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专利名称：一种洋水仙根尖染色体制片的方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种洋水仙根尖染色体制片的方法。
背景技术：
洋水仙又名荷兰水仙，是从欧洲引入我国的水仙新品种的统称，为石蒜科水仙属多年生草本植物。全世界约有40个原种，多数原产于地中海沿岸及欧洲中部。其花朵硕大， 花茎挺拔，副花冠多变，花色和谐，是世界著名的球根花卉，在世界各地广泛栽培和应用。染色体是基因的载体，染色体的数目、形态和结构，决定着细胞减数分裂中染色体的配对行为；配对行为的正常与否，决定着植物大小孢子育性的高低。因此，染色体的结构和行为支配着植物的生殖过程和繁育行为，研究染色体的数目、结构以及细胞学行为，对于了解植物的遗传背景，进而进行有选择的杂交育种具有重要的意义。然而，水仙倍性复杂，染色体基数有7、10、11不等，除二倍体外，还有三倍体和四倍体等。水仙属染色体数目变化范围极大，2η从14-46均有存在，此外还有三倍体和非整倍体等的存在，有的水仙品种可育，有的则表现为高度不育。综上可见，如果能找到洋水仙根尖染色体制片的最佳技术方法，对于其细胞遗传学的理论研究及育种实践具有重要的意义。

发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，找到一种操作简单方便的洋水仙根尖染色体的制片方法，使获得的染色体分散均勻，背景浅，易于观察。得出的染色体数目准确度高。本发明提供的技术方案如下Α.取材上午9-10时取生长旺盛的盆栽洋水仙白色新根1-1. 5cm。B.低温预处理将取下的根尖清洗干净，放入浓度为lg/L的秋水仙碱溶液中，在 0-5 °C冷藏条件下预处理4h。C.固定将预处理后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分，卡诺氏固定液(无水乙醇冰醋酸=3 1)固定20h。D.解离将固定后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分，在lmol/L盐酸60°C水浴中解离lOmin，用加入2-3滴lmol/L氢氧化钠(NaOH)的500ml蒸馏水漂洗3次。E.染色将解离后的根尖置于载玻片上，取根尖前端1. 5_2mm呈现出乳白色的根尖，用解剖刀将取下的根尖沿纵向切割成两部分，用吸水纸吸干根尖周围的水分，滴入1-2 滴卡宝品红染色剂，染色lOmin，然后用蒸馏水漂洗。F.压片将材料重新移至载玻片上，吸干材料周围水分，盖上盖玻片，再用拇指轻挤压盖玻片(不要使盖玻片移动)，使组织成为一薄层，轻轻敲击盖玻片，使细胞分散。G.镜检将压片置于Motic显微镜(德国麦克奥迪公司Motic系列)下观察，选择染色体分散、清晰的细胞进行显微照相，以便进行核型分析。同时可用记号笔在载玻片和盖玻片上分别做记号，以便再次观察和照相。本发明的积极效果是提供了一种适宜洋水仙染色体制片的方法，该制片方法操作简单方便，染色体分散均勻且背景较浅，染色体数目易计数，采用本方法制片得出的染色体数目准确度高。


图1是洋水仙‘嘹亮’(fortissimo)的染色体镜检结果和显微照相示意图。图2是洋水仙‘阿克拉’(Arkle)的染色体镜检结果和显微照相示意图。
具体实施例方式实施例1成功观察并统计出了洋水仙‘嘹亮’(i^rtissimo)的染色体数目。具体实施方法如下A.取材上午9-10时取生长旺盛的盆栽洋水仙‘嘹亮，Fortissimo)根尖 1-1. 5cm。B.低温预处理将取下的根尖清洗干净，放入浓度为lg/L的秋水仙碱溶液中，在 0-5 °C冷藏条件下预处理4h。C.固定将预处理后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分，采用卡诺氏固定液固定 20h，卡诺氏固定液为无水乙醇冰醋酸=3 1。D.解离将固定后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分，在lmol/L盐酸60°C水浴中解离lOmin，用加入2-3滴lmol/L氢氧化钠(NaOH)的500ml蒸馏水漂洗3次。E.染色将解离后的根尖置于载玻片上，取根尖前端1. 5_2mm呈现出乳白色的根尖，用解剖刀将取下的根尖沿纵向切割成两部分，用吸水纸吸干根尖周围的水分，滴入1-2 滴卡宝品红染色剂，染色lOmin，然后用蒸馏水漂洗。F.压片将材料重新移至载玻片上，吸干材料周围水分，盖上盖玻片，再用拇指轻挤压盖玻片(不要使盖玻片移动)，使组织成为一薄层，轻轻敲击盖玻片，使细胞分散。G.镜检将压片置于Motic显微镜(德国麦克奥迪公司Motic系列)下观察，选择染色体分散、清晰的细胞进行显微照相，以便进行核型分析。同时可用记号笔在载玻片和盖玻片上分别做记号，以便再次观察和照相。镜检结果和显微照相见图1。实施例2成功观察并统计出了洋水仙‘阿克拉’(Arkle)的染色体数目。具体实施方法同实施例1。镜检结果和显微照相见图2。以上在两个代表性洋水仙品种上的实施应用结果表明，本方法是一种有效的洋水仙染色体制片的方法，并且该制片方法操作简单方便，染色体分散均勻且背景较浅，染色体数目易计数，采用本方法制片得出的染色体数目准确度高。
权利要求
1. 一种洋水仙根尖染色体制片的方法，其特征是A.取材上午9-10时取生长旺盛的盆栽洋水仙白色新根1-1.5cm ；B.低温预处理将取下的根尖清洗干净，放入浓度为lg/L的秋水仙碱溶液中，在0-5°C 冷藏条件下预处理4h ；C.固定将预处理后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分，卡诺氏固定液固定20h；D.解离将固定后的新根用蒸馏水漂洗3次，吸干水分，在lmol/L盐酸60°C水浴中解离lOmin，用加入2-3滴lmol/L氢氧化钠的500ml蒸馏水漂洗3次；E.染色将解离后的根尖置于载玻片上，取根尖前端1.5-2mm呈现出乳白色的根尖，用解剖刀将取下的根尖沿纵向切割成两部分，用吸水纸吸干根尖周围的水分，滴入1-2滴卡宝品红染色剂，染色lOmin，然后用蒸馏水漂洗；F.压片将材料重新移至载玻片上，吸干材料周围水分，盖上盖玻片，再用拇指轻挤压盖玻片，使组织成为一薄层，轻轻敲击盖玻片，使细胞分散；G.镜检将压片置于Motic显微镜下观察，选择染色体分散、清晰的细胞进行显微照相，以便进行核型分析。
全文摘要
本发明提供一种洋水仙根尖染色体制片的方法，采用1g/L的秋水仙碱溶液进行低温预处理；卡诺氏固定液固定；1mol/L盐酸60℃水浴中解离10min，用加入少量NaOH的蒸馏水漂洗；将根尖沿纵向切割成两部分，卡宝品红染色剂染色10min，染色后用蒸馏水漂洗；压片法制片，在Motic显微镜下镜检和进行显微照相。本发明的制片方法操作简单方便，染色体分散均匀且背景较浅，染色体数目易计数，采用本方法制片得出的染色体数目准确度高。
文档编号G01N1/28GK102183394SQ20111005432
公开日2011年9月14日 申请日期2011年3月8日 优先权日2011年3月8日
发明者佟潇, 孙晓梅, 孙琪, 崔文山, 张丽杰, 杨宏光, 陆秀君 申请人:沈阳农业大学