将影响该制剂的临床疗效。
发明内容本发明的目的在于提供一种艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，该制剂包括冻干粉针剂、输液剂和水针剂。本发明在现有技术的基础上，采用了高效液相色谱法，取代紫外分光光度法，提高了含量测定的准确度、精密度和分辨率，降低杂质含量；以乙腈、水为流动相进行梯度洗脱，使得人参中人参皂苷Rgl、Re和Rbl得到有效分离，从而使得艾迪制剂的质量控制标准更加完善，从而保证了该制剂的临床疗效。本发明所述艾迪制剂是由斑蝥0.5-5、人参20-80、黄芪200-600、刺五加100-200按照如下方法制备而成以上四味，人参切片，用20-85%乙醇加热回流提取1-5次，合并提取液，滤过，回收乙醇，药液备用；药渣与其余斑蝥等三味加水煎煮1-6次，合并煎液，滤过，滤液与人参提取液合并，以石硫法沉淀处理卜3次，所得上清液加乙醇使含醇量达50-99%，静置过夜，取上清液减压回收乙醇至无醇味，再按照常规方法分别制成冻干粉针剂、输液剂或水针剂。本发明所述艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法是对制剂中人参所含人参皂苷Rgl、Re和Rbl的含量测定。是以人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rbl对照品为对照，以乙腈、水为流动相进行梯度洗脱的高效液相色谱法。其中梯度洗脱参数为乙腈为流动相A，水为流动相B;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)03516-223555(16-22)—(26-32)557026-32_70100_(26-32)—(44-50)艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法为照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)03516-2278-843555(16-22)—(26-32)(78-84)—(68-74)557026-3268-7470100(26-32)—(44-50)(68-74)—(50-56)对照品溶液的制备取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂，用水饱和的正丁醇提取3-6次，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C^82(U和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H820l8)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H82018)和Rbl(CMH92023)的总量不得少于0.02mg/ml。更具体的人参皂苷含量测定方法为照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)03516-2278-843555(16-22)—(26-32)(78-84)—(68-74)557026-3268-7470100(26-32)—(44-50)(68-74)—(50-56)对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含O.l-0.4mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；578-84(78-84)—(68-74)68-74(68-74)—(50-56)供试品溶液的制备精密量取本制剂25-lOOml，用水饱和的正丁醇提取4-6次，每次15-30ml,合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤卜3次，每次10-30ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5-20uL，注入液相色谱仪，测定；该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H7A4)、人参皂苷Re(UH820,8)和Rbl(a,H9A3)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C4fiH820ls)和Rbl(C54H9202:,)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(UH820l8)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。本发明含量测定方法是经过大量的筛选试验得到的最佳方案，以下实验研究为本发明的优选过程一、方法研究人参皂苷为艾迪制剂中的有效成份之一，原标准中是采用紫外分光光度法测定其中人参皂苷Re的含量，但是由于此法分辨率低，有杂质吸收峰，准确度低，对实验结果有影响，为了解决该问题，我们进行了修改人参皂苷含量测定的方法学研究。1.仪器岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；LC-lOATvp输液泵；SPD-M10Avp二级管阵列检测器；SCL-lOAvp系统控制器；CTO-lOASvp恒温箱；CLASS-VP6.13工作站数据处理系统。2.试药乙腈(色谱纯，迪马公司)；纯净水；人参皂苷Rgl对照品(中国生物制品鉴定所，含量测定用，批号110703-200424);人参皂苷Re对照品(中国生物制品鉴定所，含量测定用，批号110754-200320);人参皂苷Rbl对照品(中国生物制品鉴定所，含量测定用，批号110704-200318)。3.色谱条件色谱柱HyspersilODS2(5um，4.6X200画)大连依利特公司生产；流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为203nm;柱温35°C;理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000。进样量1020ul。时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)03516-2278-843555(16-22)—(26-32)(78-84)—(68-74)557026-3268-7470100(26-32)—(44-50)(68-74)—(50-56)4.系统适用性试验分别精密吸取人参皂苷Rgl、Re、Rbl混合对照品溶液和供试品溶液及缺人参的阴性对照溶液各IOPL注入液相色谱仪，记录色谱。从图谱可知，在此色谱条件下，各组份峰与其他组份峰分离完全，在与各组份峰相同的保留时间处，阴性样品无干扰。人参皂苷Rgl、Re、Rbl和相近的杂质峰分离完全(Rgl分离度〉1.5;Re分离度〉1.5;Rbl分离度〉1.5)，即本试验条件下Rgl、Re、Rbl与其他组分分离完全。理论塔板数以人参皂苷Rgl计为6000。5.