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专利名称：用于诊断或筛查丙型肝炎病毒感染的试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于诊断或筛查丙型肝炎病毒感染的试剂。
背景技术：
磷脂爬行酶I(PLSCRl)是既可以与丙型肝炎病毒(HCV)的包膜糖蛋白El又可以与包膜糖蛋白E2相互作用的宿主分子，是一个钙离子依赖的II型膜蛋白，其氨基端在胞内，羧基端在胞外，有一个较长的胞内区域(H90aa)及一个α螺旋的跨膜区域 (291-309aa)和一个很短的胞外区域(310-318aa)。PLSCRl在体内具有很多很重要的功能， 比如与细胞膜上磷脂酰丝氨酸跨膜活动相关；过表达PLSCRl抑制卵巢癌细胞的生长；与白血病的发病学相关；参与细胞内信号转导等。最新研究发现，PLSCRl还可与人类免疫缺陷病毒-l(Human immunodeficiency virus-1，HIV-1)的受体CD4存在相互作用并作为分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的受体。另外，有研究报道，结肠癌患者血清中PLSCRl高于正常人，并且发现结肠癌组织中PLSCRl含量高于良性结肠息肉组织和正常结肠组织。但关于 PLSCRl与HCV感染的关系未见报道。

发明内容
本发明的一个目的是提供一种诊断或辅助诊断丙型肝炎病毒感染的产品。本发明所提供的诊断或辅助诊断丙型肝炎病毒感染的产品，由检测磷脂爬行酶1 蛋白质浓度的物质组成。检测磷脂爬行酶1蛋白质浓度的物质在制备诊断或辅助诊断丙型肝炎病毒感染的产品中的应用也属于本发明的保护范围。本发明的另一个目的是提供一种筛查或辅助筛查丙型肝炎病毒感染的产品。本发明所提供的筛查或辅助筛查丙型肝炎病毒感染的产品，由检测磷脂爬行酶1 蛋白质浓度的物质组成。检测磷脂爬行酶1蛋白浓度的物质在制备筛查或辅助筛查丙型肝炎病毒感染的产品中的应用也属于本发明的保护范围。本发明所用的检测磷脂爬行酶1蛋白浓度的物质为人磷脂爬行酶I(PLSCRl) ELISA检测试剂盒，购自上海丰翔生物科技有限公司(美国RB公司进口分装)，产品目录号为 F11030。本发明通过ELISA实验检测丙型肝炎病毒感染患者血清及正常人血清中PLSCRl 含量，结果发现丙型肝炎病毒感染患者血清中PLSCRl含量明显高于正常人。PLSCRl可以用于临床上检测丙型肝炎病毒感染的分子标记物，具有重要的意义。


图1为HCV患者与正常人血清样本中PLSCRl蛋白浓度的u检验结果。
具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本发明中人磷脂爬行酶1的氨基酸序列如序列表中序列1所示。实施例1、诊断丙肝病毒感染的产品该产品为人磷脂爬行酶I(PLSCRl) ELISA检测试剂盒，购自上海丰翔生物科技有限公司(美国RB公司进口分装)，产品目录号为F11030。实施例2、利用实施例1的产品诊断丙型肝炎病毒感染1 材料1.1血清样本丙型肝炎病毒(HCV)检测阳性(无肝硬化及肝癌)患者血清样本22例；正常体检者血液样本144例(见表1)。血液样本由吉林大学第一医院、南京中国人民解放军第八一医院及北京体检中心提供。丙型肝炎病毒感染的临床检测方法丙型肝炎病毒抗体(HCV)诊断试剂盒(购自上海荣盛生物药业有限公司，产品目录号为5051A)。丙型肝炎病毒感染的临床诊断标准HCV阳性⑴。本发明的丙型肝炎病毒感染患者均按照上述鉴定由HCV感染所致丙型病毒性肝炎的方法进行检测，所述丙型病毒性肝炎患者均由HCV感染所致。正常体检者的判断标准HBV及HCV阴性㈠，肝功能检测正常。1. 2ELISA检测试剂盒人磷脂爬行酶1 (PLSCRl) ELISA检测试剂盒。2 方法2. 1血液样本处理-70°C保存的血液样本于室温放置溶解，1，000g，离心20分钟，取上清作为待测样品用于检测。2.2ELISA 检测采用上述人磷脂爬行酶1 (PLSCRl) ELISA检测试剂盒检测待测样品中PLSCRl蛋白浓度，具体操作步骤如下实验开始前，各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37°C溶解)；试剂或样品稀释时，均需混勻，混勻时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。(1)加样分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μ 1，余孔分别加标准品(ELISA检测试剂盒自带)或待测样品100μ1，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混勻，酶标板加上盖或覆膜，37°C反应120 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。(2)弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μ 1(在使用前一小时内配制)，酶标板加上覆膜，37°C反应60分钟。(3)温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约 400 μ 1/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
(4)每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100 μ 1，酶标板加上覆膜37°C反应60分钟。(5)温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350 μ 1/ 每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。(6)依序每孔加底物溶液90 μ 1，酶标板加上覆膜37°C避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。(7)依序每孔加终止溶液50 μ 1，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。(8)用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(0D值)。在加终止液后立即进行检测。同时，用与酶联仪相连的S0ftmaXpr05. 2软件根据标准品和待测样品的OD45tl值计算得到PLSCRl蛋白浓度(ng/ml)。3 结果HCV检测阳性(无肝硬化及肝癌)患者血清中PLSCRl蛋白浓度的检测结果见表 1 ；正常人血清中PLSCRl蛋白浓度的检测结果见表2。同时，将表1中所示的数据设为HCV 组，将表2中的数据设为HC组，将该两组数据用GraphPad Prism 5软件进行u检验分析， 结果见图1。从图1可见，HCV检测阳性(无肝硬化及肝癌)患者血清中PLSCRl蛋白浓度显著高于正常人血清中PLSCRl蛋白浓度(P < 0. 0001)。表IHCV患者血清样本中PLSCRl蛋白浓度的检测结果
权利要求
1.诊断或辅助诊断丙型肝炎病毒感染的产品，由检测磷脂爬行酶1蛋白质浓度的物质组成。
2.检测磷脂爬行酶1蛋白质浓度的物质在制备诊断或辅助诊断丙型肝炎病毒感染的产品中的应用。
3.筛查或辅助筛查丙型肝炎病毒感染的产品，由检测磷脂爬行酶1蛋白质浓度的物质组成。
4.检测磷脂爬行酶1蛋白质浓度的物质在制备筛查或辅助筛查丙型肝炎病毒感染的产品中的应用。
全文摘要
本发明公开了用于诊断或筛查丙型肝炎病毒感染的试剂。本发明所提供的用于诊断或筛查丙型肝炎病毒感染的试剂，由检测磷脂爬行酶1蛋白质浓度的物质组成。本发明通过ELISA实验检测丙型肝炎病毒感染患者血清及正常人血清中PLSCR1含量，结果发现丙型肝炎病毒感染患者血清中PLSCR1含量明显高于正常人。PLSCR1可以用于临床上检测丙型肝炎病毒感染的分子标记物，具有重要的意义。
文档编号G01N33/68GK102323426SQ20111022598
公开日2012年1月18日 申请日期2011年8月8日 优先权日2011年8月8日
发明者杨威, 王建, 贺福初, 龚巧玲 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所