线性关系考察1)对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl12.14mg、Re13.75mg、Rbl12.75mg，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得每lml含人参皂苷Rgl0.2428mg、Re0.275mg、Rbl0.255mg的混合对照品溶液，即得对照品溶液。2)标准曲线绘制分别精密吸取人参皂苷Rgl0.2428mg、Re0.275mg、Rbl0.255mg的混合对照品溶液2、5、10、15、20iU，注入液相色谱仪，分别测定其峰面积(见下表)，记录色谱图，分别以Rgl峰面积A、Re峰面积A、Rbl峰面积A对质量数(iig)进行线性回归计算，分别得线性回归方程，Rgl:A=288474X+1121.9，r=0.9999;过原点方程为A=288793X，r=0.9999;线性范围0.4856ixg4.856ug;Re:A=271092X_1460.9，r=l;过原点方程为A=270726X，r=l;线性范围0.55ug5.5ug;Rbl:A=2322.77X+2887.9,r=l;过原点方程为A=232988X，r=l;线性范围0.51llg5.lUg;人参皂苷Rgl、Re、Rbl线性关系考察Rgl进样量Rgl峰面积Re进样量Re峰面积Rbl进样量Rbl峰面积"g)"g)"g)0.48561427070.551494660.511226271.2143469521.3753697661.2752969342.4287087962.757420472.555966053.64210449494.12511187853.8258892304.85614043625.514892495.111881126.供试品前处理方法研究1)正丁醇提取次数取冻干粉针750mg加注射用水50ml使溶解、或取输液250ml浓縮至50ml、或取水针剂50ml;分别精密量取上述药品，用水饱和的正丁醇提�。�2次每次25mL，然后每次用20mL再提取4次，合并正丁醇溶液，再用氨试液洗涤1-3次，每次20ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制成供试液分别测定人参皂苷Rgl、Re和Rbl含量，结果见下表正丁醇提取次数考察试验结果提取次数Rgl含量Re含量Rbl含量总皂苷含量(mg/支)(mg/支)(mg/支)(mg/支)30.0600.0590.0580.17740.0780.0840.0770.259750.0900.0980.0900.27860.0900.1020.0920.283结果表明，正丁醇提取3次，成分没有被完全提取,提取4次、5次、6次，成分完全提取且含量有增加，故我们选择提取4-6次为供试品制备参数。优选提取5次较为经济合理。2)供试品溶液的制备取冻干粉针750mg加注射用水50ml使溶解、或取输液250ml浓缩至50ml、或取水针剂50ml;分别精密量取上述药品，用水饱和的正丁醇提取5次，分别为25mL,25mL，20mL，20mL,20mL，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。7.精密度试验取人参皂苷Rgl、人参皂苷Re和人参皂苷Rbl混合对照品溶液(人参皂苷Rgl0.2428mg/ml、人参皂苷Re0.275mg/ml和人参皂苷Rbl0.255mg/ml)，连续进样6次，记录峰面积，结果见下表精密度试验结果实验次数A(Rgl)A(Re)A(Rbl)170037975264060213527001327474655910453708279755425604905470830776033260713957023917507675955896704384751159599148平均值703979752965599994RSD(%)0.520.591,00从上表可见，Rgl峰面积平均值为703979，RSD呢为0.52%;Re峰面积平均值为752965，RSD。/。为0.59%;Rbl峰面积平均值为599994，RSD呢为1.00%，表明精密度良好。8.重复性试验取本制剂，按供试品溶液的制备方法处理，分别制备6份供试品溶液，分别测定含量，结果见下表重复性试验结果试验次数Rgl(mg/支)Re(mg/支)Rbl(mg/支)总量(mg/支)10.09290.10110.09750.291520.09130.10160.09760.291530.09500.10140.09940.295840.09140.09910.09500.285650.09370.10050.09630.290660.09490.10360駕50.2950平均0扁20.10120.09710.2915<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>从上表可见，重复性好，方法可行。9.稳定性试验取本制剂，按供试品溶液的制备方法处理成供试品液，分别于0、8、14、24小时进样分析，记录结果如下表-稳定性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由上表可见，Rgl平均峰面积279263，RSD。/。为2.43%;Re平均峰面积281780，RSDW为1.24%;Rbl平均峰面积231502，RSDM为1.66%;说明艾迪制剂中三成分含量测定供试液在24小时内稳定性良好。10.回收率试验采用加样回收法试验，精密量取已知含量的同一批艾迪水针制剂样品(规格10ml/支，Rgl含量为0.0932mg/支、Re含量为0.1012mg/支、Rbl含量为0.0971mg/支)6份，各25ml，精密加入混合对照品溶液(人参皂苷Rgl1.225mg/ml、人参皂苷Re1.395mg/ml和人参皂苷Rbl1.39mg/ml)各0.2ml，再加纯化水25ml稀释，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供試品溶液各10pL，测定，计算含量，结果见下表艾迪注射液中Rgl、Re、Rbl测定的回收率试验<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由上表可见，Rgl平均回收率为102.1%,RSD为2.8。/。；Re平均回收率为100.0%，RSD为3.8%;Rbl平均回收率为100.9%，RSD为1.7。/。；说明艾迪注射液中Rgl、Re、Rbl测定方法可行。10.样品含量测定精密量取水针剂50ml，用水饱和的正丁醇提取5次，分别为25mL，25mL,20raL，20mL,20mL，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得，分别测定含量，按下式计算各成分含量v4/xCx5式中Ai:供试品峰面积积AS:对照品峰面积Cs:对照品浓度(mg/ml)V:供试品取样量(ml)IO批样品含量测定结果(n=2)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>根据10批样品含量测定结果，该艾迪水针制剂中含人参皂苷Rgl(UH72014)、人参皂苷Re(CHS20J和Rbl(C54HM02:!)的总量不得少于0.02mg/ml。由上述方法研究结果可知，采用本发明所述人参皂苷的含量测定方法，准确度高，试验精密、稳定、耐用，方法重现性好，是艾迪制剂中人参皂苷理想的含量测定方法。与现有技术相比，本发明质量控制方法改进了人参的含量测定方法，其精密度高，重现性好，稳定性好，回收率高，测量结果准确可靠，提高了艾迪制剂的质量控制标准，可有效地控制产品质量，从而确保其临床疗效。具体实施例方式以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。本发明的实施例l:含量测定人参皂苷Re照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含O.lmg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备精密量取本制剂25ml，用水饱和的正丁醇提取4次，分别为20ml、20ml、15ml、15ml，合并正丁醇溶液，用10ml氨试液洗涤，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5ixL，注入液相色谱仪，测定；该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C4晶20j和Rbl(C54H920M)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H820IS)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H8201S)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。本发明的实施例2:人参皂苷Re照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203mn。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)035198135~5519—2981—7155~70297170~10029—4771—53对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含0.2mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备精密量取本制剂50ml，用水饱和的正丁醇提取5次，分别为25mL，25mL，20mL，20mL，20mL，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10uL，注入液相色谱仪，测定，该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(UHsAs)和Rbl(CMH92023)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72Ol4)、人参皂苷Re(C48H820IS)和Rbl(CMH92023)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H82018)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。本发明的实施例3:照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0352278355522—3278—68557032687010032—5068—50对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含0.4mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备精密量取本制剂lOOml，用水饱和的正丁醇提取6次，分别为25mL，25mL，20mL，20mL，20mL，20mL,合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤3次，每次30ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20uL，注入液相色谱仪，测定；该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C站HsA8)和Rbl(C54H9202:,)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(UHS201S)和Rbl(C54H9202:,)的总量不得少于0.0025mg/ral;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H720M)、人参皂苷Re(C48HS20l8)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。本发明的实施例4:人参皂苷Re照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含0.3mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备精密量取本制剂75ml，用水饱和的正丁醇提取5次，分别为25mL,25mL，20raL,20mL,20mL，合并正丁醇溶液，用20ml氨试液洗涤，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各15uL，注入液相色谱仪，测定，该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H720M)、人参皂苷Re(C化H820j和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H720,4)、人参皂苷Re(QHsAs)和Rbl(C5孔2(U的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H82018)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。本发明的实施例5:人参皂苷Re照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含0.2rag的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备:精密量取本制剂60ml，用水饱和的正丁醇提取4次，分别为25mL,25mL，20mL,20mL，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各12uL，注入液相色谱仪，测定，该制剂中，冻千粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H82018WPRbl(CMH92023)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48HS2018)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(CH820,8)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。本发明的实施例6:人参皂苷Re照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)035208035~5520—3180—695570316970~10031—4969—51对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含O.lmg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备:精密量取本制剂40ml，用水饱和的正丁醇提取5次，分别为25mL，25mL，20mL，20mL，20mL，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤3次，每次10ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各8uL，注入液相色谱仪，测定，该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(UHs20w)和Rbl(CMH920M)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C4SHS2018)和Rbl(CMH9202:i)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48Hfi20l8)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。权利要求1.艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，其特征在于它是以人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品为对照，以乙腈、水为流动相进行梯度洗脱的高效液相色谱法。2.按照权利要求1所述艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，其特征在于梯度洗脱的参数为乙腈为流动相A，水为流动相B;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)03516-2278-843555(16-22)—(26-32)(78-84)—(68-74)557026-3268-7470100(26-32)—(44-50)(68-74)—(50-56)3.按照权利要求1所述艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，其特征在于含量测定方法为照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203rai。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)03516-2278-843555(16-22)—(26-32)(78-84)—(68-74)557026-3268-7470100(26-32)—(44-50)(68-74)—(50-56)对照品溶液的制备取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇溶解，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备取本制剂，用水饱和的正丁醇提取3-6次，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得;测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定；该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H82018)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H720M)、人参皂苷Re(CH8201S)和Rbl(CMH92023)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H820IS)和Rbl(C54HM023)的总量不得少于0.02mg/ml。4.按照权利要求1或3所述艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，其特征在于具体的含量测定方法为照中国药典2005版一部附录VID高效液相色谱法测定色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱，检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rgl峰计算应不低于6000;<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table>对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rgl对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rbl对照品，加甲醇制成每lmL各含O.l-0.4mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；供试品溶液的制备精密量取本制剂25-100ml，用水饱和的正丁醇提取4-6次，每次15-30ml，合并正丁醇溶液，用氨试液洗涤1-3次，每次10-30ml，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各5-20wL，注入液相色谱仪，测定；该制剂中，冻干粉针剂中含人参皂苷1^1((:4晶2014)、人参皂苷Re(C4晶2(U和Rbl(C5凡2023)的总量不得少于0.2%;输液剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48H82018)和Rbl(CMH9202:i)的总量不得少于0.0025mg/ml;水针剂中含人参皂苷Rgl(C42H72014)、人参皂苷Re(C48Hs2018)和Rbl(C54H92023)的总量不得少于0.02mg/ml。5.按照权利要求1所述艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，其特征在于该制剂包括冻干粉针剂、输液剂和水针剂。全文摘要本发明提供了艾迪制剂中人参皂苷的含量测定方法，是以人参皂苷Rg1、Re、Rb1对照品为对照，对制剂中人参所含有效成份人参皂苷Rg1、Re、Rb1进行含量测定。与现有技术相比，本发明采用两种流动相进行梯度洗脱的高效液相色谱法，改进了人参的含量测定方法，其精密度高，重现性好，稳定性好，回收率高，测量结果准确可靠，提高了艾迪制剂的质量控制标准，可有效地控制产品质量，从而确保其临床疗效。文档编号G01N30/02GK101614708SQ200810068789公开日2009年12月30日申请日期2008年6月26日优先权日2008年6月26日发明者朱亭潘,义杨,瑶林,窦啟玲申请人:贵州益佰制药股份有限公司
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